抗戊型肝炎病毒IGG抗体定量线性标准品的标定及初步应用.pdf

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1、中国生物制品学杂志2 0 0 8 年9 月第2 1 卷第9 期C h i nJB i o l o g i e a hS e p t e m b e r2 0 0 8 。V 0 1 2 1N o 9 7 9 9 - 中国图书分类号R 3 9 2 - 3 3文献标识码A文章编号1 0 0 4 - S 5 0 3 ( 2 0 0 8 ) 0 9 - 0 7 9 9 - 0 4 抗戊型肝炎病毒I g G 抗体定量线性标准品的标定及初步应用 【诊断制品】 黄维金1 吴星- 周诚t 何鹏-葛胜祥2 乔杉3 张华远1 蓝海云1 辜文洁1 梁争论i 祁自柏t 李河民1 【摘要】目的建立抗戊型肝炎病毒( A n

2、 t i H E V ) I g G 抗体的定量线性标准品，并进行初步应用。方法利用抗H E VI g G 和抗H E YI g ME L I S A 检测试剂筛选出l 份抗H E VI S G 阳性血清L 9 ，经基因1 型和4 型的H E VO R F 2C 端抗原及2 3 9 抗原进 行W e s t e r nb l o t 确认后，用W H O 定量标准品，由3 个实验室协作标定，利用量反应平行线法计算其抗H E VI g G 的含量。考察已 标定的L 9 血清的稳定性，并用所标定的1 5 倍系列稀释的血清对国内外6 家抗H E Vk G 试剂的灵敏度进行检测。选择一灵敏 度较高的试

3、剂，在其线性范围内取L 9 的5 个稀释度作为抗H E VI g G 抗体定量线性标准，对高、中、低浓度的3 份临床血清重复 检测5 次，考察其重复性；对实验感染猴的系列血清中抗H E VI g G 含量进行定量检测，考核该定量线性标准品的应用效果；并 对每次定量试验中的线性方程进行分析，确定相关系数r 值和斜率k 值的范围。结果经国内外试剂检测筛选出的阳性血清L 9 与基因1 型和4 型的H E VO R F 2C 端抗原及2 3 9 抗原均有阳性反应。经协作标定。L 9 血清抗H E VI g G 含量为1 6 9U m l 。L 9 血清在一2 0 0 C 下保存6 、1 2 、1 8

4、个月，2 8 。C 保存2 4 、4 8 、9 6h 后，定量结果均在9 5 置信区间内，且抗H E VI g G 含量均未明显下降。 6 家抗H E VI g C 检测试剂灵敏度差异较大，范围为0 0 3 5 0 0U m l 。确定L 9 血清从0 4 2U m l 开始的5 个1 5 倍系列稀 释度，作为某一试剂抗H E VI S G 抗体定量线性标准品。利用该线性定量标准检测高、中、低浓度的3 份临床血清，定量结果重复 性较好；对实验感染猴系列血清进行定量检测结果可有效地反映抗体水平变化趋势；9 4 的定量检测试验，r 0 9 8 ，1 1 5 k 0 9 5 。结论已建立了抗H E

5、VI g G 抗体定量线性标准品，可用于疫苗免疫原性评价和流行病学调查。 【关键词】 戊型肝炎病毒；I g G 抗体；标准品；定量 C a l i b r a t i o na n dP r e l i m i n a r yA p p l i c a t i o no fL i n e a rQ u a n t i t a t i o nS t a n d a r df o r A n t i - H E VI g G A n t i b o d y H U A N GW e i - j i n ，W UX i n g , Z H O UC h e n g ，e ta l ( A N a t

6、 i o n dI n s t i t u t e 如r 舭C o n t r o lo fP h a r m a c e 以w da n dB i o - 如咖a fP r o d u c t s ，B e i j i n g1 0 0 0 5 0 ，C h i n a ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T od e v e l o pal i n e a rq u a n t i t a t i o ns t a n d a r df o ra n t i - h e p a t i t i sEv i r u s ( H E V ) I g Ca

7、 n t i b o d y M e t h o d s A na n t i H E VI g Gp o s i t i v es e r u ms a m p l eL 9w a ss c r e e n e db yu s i n gA n t i - H E VI g ME L I S Ak i ta n dA n t i H E VI g GE L I S Ak i ta n dc o n f u m e db yW e s t e r nb l o t t i n gw i t hH E VO R F 2C - t e r m i n a la n t i g e no fg e

8、n o t y p e sla n d4a n d 2 3 9a n t i g e n , t h e nc a l i b r a t e db y3l a b o r a t o - t i e su s i n gW H O q u a n t i t a t i o ns t a n d a r d C a l c u l a t et h ea n t i - H E VI S Gc o n t e n tb yd o s e r e s p o n s ep a r a l l e ll i n ea s s a y a n de v a l u a t et h e 刚a b

9、i l i t yo fc a l i b r a t e ds e r u ms a m p l e ，1 1 I es e n s i t i v i t i e so f6d o m e s t i ca n di m p o r t e da n t i - H E VI g GE L I S Ak i t sw e r ee v a l u a t e dw i t ht h ec a l i b r a t e ds e r u ms a m p l ed i l u t e d1 5 - f o l ds e r i a l l y Al i n e a rq u a n t i

10、 t a t i o ns t a n d a r df o ra n t i H E VI g Ga n t i b o d yc o n s i s t e do f5d i l u t i o n so fL 9 w i t h i nt h el i n e a rd e t e r m i n a t i o n 瑚I l g eo fah i g h l ys e n s i t i v ek i ta n de v a l u a t e df o rr e p r o d u c i b i l i t yb yr e p e a tt e s tf o r3c l i n i

11、 c a ls e r u m 蛐一 p l e a ，a th i g h ，m o d e r a t ea n dl o w 明t i H E VI g l Gc o n t e n t sr e s p e c t i v e l y ，f o r5t i m e s 7 n 地a n t i - H E VI g Gc o n t e n t si ns e r u ms a m p l e so f H E V i n f e c t e dm o n k e y sw e r ed e t e r m i n e db yt h es t a n d a n l , a n dt

12、 h ed e t e r m i n a t i o nC H I V e sw e r ea n a l y z e dt od e f i n ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n tr a n ds l o p e 知R e s u l t sS e r u ms a m p l eL 9s h o w e dp o s i t i v er e a c t i o nw i t hH E VO R F 2C - t e r m i n a la n t i g e no fg e n o t y p e sla n d4a n d2 3

13、9 a n t i g e n 。a n di t sa n t i H E VI g Cc o n t e n t 恤c a l i b r a t e d 船1 6 9U m 1 A f t e rs t o r a g ea t 一2 0 f o r6 ，1 2a n d1 8m o n t h so ra t2 8 f o r 2 4 ，4 8a n d9 6h ，a l lt h eq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o nr e s u l t sw e r ew i t h i nt h e9 5 C I a n da n t

14、 i - H E VI g Gc o n t e n ts h o w e dn os i g n i f i c a n t d e c r e a s e n es e n s i t i v i t i e so f6k i t se v a l u a t e dw i t ht h eL 9r a n g e df r o m0 0 3t o5 0 0U m 1 ，1 1 l el i n e a rq u a n t i t a t i o ns t a n d a r df o ra n t i H E VI 秘a n t i b o d yc o n s i s t e do

15、f5d i l u t i o n so fL 9 ，s t a r t i n gf r o mac o n c e n t r a t i o no f0 4 2U m 1 T h ed e t e r m i n a t i o nr e s u l t so f3c l i n i c a l s e m ms a m p l e ss h o w e dg o o dr e p r o d u c i b i l i t yo ft h es t a n d a r d T h ed e t e r m i n a t i o nr e s u l t so fs e r ao fH

16、 E V i n f e c t e dm o n k e y sr e f l e c t e dt h e c h a n g eo fa n t i b o d yl e v e le f f e c t i v e l y T h erv a l u e so f9 4 o fq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o nc u r v e sw e r en o tl e s st h a n0 9 8 a n dt h e 后v 小 u e s 舢g e df r o m1 1 5t o0 9 5 C o n c l u s i o

17、 n Al i n e a rq u a n t i t a t i o ns t a n d a r df o ra n t i H E VI S ca n t i b o d y 懈髓t a b l i 8 h e d ，w h i c h 惴 s u i t a b l ef o rt h ee v a l u a t i o no fi m m u n o g e n i c i t ya n de p i d e m i c a li n v e s t i g a t i o no fv a c c i n e 【K e yw o r d s 】H e p a t i t i sE

18、v i r u s ；I g Ga n t i b o d y ；S t a n d a r d ；Q u a n t i t a t i o n 作者单位：1 中国药品生物制品检定所( 北京1 0 0 0 5 0 ) ；2 厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室( 厦门3 6 1 0 0 5 ) ；3 万泰生 物药业有限公司( 北京5 1 8 0 2 0 ) 通讯作者：周诚，E - m a i l ：z h o u c h n i e p b p y a h o o t o m 6 1 1 万方数据 8 0 0 中国生物制品学杂志2 0 0 8 年9 月第2 1 卷第9 期C h

19、i n 】B i o l o g i c a l sS e p t e m b e r2 0 0 8 。V o i 2 1N o 9 目前，对戊型肝炎( H e p a t i t i sE ，H E ) 预防性疫苗 的研究工作正处于临床观察阶段。G S K 公司已经完 成I 期临床观察，国内万泰生物药业有限公司 正进行期临床观察。初步研究表明，I s G 抗体对 H E 具有一定的保护效果。为了评价疫苗免疫后抗 H E VI g G 抗体的水平，研究在H E 感染过程中抗 H E VI g G 抗体的变化以及确定抗H E VI s G 抗体的 保护性水平等，迫切需要建立一套抗一H E VI

20、g G 定量 线性标准，对其抗体水平进行定量。W H O 已建立抗 H E VI g 的定量标准品，含量为1 0 0U m l 。为了适应 大量应用的需要，本研究以W H O 抗H E VI g 标准品 为依据，标定了一份血清，并针对某一灵敏度较高的 试剂，制备了一套1 5 倍系列稀释的抗H E VI g G 的 定量线性标准，以其作为定量线性标准，用于检测临 床标本和实验感染猴系列血清。 1 材料与方法 1 1 试剂 抗- H E VI g ME L I S A 检测试剂为新加坡G e n e l a b s 和万泰生物药业有限公司产品；抗一H E VI g GE L I S A 检测试剂为

21、新加坡G e n e l a b s 、北京万泰、上海科华、 沈阳惠民、河南华美、北京高达等公司产品；9 5 5 8 4 为抗H E VI g 的W H O 定量标准品；筛选血清来自兰 州、武汉；高、中、低浓度的3 份临床戊肝患者血清来 自北京佑安医院；戊肝病毒粪便悬液实验感染猴的 系列血清，感染过程同文献 1 ；基因1 型和4 型戊 型肝炎病毒O R F 2 的C 端抗原由中国药品生物制品 检定所构建、表达并纯化 zJ ；2 3 9 抗原 3 】由万泰生物 药业有限公司提供；羊抗人I g G 共价结合碱性磷酸 酶购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1 2 抗H E VI g G 阳性和阴性血

22、清的筛选 利用抗H E VI g M 和抗一H E VI g GE L I S A 检测试 剂筛选血清，操作按照说明书进行。经两种试剂检测 均为阴性的血清作为稀释用血清；经两种试剂检测 均为阳性，且抗H E VI g G 呈强阳性的血清作为待标 定血清。 1 3L 9 血清的确认 采用W e s t e r nb l o t 法。将大肠杆菌表达的基因l 型和4 型H E VO R F 2C 端抗原( 1 型4 1 6 6 6 0a l l ，4 型4 3 0 6 7 4a a ) 2 】及2 3 9 抗原( 1 型3 6 8 6 0 6a a ) 引， 经1 2 S D S P A G E 后

23、，转至P V D F 膜；E I A 封闭液封 闭2h ，P B S T 洗膜4 次；加入L 9 血清( 1 ：1 0 0 稀释) ， 室温作用4h ，P B S T 洗膜4 次；a n 入羊抗人I g G 共价 结合碱性磷酸酶( 1 ：20 0 0 稀释) ，室温作用1 5h ， P B S T 洗膜4 次；加入底物显色，水洗终止。检测血清 与抗原在相对分子质量对应的位置是否出现条带。 1 4L 9 血清的标定 将W H O9 5 5 8 4 标准品按照说明书用无菌水 溶解，用阴性血清W H l 4 将W H O 标准品和L 9 血清 进行1 5 倍系列稀释，在同一酶标板上，每个稀释度 设平

24、行双孔，检测L 9 血清的抗H E VI g G 含量，检测 结果采用量反应平行线法进行定量分析。由3 个实 验室进行协作定量，最后计算加权平均值，作为 L 9 血清的定量结果。 1 5L 9 血清的稳定性试验 将L 9 血清分别于一2 0 0 C 保存6 、1 2 、1 8 个月，2 8 C 保存2 4 、4 8 、9 6h 后，用W H O 标准品进行重新定 量，考察其稳定性。 1 6 国内外试剂的灵敏度及定量检测方法的建立 用国内外抗H E VI s GE L I S A 试剂检测系列稀 释的线性定量标准品，以线性定量标准品的定量值 与A 值双对数建立直线方程，将其C u t o f f

25、 值代入方 程，计算出其理论灵敏度。 选择一灵敏度较高的试剂，将L 9 血清稀释至其 线性范围，再1 5 倍系列稀释5 个稀释度，作为定量 线性标准，对待检血清进行定量检测，定量线性标准 平行双样，待检血清进行l ：4 系列稀释，将落入线 性范围的第1 个点带入定量线性标准品浓度与A 值的双对数曲线，进行计算。 1 7 定量线性标准品的重复性 利用建立的定量检测方法，对3 份高、中、低浓 度的临床血清重复检测5 次，考核定量线性标准品 的重复性( 实验室内精密性) 引。 1 8 实验感染猴系列血清的定量检测 用定量线性标准品对戊肝病毒粪便悬液实验感 染猴的系列血清进行定量检测，以考核该定量线性

26、 标准品的应用效果。同时对该定量线性标准品在每 次定量试验中的线性方程进行分析，确定其相关系 数r 值和斜率k 值的范围。 2 结果 2 1 抗H E VI g G 阳性和阴性血清的筛选 经国内外试剂的检测，将抗H E VI s G 和抗一H E V I g M 均为阳性的L 9 血清作为待标定血清，同时筛选 出抗一H E VI g G 和抗H E VI g M 均为阴性的血清 W H l 4 作为阴性稀释液，用于W H O 标准品和L 9 血 清的系列稀释。 2 2L 9 血清的确认 W e s t e r nb l o t 结果可见，L 9 血清与基因l 型和4 型H E VO R F 2

27、 的C 端抗原及2 3 9 抗原均有阳性反 万方数据 中国生物制品学杂志2 0 0 8 年9 月第2 l 卷第9 期C h i nJB i o l o g i c a hS e p t e m b e r2 0 0 8 ，V 0 1 2 lN o 98 0 1 应，见图1 ，确认其为抗H E VI g G 阳性。 2 3L 9 血清的标定 采用量反应平行线法计算相对含量，其中的一 次试验见图2 。方差分析表明，W H O 标准品和L 9 血 清两组间差异有显著意义( F = 1 6 4 9 2 ，P 0 0 5 ) ，表明两直线线性和平行 性均成立。经计算，L 9 血清含抗H E VI g G

28、18 5 9U m l 。 经过3 个实验室的2 3 次有效标定，方差齐性检 验表明，实验室间差异无显著意义= 1 2 7 ，P 0 0 5 ) 。直接计算加权平均值，确定L 9 血清含抗 H E VI g G1 6 9U m l 。9 5 置信区间为1 4 8 1 9 3 ； 最大值2 0 3 ，最小值1 3 2 ，中位数1 7 2 ；变异系数 ( C V ) 为1 2 6 。 M ：p r e s t a i n e dM rm a r k e r ；1 ：r e c o m b i n a n tH E V O R F 2C - t e r m i n a la n t i g e ng

29、 e n o t y p e4 ( 4 3 0 一6 7 4 捆) ；2 ：r e - c o m b i n a n tH E VO R F 2C - t e r m i n a la n t i g e ng e n o t y p e1 ( 4 1 6 6 6 0 嬲) ；3 ：2 3 9a n t i g e ng e n o t y p e1 ( 3 6 8 6 0 6 柚) 图1L 9 血清的W e s t e r nb l o t 确认试验 1 C o n f i r m a t i o no fL 9s e r u i ns a m p l eb yW e s t e r n

30、b l o t 9 “学D 峨 圈2 量反应平行线法计算A n t i - H E VX g G 的相对含量 F i g2 C a l c u l a t i o no fr e l a t i v ep o t e n c yo fa n t i - H E VI g G b yd o s e n 印o m 瞰p a r a l l e lf i n ea s s a y 保存2 4 、4 8 、9 6h 后，用W H O 标准品进行重新定量， 定量结果均在9 5 置信区间内，且抗H E VI g G 含量 均未明显下降，表明L 9 血清具有良好的稳定性。 2 5 国内外试剂的灵敏度 对国内

31、外6 家抗H E VI s G 试剂的灵敏度分析 结果表明，试剂的灵敏度差异较大，灵敏度范围为 0 0 3 5 0 0U m l ，分别为0 5 0 ( G e n e l a b s ) 、0 0 3 ( 国 产1 ) 、0 3 5 ( 国产2 ) 、2 0 0 ( 国产3 ) 、1 3 l ( 国产4 ) 和 5 0 0 ( 国产5 ) 。选择国产l 试剂，根据其线性范围， 将L 9 血清由0 4 2U m l 起1 5 倍系列稀释5 个稀 释度，作为该试剂的定量线性标准，进行定量检测的 应用。 2 6 定量线性标准品的重复性 高、中、低浓度的3 份临床血清定量检测结果， 均数分别为1 2

32、 4 2 、1 7 2 和1 9U I I l l ，标准差分别 为1 0 6 、1 9 和0 4 ，变异系数( C y ) 分别为8 5 、 1 0 8 和1 8 9 。 2 7 实验感染猴系列血清的定量检测 对采集的实验感染猴系列血清进行定量检测， 结果抗H E VI g G 第3 周即阳转，第5 周可达到 高峰( 2 3 0 0 u I l l l ) ，直至观察期末的2 1 周仍为阳性 ( 1 2 8U m 1 ) 。抗H E VI s G 变化趋势见图3 。 i 兰 岛 晕 薹 ( w e e k ) 图3 戊型肝炎病毒实验感染猴系列血清的抗H E VI g G 水平 r a g3

33、D e t e r m i n a t i o no fa n t i I 琢I g Gl e v e lo fH E V - i n f e c t e dm o n k e yb yt h ee s t a b l i s h e dq u a n t i t a t i o ns t a n d a r d 2 8 定量线性标准品的r 值和露值范围 对定量线性标准品在每次定量检测试验中的线 性方程进行分析，结果在1 0 0 次试验中，有9 4 次 r 0 9 8 。1 1 5 后0 9 5 ，为保证定量结果的可 靠，可以此作为定量试验有效性的条件。 3 讨论 2 4L 9 血清的稳定性

34、抗H E VI g G 目前被认为是保护性抗体，但保护 L 9 血清在一2 0 T 保存6 、1 2 、1 8 个月，2 。8 性水平尚未确定，同时，抗一H E VI g G 也没有统一的 一扣一备莹差。舶3 万方数据 8 0 2 中国生物制品学杂志2 0 0 8 年9 月第2 l 卷第9 期C h i nJB i o l o g i c a l s S e p t e m b e r2 0 0 8 。V 0 1 2 1N o 9 定量标准。W H O 经过联合标定，推出了1 支总免疫 球蛋l 兰l ( I g ) 的定量标准9 5 5 8 4 ，其含量为1 0 0U m l 。 该标准来自患

35、者的恢复期血清，含有保护性I g 抗 体，恢复期的免疫球蛋白中以I s G 为主。由于目前尚 没有抗H E VI g G 的国际标准品，本研究将9 5 5 8 4 假 定含有1 0 0U m l 的抗H E VI g G ，利用该标准标定出 1 份抗H E VI s G 的定量线性标准品，经过初步应用， 证明其可作为抗H E VI g G 抗体定量标准使用。这样 可改变目前广泛使用稀释度的半定量状态，使不同实 验结果间具有可比性。采用W H O 抗一H E VI g 标准品 标定，保证了本标准在国际上的可溯源性。 国外研究表明，抗体水平大于3 0W R U m l 为最 佳界值 引，可区分真假

36、戊肝抗体阳性。W R U 与W H O U 的换算关系为1w R u I I l l = 0 1 2 5W H OU m l ，因 此相当于3 7 5U m l 以上即可确认为阳性。本实验中 的L 9 血清经联合标定后，抗H E VI S G 含量为 1 6 9U m l ，可以确认为阳性。同时，经W e s t e r nb l o t 确认，L 9 血清与基因4 型和1 型O R F 2C 一端抗原均 有明显的阳性反应，由此也可确认为戊肝I g G 抗体阳 性。基因1 型和4 型是我国目前发现的戊肝病毒 O R F 2 抗原主要基因型，以L 9 血清作为定量标准品， 适用于我国临床血清的抗

37、一H E VI s G 定量检测。 疫苗的免疫效果评价应以检测出中和抗体为准， 国内外研究表明，戊型肝炎病毒中和表位位于 O R F 2 t 似】，L 9 血清对O R F 2 抗原的免疫印迹呈阳性， 表明L 9 血清的抗体谱中含有针对O R F 2 的中和抗体 部分，因此利用L 9 血清建立的定量线性标准可适用 于疫苗免疫效果评价。 为了验证该定量线性标准品的重复性，对高、中、 低浓度的3 份临床血清进行了5 次定量检测，结果 C V 分别为8 5 、1 0 8 和1 8 9 ，虽然检测低浓 度血清的C V 较高，但仍比目前用稀释度来衡量抗 H E VI s C 水平的方法更为准确。用该标准

38、品定量检测 实验感染猴的系列血清，能有效地反映抗体水平变化 趋势。9 4 的定量检测试验，其定量标准品r 值能控 制在O 9 8 以上，斜率l j 能控制在0 9 5 一1 1 5 之间。 以上数据均表明，以L 9 血清建立的系列定量标 准血清可用于抗H E VI g G 的定量检测、疫苗的免疫 原性评价及戊肝流行病学的调查研究。该套标准品 在戊肝疫苗的I 、期临床观察中得到了应用，定量 效果较好。 国内外戊型肝炎的抗体检测试剂已经有了很大 的发展，但因检测H E V 抗体所用抗原不同，可能导致 不同试剂间的灵敏度不同。特别是那些基于O R F 3 的合成肽或重组蛋白在检测恢复期血清时，往往不

39、能 满足检测灵敏度的需要。依据O R F 2 抗原研制抗 H E V 诊断试剂要比依据O R F 3 研制的试剂敏感 1 0 】。 O R F 3 合成肽联合O R F 2 重组抗原，可提高灵敏度。 本研究对6 家试剂的灵敏度进行了比较，表明目前的 试剂灵敏度差距比较大，由0 0 3 到5 0 0U m l 。如采 用不同试剂进行临床血清检测或者流行病学调查时， 对低浓度样品，部分试剂可能出现假阴性反应，因此 应对抗H E VI g G 的定量水平进行临床和流行病学意 义的研究，之后对灵敏度做出控制，统一抗H E VI s G 检测试剂的质量标准。 综上所述，本研究建立了抗一H E VI s

40、G 的定量标 准品，并以一种抗H E VI s G 检测试剂为基础，建立 了一套定量线性标准品，可用于抗H E VI g G 检测试 剂的灵敏度控制以及戊肝疫苗的免疫学效果评价， 同时也为戊肝的临床诊断及戊肝抗体水平的流行病 学调查提供了参考。 参考文献 1 周诚，黄维金，吴星，等戊型肝炎病毒感染动物模型应用于抗 H E V 试剂评价的初步研究中华流行病学杂志，2 0 0 8 。2 9 ( 1 ) ：4 8 - 5 1 - 【2 何鹏，张华远，王佑春，等1 型与4 型戊型肝炎病毒O I W 2 抗原性 比较中华微生物学和免疫学杂志，2 0 0 6 ，2 6 ( 3 ) ：2 l m 2 1 4

41、 3 L iS W ，Z h a n gJ ，L iY M ，e ta LAb a c t e r i a l l ye x p r e s s e dp a r t i c u l a t e h e p a t i t i sEv a c c i n e ：a n t i g e n i c i t y ，i m m u n o g e n i c i t ya n dp r o t e c t i v i t yo n p r i m a t e s V a c c i n e , 2 0 0 5 ，2 3 ( 2 2 ) ：2 8 9 3 - 2 9 0 1 4 周海钧药品生物检定1

42、版北京：人民卫生出版社，2 0 0 5 ：1 3 8 1 4 1 5 王军志生物技术药物研究开发和质量控制2 版北京：科学出 版社。2 0 0 r 7 ：1 2 9 - 1 5 0 6 l n n i sB LS e r i w a t a n aJ ，R o b i n s o n 队e ta 1 Q u a n t i t a t i o no fi I n - m 帅o g l o b u l i nt oh e p a t i t i sEr i m sb ye n z y m ei m m u n o a s z a y C l i nD i a g nL a bl m m u n

43、o k2 0 0 2 , 9 ( 3 ) ：6 3 9 - 6 4 8 7 M e n gJ ，D a iXC h a n gJ C , e ta 1 I d e n t i f i c a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no f t h en e u t r a l i z a t i o ne p i t o p e ( s ) o ft h eh e p a t i t i sEv i r e s V i r o l o g y , 2 0 0 1 ， 2 8 8 ( 2 ) ：2 0 3 2 11 8 S c h o f l e l

44、 dD J , G l a m a n nJ E m e r s o nS U ，e ta 1 I d e n t i f i c a t i o nb yp h a s e d i s p h ya n dc h a r a c t e r i z a t i o no ft w on e u t r a l i z i n gc h i m p a n z e em o n o - - e l o n a la n t i b o d i e st Ot h eh e p a t i t i sEr i m se a p s i dp r o t e i n JV i r o k 2 0

45、0 0 7 4 ( 1 2 ) ：5 5 4 8 - 5 5 5 5 9 G uY ，Z h a n gJ ，W a n gY B ，e ta 1 S e l e c t i o no fap e p t i d em i m i c k i n g n e u t r a l i z a t i o ne p i t o p eo fh e p a t i t i sEr i m sw i t hp h a s ep e p t i d ed i s p l a y t e c h n o l o g y W o r l dJG a s t r o e n t e m l 。2 0 0 4 , 1 0 ( 11 ) ：1 5 8 3 - 1 5 8 8 1 0 庞立丽。毕胜利戊型肝炎检测研究进展中华实验和临床病毒学 杂志。2 0 0 6 ，2 0 ( 2 ) ：9 4 - 9 6 ( 收稿日期：2 0 0 7 - 1 2 - 2 7 ) 万方数据