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1、生堡匿堂羞堂羞窒壅查垫! ! 生! ! 旦箜! 鲞复! 坦 h 也丛盟坠b 坠鱼! 婴盟! 堕坐蛙! ! 业! zY ! ! ：! ! ! 盥Q ! ! 强脉冲光对大鼠皮肤碱性成纤维 细胞生长因子表达的影响 王明利柳大烈袁强杜本军 【摘要】目的通过观察强脉冲光对大鼠皮肤碱性成纤维细胞生长因子( b a s i cf i b r o b l a s t g r o w t hf a c t o r ，b F G F ) 表达的影响，探讨光子嫩肤的分子生物学机制。方法选择1 5 只远交群( S D ) 大鼠，每只选3 个部位用强脉冲光照射，采用同一照射参数，能量密度3 4J e r a 2 ，分为
2、3 个脉冲，脉宽 各为4 、5 、6m s ，脉冲延时为2 0m s 及2 5m s 。照射后第1 、3 、5 、7 、1 5 、3 0 天分别于治疗及非治疗部位 切取皮肤样本，免疫组化染色( s A B C 法) 观察。结果照射后第1 天，b F G F 未见表达，第3 天时出 现弱阳性颗粒，随时间增加，b F G F 的表达也逐渐增强，第1 5 天时达到高峰并持续至第3 0 天，非治疗 部位染色阴性。结论强脉冲光照射皮肤后可引起b F G F 表达的增加，提示b F G F 在光子嫩肤过程 中对皮肤的重塑起重要作用。 【关键词】磁共振成像；强脉冲光；光子嫩肤l 碱性成纤维细跑生长因子 E
3、f f e c to fi n t e n s ep u l s e dl i g h to nb F G Fe x p r e s s i o ni nr a ts k i nW A N GM i n g - l i ，L 几，D a - l i e 。M N Q i a n g D UB e n - j u n D e p a r t m e n to fP l a s t i cS u r g e r y ，Z 幻i a n gH o s p i t a l ，S o u t h e r nM e d i c a l 踟i v e r s i t y ，G u a n g z h o u
4、51 0 2 8 2 ，C h i n a A b s t r a c t 0 b j e e t l v e T oo b s e r v et h ee f f e c to fi n t e n s ep u l s e dl i g h t ( I P L ) o nb a s i cf i b r o b l a s t i c g r o w t hf a c t o r ( b F G F ) e x p r e s s i o ni nr a ts k i na n dt oe l u c i d a t et h eb i o l o g i c a lm e c h a n
5、 i s m so fp h o t o r e j u v e n a t i o n M e t h o d sT h et h r e er e g i o n sw e r es e l e c t e da n dt r e a t e dw i t hI P Li n1 5S Dr a t s T r e a t m e n tp a r a m e t e r sw e r et h es a m e ：3 4J c m 2o ft h ef l u e n e e ，t r i p l ep u l s e s ( 4m s ，5m s ，a n d6m sd u r a t
6、i o n ) ，2 0 m sa n d2 5m so fp u l s ed e l a y s A td a y s1 ，3 ，5 ，7 ，1 5 ，a n d3 0a f t e rt r e a t m e n t ，s k i ns p e c i m e n sw e r e r e m o v e da tt r e a t e da r e a sa n dnont r e a t e da r e a s ，r e s p e c t i v e l y T h ee x p r e s s i o no fb F G Fw a si n v e s t i g a t e
7、 d b ym e a n so fi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y R e s u l t s A tt r e a t e dr e g i o n s ，p o s i t i v es t a i n sw e r en o to h s e r v e dj n s k i nc e l l sa td a y1 W e a k e rs t a i n si ns k i nc e l l sw e r eo b s e r v e da td a y3 W i t ht i m e ，s t a i n sg o tg r a d u
8、 a l l y s t r o n g e ra n dr e a c h e dh i g h e s ta td a y1 5a n dm a i n t a i n e dt h i ss i t u a t i o nt od a y3 0 A tn o n - t r e a t e da r e a s ， c e l l ss t a i n sw e r en e g a t i v e C o n e l n s i o n I P I 。t e c h n o l o g yc a ne n h a n c et h ee x p r e s s i o no fs k
9、i nb F G F ， s u g g e s t i n gt h a tb F G Fp l a ya r o l ei nr e m o d e l i n go fs k i ni np h o t o r e j u v c n a t i o n K e yw o r d s M R I ； I n t e n s ep u l s e dl i g h t ；P h o t o r e j u v e n a t i o n ； b F C F 强脉冲光( i n t e n s ep u l s e dl i g h t ，I P I 。) 技术是近 几年发展起来的治疗皮肤光
10、老化的一种新方法，在 临床上得到了广泛的应用【1 ”，但对其作用机制的 实验研究尚鲜有报道。生长因子对于创伤的愈合起 到重要作用，在诸多生长因子中，碱性成纤维细胞生 长因子( b a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a e t o r ，b F G F ) 是目 前研究较为广泛的生长因子之一。I P L 系统是高强 度光源，通过光热解效应对组织产生热损伤口 。但 对于I P I ，引起皮肤热损伤愈合过程中b F G F 的作 用所进行的研究，经初步查阅文献，到目前为止几乎 还是空白。b F G F 在I P L 引起皮肤热损伤的修复及 作者单位：5 1
11、 0 2 8 2 广州，南方医科大学珠江医院整形科 王明利 ( E - m a i l lw m l 6 4 1 2 2 7 1 6 3 c o m 实验研究 真皮塑形过程中是否起到调节作用? 为此，本实验 旨在通过I P L 对大鼠皮肤b F G F 表达的动态变化 研究，从蛋白分子水平阐明I P L 治疗光老化皮肤过 程中生长因子所起到的部分作用，以提供光子嫩肤 作用机制的理论依据。 材料与方法 一、材料 1 实验动物及仪器设备：随机选取1 5 只远交 群( S p r a g u ed a w l e y ，S D ) 大鼠，性别不限，体重 3 0 0 4 0 0g ，1 2 2 4 个
12、月龄( 第一军医大学南方医 院动物中心) 。仪器为Q u a n t u mS R “光子嫩肤仪 ( 美国科医人公司 。采用6 4 0n m 滤光头，能量、脉 宽和脉冲数均可调节，滤光头配备电热冷却系统，光 万方数据 主坐匡堂差堂差查盘盍2 Q 鲤生! ! 旦筮! ! 鲞筮翅丛g 丛鲤! ! ! b 垦Q 塑壁! 堕堡b 些2 Q Q ! y Q b ! ! 盟Q ： 斑面积为8m m 3 5m m 。 2 主要试剂：兔抗鼠b F G F 单抗，链酶亲合素一 生物素一过氧化物酶复合物( S A B C ) 试剂盒，二抗为 生物素标记的山羊抗兔I g G 抗体，3 ，3 二氨基联苯 胺( D A
13、 B ) 显色试剂盒，以上试剂均由武汉B o s t e r 公 司提供。 二、方法 1 照射方法：1 5 只大鼠均以3 戊巴比妥钠液 行腹腔注射麻醉，剂量为1m l k g ，麻醉后每只大鼠 各取背中部及背两侧3 个部位，以硫化钡液进行脱 毛，完毕后调节嫩肤仪治疗参数：因大鼠皮肤属 F i t z p a t r i c kI 类皮肤，故选择高能量、3 个脉冲数，通 过测试光斑，最后确定参数：能量密度为3 4J c m 2 ， 脉宽各为4 、5 、6m s ，脉冲延时为2 0m s 及2 5m s 。 用同一参数对各部位进行1 次2 个光斑面积的照 射。照射时皮肤表面涂冷凝胶。 2 组织学观
14、察：于非照射部位及治疗后第1 、3 、 5 、7 、1 5 、3 0 天的照射部位分别切取5F i l m 5n m l X 3m i t t 皮肤样本。所取样本以1 0 甲醛缓冲液固 定，梯次浓度乙醇逐级脱水，石蜡包埋、切片，用兔抗 鼠b F G F 为一抗( 浓度1 ：1 5 0 ) 、生物素标记的山羊 抗兔I g G 抗体、S A B C 试剂盒等主要试剂行b F G F 免疫组织化学染色( S A B C 法，D A B 显色) ，不加 b F G F 抗体作为阴性对照，光镜下观察、拍照。 3 结果判断b F G F 表达阳性时在切片中可见 胞浆内有深浅不同的棕黄色颗粒，按照所有标本的
15、 平均染色强度，划分为“一、十、+ + 、+ + + ”。 结果 正常皮肤中无b F G F 的表达( 图1 ) ，在照射后 第1 天。b F G F 未见表达，在第3 天时才于表皮的表 浅层出现弱阳性颗粒，而真皮层中也未见阳性表达， 在第5 天时皮肤全层才出现较强的表达，真皮中的 阳性细胞也以内皮细胞及炎性细胞为主，而且在一 些细胞周围也可见到阳性颗粒。随时间的增加， b F G F 的表达也逐渐增强，在第7 、1 5 天时表皮表达 进一步加强，第1 5 天时达到高峰( 图2 ) ，但真皮层 的表达并无明显变化，至第3 0 天时，表皮的表达仍 处于高峰状态，此时真皮中的表达也达到最强，细胞
16、周围的阳性颗粒也较前有所增加。阴性对照表达呈 阴性。b F G F 表达的动态变化见表1 。 表1I P L 照射I i i 后b F G F 表达的动态变化( n = 1 5 ) T a bl D y n a m i cc h a n g e so fb F G Fe x p r e s s i o n b e f o r ea n da f t e ri r r a d i a t i o no fI P I 。( ”= 1 5 ) 讨论 刨伤愈合是一个复杂的病理生理过程。在此过 程巾，伴随着生长因子的释放与参与。这些因子是 炎症纳胞的有力趋化剂，激活的巨噬细胞在吞噬坏 死组织的同时，在伤
17、口部位开始合成分泌其他生长 因子，包括口转化生长因子( T G F - 口) 、d 转化牛长因 子( T G Fn ) 、b F G F 等因子，町刺激成纤维细胞、表 皮细胞和血管内皮细胞向创伤部位移动。这些生长 因子继续促进细胞增殖，细胞外基质( E C M ) 合成和 新的血管形成。 圈1 未治疗部位b F G F 表达阴性( 免疫组织化学染色。4 0 0 ) 围2 治疗部位第1 5 天b F G F 表达阳性( 免疫组织 化学染色4 0 0 ) F i g1 b F G Fe x p r e s s i o ns h o w i n gn e g a t i v ea tn o n t
18、r e a t e ds i t e s ( i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ，X4 0 0 ) H g2 b F G Fe x - p r e s s i o nr e v e a l i n gs t r o n g l yp o s i t i v ea tt r e a t e ds i t e sa td a y1 5 ( i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 。4 0 0 ) 万方数据 生堡匡堂差堂羞查垒壹2 业生! ! 旦筮! ! 鲞箜塑h 也丛趟! ! 尘坠：鱼! 里堕! 旦! ! 坐b
19、! 垫Q ：y ! ! ：! ! ：盟! ：! 成纤维细胞生长因子( f i b r o b l a s tg r o w t hf a e f o r ，F G F ) 家族分为酸性成纤维细胞生长因子 ( a F G F ) 和b F G F 两大类，已发现9 个成员。而b F G F 是F G F 家族中强有力的刺激内皮细胞和成纤维细 胞分裂、增殖的促有丝分裂作用的形成因子，在近年 对创伤愈合及瘢痕形成过程中，b F G F 所起到的作 用也有了广泛的研究。 I P L 系统是高强度光源，皮肤组织中不同的吸 色团，即靶目标可同时吸收不同的光波，产生多种光 热解效应。光热解效应的一个原则，是
20、靶组织吸收 足够的热量产生组织的热损伤。I P I 。对皮肤组织造 成的损伤不同于其他原因，如切割伤、烧伤等，原因 是在治疗过程中对表皮采取保护措施，虽有损伤，但 较轻微且无表皮连续性的破坏，故兀创面形成。有 鉴于此，其创伤愈合过程虽然与其他原因引起的创 伤愈合过程有共同之处，但又有其特殊性。在该愈 合过程中，生长因子的变化规律如何? 对于I P L ( 包 括剥脱性及非剥脱性激光) 引起皮肤热损伤愈合过 程中b F G F 的作用所进行的研究，到目前为止，只有 S a d i c k 等 4 1 在用10 6 4n mN d ；Y A G 激光治疗下 肢静脉曲张时，用免疫组织化学方法发现了活
21、检组 织( 4 周后) 热损伤血管及周围有T G F B 表达的增 加，而对其他生长凶子的研究尚未见报道。 我们的实验表明，在I P L 照射皮肤后第1 天没 有b F G F 的表达，第3 天才出现弱阳性表达，表明 I P L 引起热损伤修复的早期b F G F 所起到的作用较 弱，至第7 天时b F G F 的表达增强，在1 5 天时达到 高峰并持续至第3 0 天，表明b F G F 在皮肤热损伤修 复的中、后期起重要作用。在对b F G F 在创伤修复 及瘢痕形成过程中的作用所进行的研究中，有学者 认为b F G F 主要在中后期起作用r 5 。我们观察到的 b F G F 的动态变化与
22、以上观点基本上一致，即在 I P L 引起热损伤的早期修复中b F G F 起到的作用较 弱，而在后期的修复过程中，b F G F 起重要作用。 b F G F 能刺激成纤维细胞合成E C M 成分，在创 伤修复过程巾起非常重要的作用。我们通过对I P L 照射皮肤后b F G F 表达的动态观察，表明I P L 引起 皮肤热损伤后，在皮肤的重塑过程中，尤其是在中、 后期b F G F 起到了非常重要的作用，这一观察结果 对于I P L 的临床应用具有重要的理论指导意义；同 时，提示能否根据b F G F 的表达时相在临床治疗过 程中应用外源性制剂来提高治疗效果，这还需今后 进一步研究。 创伤
23、愈合是一个复杂的病理生理过程，参与调 节的生长因子很多，我们的实验仅就b F G F 在I P I 。 引起皮肤热损伤修复过程中的动态变化进行了观 察，对其他生长因子在其中的作用还有待于今后进 一步研究。 参考文献 r 1 高景恒，白伶珉，李孟倩强脉冲光在美容外科应用的文献复 习实用美容整形外科杂志，2 0 0 3 ，1 4 ( 1 ) ：3 94 3 2 R a u l i nC ，O r e v eB ，G r e m aH I P I 。t e c h n o l o g y ：ar e v i e w L a s e r si nS u r g e r ya n dM e d i c
24、i n e ，2 0 0 3 ，3 2 ( 2 ) ：7 8 8 7 3 A n d e r s o nR R ，P a r r i s hJ A S e l e c t i v ep h o t o t h e r m o l y s i s ：p r e c i s e m i c r o s u r g e r yb ys e l e c t i v ea b s o r p t i o no fp u l s e dr a d i a t i o n S e i e n c e ，1 9 8 3 ，2 2 0 ( 4 5 9 6 ) ：5 2 45 2 7 4 S a d i c kN
25、 S ，P r i e t oV G 。S h e aC R ，e ta 1 C l i n i c a la n dp a t h o p h y s i o l o g i cc o r r e l a t e so f1 0 6 4n mN d ；Y A Gl a s e rt r e a t m e n to fr e t i e u l a rv e i n sa n dv e n u l e c t a s i a s A r c hD e r m a t o l ，2 0 0 1 ，1 3 7 ( 5 ) ： 6 13 6 17 5 李荟元成纤维细胞生长因子与创伤愈合及瘢痕增生李
26、荟元， 鲁开化，郭树忠新编瘢痕学西安：第四军医大学出版社， 2 0 0 3 ：2 4 5 2 4 6 ( 收稿日期：Z 0 0 5 0 8 1 8 ) 本刊对文稿附图的要求 读者作者编者 作者投稿时图片必须用原始照片，并且有良好的清晰度和对比度，不可折损，切忌复印件。图片中的符号( 包括箭头) 必 须用另纸标注。每幅图片的背面均应注明序号、作者姓名及图片的上下方向。病理照片务必注明染色方法和放大倍数，大体 标本照片应有尺度标记。若用人像，应征得患者的书面I 司意。投稿同时投寄的光盘或Em a i l 中图片的分辨率应不低于 4 0 0 d p i ( 像素英寸) ，尽量采用T I F F 格式，也可采用j P g 格式；线条图应墨绘在白纸卜或用制图软件绘制，并应提供激光打印 图样；同时寄三份原始照片。每幅图均应冠有图题及说明( 论著文章需附中、英文图题、图注) ，如图片中使用缩写，请注释其 中、英文全称。图号应按其在正文中m 现的顺序连续编码。 万方数据