抗重组VACA IGY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究.pdf

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1、4 4 6 C h i n e s eJ o u r n a lo fM i c r o e c o l o g y 。O c t 2 0 0 8 ，V 0 1 2 0N o 5 文章编号：1 0 0 5 - 3 7 6 X ( 2 0 0 8 ) 0 5 - 0 4 4 6 - 0 4【论著】 抗重组V a c AI g Y 体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究 夏丽君1 ，田一玲，杨致邦1 ，黄伟2 。张任飞1 ，李昌庆1 ( 1 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室，重庆4 0 0 0 1 6 ；2 西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 4 0 2 4 6 0 ) 【摘要】目的在构建Mp g “

2、 o r 的基因工程菌p Q E 3 0 一v D l t S a 的基础上，诱导表达V a c A 重组蛋白，以此为抗 原，制备抗V a c A 的蛋黄抗体( V a c Al g Y ) 。通过小鼠口服试验，证实V a c Al g Y 治疗M r y o r 感染的作用，为进一步 制备抗Ht r y o r 感染的I g Y 制剂提供实验依据。方法用重组尼p r i o r V a c A 蛋白免疫母鸡，水稀释结合氯仿有机 沉淀法提取I g Y ，E L I S A 法测定其针对V a c A 的效价。建立4 p y o r 感染的B a l b e 小鼠动物模型，治疗组在小鼠灌 喂菌液

3、后灌喂不同剂量的V a e AI g Y 。以Mp y o r 培养和病理切片观察胃黏膜- p r i o r 定植和炎症反应程度。结果 制备了高效价的l g Y ( 1 ：1 2 8 0 0 ) 。动物实验阳性对照组皿p r i o r 的总感染率为7 0 ，4 ，1 2 周后的感染率为8 8 9 。 治疗组的感染率与同期阳性对照组相似，胃黏膜的炎症反应程度比阳性对照组弱，随l g Y 剂量的增加，炎症减弱明 显，I g Y 剂量为4m g I n l 时，能达到较理想的治疗效果。结论成功制备了高效价的特异性V a c AI g Y ，小鼠体内实 验证实了口服V a c Al g Y 具有治

4、疗M p y l o f i 感染的作用，可用于制备口服制剂。 【关键词】幽门螺杆菌；细胞空泡毒素；卵黄抗体 【中图分类号】1 1 3 7 8 9 9【文献标识码】A S t u d i e so fI g Ya n t i r e c o m b i n a n tV a c At oc u r et h ei n f e c t i o no fH e l i c o b a c t e rp Y l o r ii n v i v o X I AL i - j u n ，T I A NY i l i n g ，Y A N GZ h i b a n g ，H U A N GW e i ，Z

5、H A N GR e n f e i ，L IC h a n g q i n g ( 1 D e p a r t m e n to fP a t h o b i o o g y ，C o l l e g eo fB a s i cM e d i c a lS c i e n c e s ，C h o n g q i n gU n i v e r s i t yo M e d i c a lS c i e n c e s ，C h o n g q i n g 4 0 0 0 1 6 ，C h i n a ) 【A b 吼门d 】O b j e c t i v e s T op r e p a r

6、 eI g Ya g a i m tV a e Ao fH e l i c o b a a e rp 咖一f r o my o l ko fh e n f se g gi m m u n i z e dw i t h r e e o m b i n a n tp r o t e i nV a c A ，v e e r yi t se f f e c ti nc u r i n gt h ei n f e c t i o no fH e l i c o b a a e rp r i o r ii nv i v a ，柚dl a yaf o u n d a t i o nf o rt h e d

7、e v e l o p m e n to fp r e p a r a t i o na g a i n s t 且p y l o r ii n f e c t i o n M e t h o d s B a s e do nc o n s t r u c t e dg e n ee n g i n e e r i n gb a c t e r i ap Q E 3 0 - V a c A D l - S ao fH e l i c o b a c t e rp y l o r i ，r e c o m b i n a n tV a c Ap r o t e i n sw e r ei n d

8、 u c e da n de x p r e s s e d V a e AI g Yw a sp r e p a r e d ，u s i n g V a e A 聃t h ea n t i g e n a n da d m i n i s t e r e do r a l l yt ot h em i c e L a y i n gh e n sw e 他i m m u n i z e dw i t hr e c o m b i n a n tJ tp r i o r p r o t e i nt o g e tI g Y I g Yw a si s o l a t e du s i n

9、gp r e c i p i t a t i o nm e t h o do fw a t e rd i l u t i o nc o m b i n e dw i t he M o m G r m T h et i t e ra g a i n a tV a c Aw a a d e t e c t e db yE L I S A B a s e do nc r e a t e da n i m a lm o d e lo fH p f l o r i n f e c t i o n ，a f t e ri n f e c t e dw i t hH p n ，d i f f e r e n

10、 td o s e so fV a - c AI g Yw e r eg i v e nt ot h eB A L B Cm i c e si nt r e a t m e n tg r o u pu s i n ga nD 瑚f e e d i n gn e e d l e B a c t e r i a lc u l t u r ea n dp a t h o l o g i c a l s e c t i o nw e r eu s e dt oo b s e r v et h ef i e l dp l a n t i n go fb a c t e r i aa n di n f l

11、 a m m a t i o no fm u e o s ai ns t o m a c h R e s u l t s I g Yo fh i s ht i t e r ( 1 ：1 2 8 0 0 ) w e r ep r e p a r e d T h et o t a lr a t eo f i n f e c t i o ni nt h ep o s i t i v ec o n t r o lw a s7 0 4 ，a n da f t e r1 2w e e k s ，8 8 9 T h e i n f e c t i o nm t eo ft h et r e a t m e

12、n tg r o u p 哪s i m i l a rt ot h a to ft h ep o s i t i v ee o n t m lg r o u pa tt h es m ei n f e c t e dp e r i o d w h i l et h ei n f l a m m a t i o no fB l u 删ai ns t o m a c ho ft h et r e a t m e n tg r o u pW t mt h i n n e rt h a nt h a to ft h ep o s i t i v ec o n t r o lg r o u p ，a n

13、 dt h ei n f l a r a - m a t i o no fm u e o s aw 龃w e a k e n i n ga l o n gw i t ht h ei n c r e a s i n go fI g Yd 媚a g e 。T h es a d s f a c t o r yd o s a g eo fV a c AI g Yt h a tc 觚c 叭 t h ei n f e c t i o no fH V O r W a r4m g m 1 C o n c l u s i o nV a e Al g Yw i t hh i g hf i l e rw a ss

14、u e e e s s f u l l yp r e p a r e da n dl a s st h ea b i l i t y t oc u 砖t h ei n f e c t i o no fHl 口， o r i nv i mo fm i c e I tc o u l db eu s e dt op r e p a r et h eo r a lp r e p a r a t i o no fa n t i - i n f e c t i o na g a i m tH e l c o b a c t e rp y o r 【K e yw o r d s 】H e l i c o b

15、 a c t e rp r i o r ；V a c A ；I g Y 幽门螺杆菌( H e l l c o b a c t e rw l o r i ，1 t p r i o r ) 是引起 慢性胃炎和胃溃疡的最常见原因，在胃溃疡的复发及 胃癌的发生中起到重要作用，1 9 9 4 年国际癌症研究 机构已将其列为第1 类致癌因子。Hp r i o r 的感染 途径尚未完全明了，感染非常普遍发展中国家高于 发达国家，发展中国家流行特征为儿童期易感型，婴 幼儿甚至出生几个月的新生儿都可能受到感染，并以 每年3 一1 0 的速度上升，至l O 岁时已有4 0 一 6 0 的儿童受到感染。因各种体检未

16、将Hw o r 感 染的检查作为常规指标，多为引起临床症状就诊时才 【收稿日期】2 0 0 8 - 0 1 一l l 【基金项目】重庆市教委( 渝教科2 0 0 3 - 7 - 3 ) 重庆市科委( C S T C 2 0 0 5 E A 5 0 2 0 ) 【作者简介】复丽君( 1 9 7 8 ) 。女。硕士研究生，从事幽J 螺杆荫感染防 冶的研究，E m a i l ：蜘一1 6 1 5 y a h o o c o n l c “；田一玲，通讯作 看E m a i l ：m o r e n 5 8 1 6 3 c o m 发现，一旦感染，将终身受累，自愈率几乎为零。清除 Hp r i o

17、r 感染已具有重要的临床意义。大量研究表 明多种抗生素和铋剂的联合应用是清除Hw o r 的 有效措施，但费用昂贵，可引起副作用。随着抗生素 的应用耐药菌株不断增加，使应用抗生素清除 强加矗更加困难J 。日服I “被认为是防治人类胃 肠道感染的有效制剂。具有广泛的应用前景。致 细胞空泡毒素抗原V a c A ( V a e u o l a t i n ge y t o t o x i na n t i g e n ，V a c A ) 是且p y o r 引起细胞病变的主要毒力因 素。本研究在克隆表达V a e A 重组蛋白的基础上，制 备V a e AI g Y ，通过小鼠体内实验证实V a

18、 e AI g Y 能够 中和HW O r 分泌的V a e A 的毒性作用，以达到治疗 H p y o r i 感染的作用，为制备抗1 t W o r 感染的I g Y 制剂奠定基础。 l 材料与方法 1 1 实验材料 万方数据 中国微生态学杂志2 0 0 8 年l O 月第2 0 卷第5 期4 4 7 1 1 1 菌株与质粒重组V a c A 纯化蛋白( 已鉴定 具有良好的抗原性和免疫原性，纯度为9 0 ，B r a d f o r d 法测定蛋白含量为0 6 7m g m l ，由本室制备保 存口1 ) 。4 p y l o r iV a c A + 菌种由本实验室从临床标本 分离、鉴定

19、并保存；布氏肉汤为北京陆桥商检新技术 公司产品；Hp y l o r i 选择性培养基为本室制备。 1 。1 2 实验动物清洁级B a l b c 小鼠，6 8 周龄， 雌性，体重1 7 一加g ，购自重庆医科大学动物实验中 心；1 1 4 日龄立克体产蛋母鸡，西南大学荣昌校区生 物中心提供。 1 1 3 试剂H R P 标记羊抗鸡I g Y 为P r o m e g a 公司 产品。蛋白质m a r k e r 为深圳晶美公司产品。N i 2 + 一 N T A 亲合层析柱为Q I A G E N 公司产品。琼脂粉为日 本公司产品。I P T G 、S D S 、D 1 1 、E D T A

20、 、丙烯酰胺、 N ，N7 一亚甲丙烯酰胺、考马斯亮蓝R 2 5 0 、考马斯亮蓝 ( ；2 5 0 均为S i g m a 公司产品。胰蛋白胨、酵母抽提物 均为D i f c o 公司产品。V a c A + 人血清为本室保存。 1 2 方法 1 2 1 母鸡免疫将纯化的V a c A 重组蛋白与等量 弗氏完全佐剂混合，充分研磨乳化后作为免疫原，胸 部肌肉多点注射免疫11 4E t 龄立克体母鸡，第一次注 射量为1 0 0 斗g 只；1 5d 后进行第二次免疫，注射量 为2 0 0 斗g 只；之后再隔1 月进行第三次免疫和加强 免疫，注射量均为3 0 0 只。第二次免疫后1 周开 始收集鸡蛋

21、4 保存。 1 2 2 I “的提取H 1以水稀释结合氯仿有机沉淀 法从收集的鸡蛋蛋黄中提取I “，将免疫1 0 0d 以后 提取的I g Y 混合，用常规饱和硫酸铵法纯化。用已建 立的检测I g Y 的E L I S A 法测定I g Y 效价。1 2 S D S P A G E 检测I g Y 的纯度；B r a d f o r d 法测定蛋白含量。 1 2 3 建立检测V a c AI g Y 的间接E L I S A 法以 V a c A 蛋白为抗原，用包被液倍半稀释为3 0 0 1 8 7 5 g m l ，以每孔1 0 0 斗l 包被聚苯乙烯反应板；酶 标羊抗鸡 g Y 用酶稀释液

22、倍半稀释为1 0 一l O ，方 阵滴定确定最佳抗原包被浓度和酶标二抗工作浓度。 测定2 0 份免疫前鸡蛋提取的l g Y 的A 。如值，取其平均 值作为阴性对照。测定免疫后提取的I g Y ，以免疫后 与免疫前I g Y 的A 。值之比大于2 1 判为阳性。 1 2 4 且F y o r 菌液的制备 1 2 4 1 4 p y o r 的培养将V a c A + Hp y o r 菌种 接种于1 4 p y l o r i 选择性培养基，产气袋法微需氧条件 下( 5 0 2 ，1 0 C 0 2 ，8 5 N 2 ) 3 7 培养3 4d 。生 长菌落经形态和快速尿素酶试验、氧化酶试验等生化

23、 反应鉴定为Hp y o r + 后，用p H7 0 的布氏肉汤洗 涤，麦氏比浊管比色，调整菌液浓度为1 1 0 5 C F U m l ，备用。 1 2 。4 2 W e s t e r nb l o t 法鉴定V a c A + Hp y l o r i 将培 养的日p y l o r i 全菌进行l2 S D S P A G E 电泳，使凝胶 靠近阴性一侧，N C 膜靠近阳性一侧，在1 5 0V 条件下 转移2h ，电转移后，取出N C 膜，P B S 洗涤4 次，每次 5m i n ，加封闭液，室温封闭非特异性位点，同前用 P B S 洗膜。然后，加上V a c A + 血清，3 7

24、作用2h ，同 前用P B S 洗膜，再用H R P 标记的羊抗人I g C3 7 作 用2h ，洗膜。最后，将N C 膜浸泡在D A B 显色剂中 1 0 1 5r a i n ，用双蒸水冲洗，以终止染色。 1 2 ，5 动物实验 1 2 5 1 实验分组将1 0 8 只B a l b c 小鼠随机分 成4 组：阳性对照组( 2 7 只) 、阴性对照组( 2 7 只) 、治 疗组( 5 4 只) 。其中治疗组再按V a c AI g Y 的不同剂 量分成1 、2 、4 、6 、8m g m l 组和P B S 对照组6 组，每组 9 只。 1 2 5 2 实验方法【5 J 阳性对照组：小鼠禁

25、水禁食 2 4h 后，用3 N a H C O ，0 2m l 中和胃酸，5r a i n 后灌 喂5 0 酒精0 5m l ，3 0r a i n 后再灌喂含1 0 8 C F I J m l - p y o l i 的菌液0 5m l ，4h 后恢复进食和进水，隔天 1 次一共3 次，连续2 周。于末次灌喂后4 、8 、1 2 周 后分批处死9 只小鼠，取胃黏膜进行细菌培养和病理 切片检测1 4 p y t o r 感染和炎症反应情况。阴性对照 组：用布氏肉汤代替菌液，方法同阳性对照组。治疗 组：用与阳性对照组相同的方法给小鼠感染Hp y o r 感染后第9 周给小鼠灌喂不同剂量的V a

26、c AI g Y 。 每天1 次，连续2 周，末次灌喂I g Y2 周后处死小鼠， 检测凰p , y o r 引起的炎症反应情况，同时以灌喂不含 V a c AI g Y 的P B S 为对照。 1 2 5 3 小鼠r y o r 感染的检测( 1 ) 胃黏膜标 本的制备：用颈椎脱位法处死B a l b e 小鼠，取出胃组 织，灭菌生理盐水清洗胃内容物后，沿胃大弯将胃黏 膜纵切，分别用于病理组织学检查和细菌分离培养。 以凰r y o r 培养阳性判为感染。( 2 ) 慢性炎症的分 级【6J ：组织切片H E 染色镜检，根据上皮细胞和固有 膜内的淋巴细胞浸润量进行胃黏膜的炎症分级： “一”为固有

27、膜有少量淋巴细胞而腺上皮内无淋巴细 胞；“+ ”为固有膜及腺上皮内均有少量淋巴细胞； “+ + ”为固有膜有多量淋巴细胞，腺上皮内也有散 在多量的淋巴细胞；“+ + + ”为固有膜有多量淋巴 细胞，腺上皮内有聚集成团的淋巴细胞。 2 结果 2 1间接E U S A 法的工作浓度方阵滴定法确定的最 佳工作浓度是：抗原包被浓度为7 5 峙“样品稀释度 为1 ：5 0 ，酶标羊抗鸡培Y 的稀释度为1 ：1 0 0 0 0 。阴性I g Y 平均值为0 1 0 2 。在上述实验条件下，A 卿 0 2 0 4 时，判 为阳性，A 伽0 2 0 4 判为阴性。 2 2I g Y 的效价、蛋白浓度和纯度纯化

28、浓缩后I g Y 效价为l ：1 2 8 0 0 ，蛋白浓度为2 5 6 6m g m l 。经1 2 S D S P A G E 电泳见2 条带( 图1 ) 。重链的分子量为 6 5K D 左右，轻链为2 4K D 左右。两条重链与两条轻 链之和与总分子量1 8 0K D 相符合。I g Y 纯度约为 6 5 。 2 3 V a c A + 日p y l o r i 鉴定结果N C 膜显色后在相 对分子量约2 7 0 0 0 处出现相应的条带( 图2 ) ，表明培 养的4 p y o r 能分泌V a c A 。 2 4 动物实验结果 万方数据 C h i n e s eJ o u r n

29、a lo fM i c r o e e o l o g y ，O c t 2 0 0 8 ，V 0 1 2 0N o 5 1 p m t d nm a r k e r ；2 3 p u r i f i e dr e c o m b i n a n tp m t d n 图1 纯化浓缩后I g Y 的S D S - P A G E 分析 L a n e l ：p r o t e i n 诎盯，L a n e 2 ：c o n t r o l ( w i t h t m li n d u c t i o n ) 。l a n e 3 、4 ：9 - I o r il e s p o n s e d

30、m t ht h eV a e AI g G 图2H e f t , r 的W e s t e r nb l o t 鉴定 2 ，4 I 对照组4 、8 和1 2 周后经细菌培养和组织 学检查显示阴性对照组所有小鼠均无段p y o r 感染。 阳性对照组小鼠在灌喂后4 、8 和1 2 周，Hp y o r 的感 染情况见表l 。组织学检查显示，随着时间的推移， H r y o r 的定植量和炎症反应程度均增加。感染后 第8 周：胃黏膜充血水肿，出血或细胞坏死脱落，H E 染色可见固有膜有多量淋巴细胞，腺上皮有敬在多量 的淋巴细胞，判为“+ + ”炎症( 图3 ) 。感染后第1 2 周：炎症细胞

31、由腺下区域向黏膜下层或黏膜浅层扩 展，呈局灶性分布或弥漫性分布，部分可见中性粒细 胞浸人腺腔形成“微浓疡”；H E 染色淋巴细胞数目增 加，固有膜有多量的淋巴细胞，腺上皮有聚集成团的 淋巴细胞，判为”+ + + ”炎症( 图4 ) 。 表1阳性对照组小鼠感染p y o r 情况 末次篇黑时间专簧挚零誊誓感染率( ) ( 周)( 只)( 只) “5 + V ” 8 97 7 7 8 1 2 98 8 8 9 图3 感染8 周后小鼠胃黏膜病理切片( H E Xt o o ) 图4 感染1 2 周后小鼠胃黏膜病理切片( H E 1 0 0 ) 2 4 2 治疗组结果治疗组小鼠细菌培养的结果见 表2

32、，其感染率与同期阳性对照组小鼠的感染率相 似，组织学检查显示，随着V a c Al 酣剂量的增加，小 鼠胃黏膜的炎症反应减轻，见图5 一图7 。V a c AI g Y 的剂量为4m g m l 时，能达到较理想的治疗效果。 表2 治疗组小鼠感染1 1 p T l o r i 情况 1m m l9 7 6 7 8 2m r , m l9 8 7 8 9 4m r n l9 8 8 8 6 6 珊f n l 9 7 8 7 9 8m m l988 9 0 坠型腿璺 2 1 鲤 里5 治疗组( 1m g dI g Y ) 感染1 2 周后 小鼠胃黏膜病理切片( H Ex1 0 0 ) 豳6 治疗组

33、 2m g 曲l g Y ) 感染】2 局后 小鼠胃黏膜病理切片H Ex1 0 0 ) 盈7 治疗缉i 4m g m I l g 、) 感染j 2 局后 小鼠胃黏腰病理切片fH Ex1 0 0 ) 万方数据 中国微生态学杂志2 0 0 8 年1 0 月第2 0 卷第5 期 3 讨论 H p y l o r i 的防治已成为当前研究的热点。由于 I g Y 与I g G 相似，具有中和病毒、抑杀细菌和中和毒 素等重要的生物学功能，但其稳定性又类似s l g A ，而 且在应用上具有纯度高、含量高、产量高、稳定性好、 采集方便，便于大规模工业化生产等优势在禽类肠 道感染的防治上已广泛应用，在防治H

34、p r i o r 感染方 面的研究也已经开始。刘立华等( 1 9 9 9 年) 制备了 p r i o r 超声裂解物的I g Y ，通过体外试验表明该I g Y 能阻断Hp r i o r 菌体蛋白的H e l a 细胞毒活性。许杨 等( 2 0 0 0 年) 用Hp y o r 全菌抗原免疫母鸡获得I g Y 。 陈翠萍等( 2 0 0 2 年) 用V a c A + np r i o r 株的超滤浓缩 上清液和超声破碎的菌体蛋白制备I g Y ，通过体外试 验表明能中和Hp r i o r 培养上清和菌体蛋白诱导的 V e r o 细胞毒活性，感染Hp y o r 的小鼠E l 服后转

35、阴率 可达1 0 0 L T J 。S H I N 等( 2 0 0 2 年) 用Hp r i o r 全菌抗 原免疫母鸡获得I g Y ，在感染沙鼠的动物模型中能减 少胃黏膜的损伤和淋巴细胞、中性粒细胞的浸润，减 少p r i o r 感染J 。S H I N 等( 2 0 0 3 年) 研究了抗 冠p y o r I g Y 的免疫特性后表明用全菌抗原免疫的 I g Y 未能测出抗V a c A 的抗体活性J 。本研究在成功 表达V a c A 重组蛋白的基础上，制备了较高效价的 l g Y ，通过B f l b c 小鼠1 3 服体内实验验证了V a c AI g Y 具有中和鼠p r

36、i o r 分泌的V a c A 毒性物质的作用，说 明可用于治疗Hp r i o r 感染，为制备抗且p r i o r 感染 的I g Y 制剂奠定了基础。 本实验构建动物模型的方法是参照国内外学者 构建Hp r i o r 感染模型的基础上加以改进。9 1 0J 。主 要是在中和胃酸后，先灌喂5 0 的酒精，人为地造成 B a l b c 小鼠胃黏膜损伤，然后再灌喂Hp r i o r 菌液。 实验结果显示，随着时间的推移，M 乃, o r 定植逐渐 增多。引起的炎症反应也加强，感染率达8 9 O ，说 明Hp r i o r 感染B a l b c 小鼠的动物模型是成功的。 治疗组采用

37、在感染麒p y o r 后4 周再给予V a c AI g Y ， 小鼠凰p y o r 的感染率与阳性对照组接近，以鼠。矿 o r 培养表明治疗组的小鼠感染上了H p r i o r 。组织 学检查显示，给予V a c AI g Y 治疗后，小鼠胃黏膜的炎 症反应程度比阳性对照组减弱，并且随着l g Y 剂尾的 增加，炎症减弱更为明显，表明V a c AI g Y 在胃内能够 中和V a c A 的毒性，阻止V a c A 引起炎症反应的发展。 本实验参照I g Y 治疗Hp r i o r 感染的相关报道J 。7 1 设计了治疗且p r i o r 感染的剂量，并找出了能治疗 H p r

38、i o r 感染的最小V a c AI g Y 剂量为4m g “。为进 一步制备抗H p r i o r 感染的I g Y 制剂提供了实验依 据。 【参考文献】 I D E L O N E YCR ，S C H I L L E RNL 。C h a r a c t e r i z a t i o no f 锄i nv i t r e s e l e c t e d a m o x i e i l l i n - r e s i s t a n t 删no fH e l i c o b a a e rp ，t o r i J A m i I I l i e m bA g e n t s C h

39、 e m o t h e r ，2 0 0 0 4 4 ( 1 1 ) ：3 3 6 8 - 3 3 7 3 2 M I N EY ，K O V A C SNJ C h i k e ne g gy o l ka n t i b o d i e sa 8t h e r a p e u t i c si n e n t e r i ci n f e c t i o n sd i s e a s e J JM e dF o o d ，2 0 0 2 ，5 ( 3 ) ：1 5 9 - 1 6 9 3 刘森，杨致邦，林珊珊，等幽门螺轩菌空泡毒索基因毒性片段的 克隆与表达 J 重庆医科大学学报，2 0

40、0 3 2 8 ( 6 ) ：7 2 0 - 7 2 3 4 邓颖杨致邦黄伟等幽门螺杆菌孽组巾性粒细胞激活蛋白卵 黄抗体的制备 J 世界华人消化杂志，2 0 0 7 ，1 5 ( 5 ) ：4 7 1 - - 4 7 5 【5 S H I NjH ，M I E R H AY A N G ，N A MSW ，e ta 】U s eo fe g g y o l k - d e r i v e d i m m u n 叫o b u l i na sa na h e n m f i v et oa n t i b i o t i cI m e a l m e n ! f o rc o n t r o

41、lo f H e l c o b a c t e rp y o di n f e c t i o n J 】C l i nV a c cI m m u n o l ，2 0 0 2 ，9 ( 5 ) ： 1 0 6 1 1 0 6 6 6 张亚历胃肠疾病内镜、病理与超声内镜诊断彩色对照图谱 M 】 北京：军事医学科学出版社2 0 0 0 ：1 9 5 1 9 6 7 陈翠萍杨朝晖，王永谦，等I g Y 抗体在体外和体内对幽门螺杆菌 作用的研究 J 】中华微生物学和免疫学杂志，2 0 0 2 ，2 2 ( 1 ) ：3 7 4 0 8 S H I NJH N A MSW K I MJT ，da

42、1 I d e n t i f i c a t i o no fi m m u n o d o m i n a n t H e l i c o b a a z , rF f l o r ip r o t e i nw i t hr e a c t i v i t yt oH e r r o r - s p e c i f i ce g g - y o l k i m m u n o g 】o b u l i n J JM e dM i e r o b i o l ，2 0 0 3 ，5 2 ( P t 3 ) ：2 17 - 2 2 2 9 康巧珍。段广才H p y l o r i 感染动物模

43、型的选择应用【J 中国人兽 共患病杂志2 0 0 4 2 0 ( 1 2 ) ：1 0 9 6 - 1 0 9 8 【l O 】H I N A Y A M AF ，T A K A G IS Y O K O Y A M AY e ta t E s t a b l i s h m e n t0 f g a s t r i c - e l c o b a a e rp y o r i n f e c t i o ni nM o n g D l i a ng e r b i l s J G 硒t r o e n t e m l ，1 9 9 6 ，3 l ( 1 ) ：2 4 2 S ( 上接第4 4

44、 5 页) 三株菌，它们具有相同的致病基因型和 极为相似的耐药谱( 除对复方新诺明的敏感性有所 差异外，其余1 2 种药物均相同) ，门诊泌外病区和急 诊一病区也分别发现了耐药谱完全相同的致病菌株， 且出现多重耐药性，表明这些菌株可能来源于同一传 染源，并提示有可能在局部出现了这些耐药菌株的爆 发流行，应及时采取有效措施以避免出现大规模的流 行。该医院是一所大型综合性教学医院，该院住院医 生、进修生、实习生等轮转科室的医护人员，或专科治 疗的患者等流动人员均有传播病原菌的可能。此外， 如果手术室、内镜检查室等场所诊疗器材消毒不彻 底也可引起病原体医源性传播。如果致病菌引起院 内感染大规模流行，

45、将会引起严重后果。因此建议做 好彻底消毒和防护工作。而耐药菌株的出现，更有可 能加剧医院感染的爆发流行。因此，应在了解当地细 菌耐药性变化趋势的基础上。有针对性地采取相应措 施予以预防。临床微生物实验室也应指导临床合理 使用抗生素，避免滥用抗生素药物引起的菌群失调和 二重感染，为临床合理用药，提供科学的指导。 【参考文献l 1 】张苏明许平，朱莉等医院感染患者分离的大肠埃希菌及肺炎 克雷伯菌耐药趋势分析 J 中国感染控制杂志，2 0 0 7 6 ，( 2 ) ： 1 2 0 1 2 4 2 O L I V I E RC ，S T E P H A N EB E D O U A R DB R a

46、p i da n ds i m p l ed e t e n n i n a t i o n o ft h eE s c h e r i c h i ac o l ip h y l o g e n e t i eg r o u p J A p p lE n v i M i c m b i o l ，2 0 0 0 6 6 ( 1 0 ) ：4 5 5 5 - 4 5 5 8 3 马俊英刘健华。陈杖榴细菌分型的分子生物学技术研究进展 J 中国兽医科学2 0 0 7 3 7 ( 1 0 ) ：9 1 4 - 9 1 8 4 刘丁，府伟灵细菌基因分型技术及其在医院感染中的应用 J 中华医院感染学杂志

47、，2 0 0 3 ，1 3 ，( 1 0 ) ：9 9 5 - 9 9 7 5 王春亭，靳长俊王勇，等重症监护病房患者下呼吸道院内感染 细菌及其耐药性分析 J 中华急诊医学杂志，2 0 0 7 ，1 6 ( 3 ) ：2 7 5 - 2 7 8 6 格口乐，李军，李成，等2 7 2 例大肠埃希菌的耐药性分析【J 】实用 预防医学，2 0 0 4 。1 1 ，( 1 ) ：1 8 2 7 倪语星，洪秀华细菌耐药性监测与抗感染治疗 M 】北京：人民军 医出版社2 0 0 4 ：1 5 8 戴自英多重耐药菌感染在I I 缶床上的重要意义 J 中华传染病杂 志，1 9 9 9 1 7 ( 2 ) ：7 7 - 7 8 万方数据