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1、生国史匿堕型盘查2 塑生墨旦筮! 璺鲞蔓垒塑 慢性高眼压兔模型的实验研究 1 8 7 实验研究 王影唐由之 【摘要】目的建立与临床相近的慢性高眼压兔模型。方法依据兔眼与人眼巩膜系数不同，推算人 眼眼压计进行兔眼测量时实际眼压与所测数值间比率关系后对2 0 只前房分别注射卡波姆及糜蛋白酶组兔 眼眼压升高情况进行对比分析。结果卡波姆组造模成功率9 0 ，眼压最高达5 1 6 m m H g ，高眼压状态持续3 0 余天。糜蛋白酶组：造模成功率3 0 ，眼压最高达3 2 m m H g ，高眼压状态平均持续约2 0 天。结论前房注射卡波 姆是一种有效的慢性高眼压兔造模方法。进行高眼压造模前，均应针对
2、所实验动物进行眼压的矫正，以避免 实验偏差。 【关键词】慢性高眼压；模型；兔 中图分类号：R 一3 3 2文献标识码：A文章编号：1 0 0 2 - 4 3 7 9 ( 2 0 0 9 1 0 4 0 1 8 7 - 0 4 E x p e r i m e n t a ls t u d yo nc h r o n i co c u l a rh y p e r t e n s i o nr a b b i t sW AN GY i n g , T AN GY o u z h i E y e H o s p i t a lo fC h i n aAc a d e m yo fC h i n e
3、s eM e d i c a lS c i e n c e s ，B e i j i n g1 0 0 0 4 0 , C h i n a 【A b s t r a c t 】O B J E C T I V ET om a k ec l i n i c a l l y u s e a b l er a b b i tm o d e l so fc h r o n i ch i g hi n t r a o c u l a rp r e s - s u r e M E T H O D ST w e n t yr a b b i t sm e a s u r e db yo r b i t o n
4、 o m e t e rw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t ot w og r o u p s ：c a r - b o m e ra n dc h y m o t r y p s i n W ec o m p a r e dt h ei n t r a o c u l a rp r e s s u r e ( I O P ) i nt h et w og r o u p s R E S U L T ST h e s u c c e s sr a t eo fg r o u po n ew a s9 0 a n dg r o u pt w ow a
5、 s3 0 T h eh i g h e s tI O Pw a g51 6 m m H gi ng r o u po n e a n d 3 2m m H gi ng r o u pt w o T h eo c u l a rh y p e r t e n s i o nl a s t e da b o u t3 0d a y si ng r o u po n ea n d 2 0d a y si n g r o u pt w o C O N C L U S I O N SI n j e c t i o no f c a r b o m e ri na n t e r i o rc h a
6、m b e rW a ga ne f f e c t i v em e t h o dt om a k e c h r o n i co c u l a rh y p e r t e n s i o nm o d e l I no r d e rt oa v o i de l T o r $ ，i tw a sr e c o m m e n d e dt ou s ea no r b i t o n o m e t e r b e f o r ee x p e r i m e n t 【K e yw o r d s 】c h r o n i co c u l a rh y p e r t e
7、n s i o n ；m o d e l ；r a b b i t 为满足青光眼各项研究的需要自1 8 7 0 年眼科 医生即开始探索建立慢性高眼压动物模型。至目前 为止有a 一糜蛋白酶、卡波姆、甲基纤维素、激光诱导 法、上巩膜静脉烙闭法、高渗盐水诱导法等 1 】。这些 方法中，后3 种方法主要用于鼠眼，能用于兔眼且可 作为术后长期观察的方法目前主要为前2 种，即d 一 糜蛋白酶和卡波姆。本课题为建立最佳慢性高眼压 兔手术观察模型特将2 种方法进行对比，结果如下。 1 对象和方法 1 1 实验动物及仪器 健康青紫兰兔1 0 只，普通级，雌雄兼用，体重 2 0 3 0 k g ，裂隙灯显微镜检查
8、无眼前节病变，由北京 市天坛生物制品有限公司动物实验室提供( 生产许 可证编号：S C X K ( 京) 2 0 0 4 0 0 0 2 ) 。卡波姆( C a r b o m e r 基金项目：国家自然科学基金项目资助( 3 0 6 7 2 7 1 1 ) 作者单位：中国中医科学院眼科医院，北京1 0 0 0 4 0 通讯作者：王影，E - m a i l ：w a n g y i n g t c m y a h o o C O r n c n 9 4 0H Y 一) 北京市海淀会友精细化工厂提供；仅一糜 蛋白酶( f t 一C h y m o t r y p s i n ) 上海阿敏生物技
9、术公司 提供。眼压计为日本H A 一1 型P e r k i n s 手持眼压计。 1 2 实验方法 1 2 1 实验设备矫正与原理：由于兔眼角膜以及巩 膜厚度均与人眼有差异，对于人眼适用归零的眼压 计在应用于兔眼时受到上述因素的影响将导致实 际眼压与测量值之间产生误差，且不同品种兔间亦 存在差异。因此。在测量兔眼前应针对兔眼对眼压计 进行矫正。 方法：先将眼压计送往公司进行归零矫正。青紫 兰兔4 只，用1 5 戊巴比妥钠( p e n t o b a r b i t a ls o d i u m ) 按每公斤体重1 5 m l 。进行耳缘静脉麻醉。将2 5 0 m l 蒸 馏水吊于与兔眼水平
10、位置蒸馏水袋与3 0 9 u a g e 针头 相连，桌旁垂直立一刻度尺。首先用1 5 0 前房穿刺刀 微穿透前房穿刺口要小尽量避免房水流出及损伤 晶状体。将3 0 9 u a g e 针头沿穿刺1 3 刺入前房，针尖处 完全置入前房助手辅助胶布固定，避免损伤眼内结 万方数据 J 8 葛 构。操作者利用眼压计测量眼压，以初始兔眼球高度 为初始水袋高度，水袋每次升高1 3 6 m m ，测量眼压一 次，连续升高4 次，每次测量记录眼压值。每只兔随机 选右左眼按上述操作3 次，选平均值。 物理原理：水的密度为l l n l ，汞密度为1 3 6 s m l 。l m m H g = 1 3 6 m
11、 m H 2 0 ，水袋每升高1 3 6 m m ，则使前 房内压力增高1 0 m m H g 。 1 2 2 正常眼压范围观察：未行造模前，随机选取本 组实验兔5 只，分别于每日7 点、1 0 点、1 3 点、1 6 点、1 9 点和2 2 点测量兔双眼眼压，并记录。连续观察7 天，以 观察本组实验兔正常眼压范围。 1 2 3 模型制作方法：青紫兰兔2 0 只，随机分成A 、B 两组( A 组：卡波姆；B 组：仅一糜蛋白酶) 。 A 组：1 0 只兔右眼角膜缘1 2 点位前房穿刺抽出 房水0 1 0 2m l 后将0 3 卡波姆合0 0 2 5 地塞米 松0 1 0 2 m l 经穿刺口注射
12、至前房。 B 组：注射药物前操作同A 组。仪一糜蛋白酶约 8 5 u ( 0 1 5 m 1 ) 自穿刺口经瞳孔区注射至后房。 1 2 4 青光眼模型后眼压观察：对模型A 、B 组分别 于术后第l 、2 、3 、7 、1 4 、3 0 、4 5 、6 0 、9 0 天进行眼压测 量，并观察术后模型眼部情况。 1 3 统计学方法 以上实验数据统计均采用S P S S l l 5 软件组间 比较选用t 检验，P I C T ，前 房内混浊减轻；虹膜充血消退：瞳孔散大直径约 6 m m ，对光反射弱；晶状体清，玻璃体清，眼底未见明 显异常。术后6 0 天，眼球不再扩张，球结膜充血、水肿 消失；角膜血
13、管翳消退，角膜云翳：前房周边深 I C T ， 前房混浊消失；瞳孔散大，直径约6 8 m m ，对光反射 消失：虹膜色素分布稍不均：晶状体、玻璃体及眼底 未见异常。术后9 0 天，眼球扩张未见回退，眼部状况 与术后6 0 天一致( 图4 ) 。 2 1 3d 糜蛋白酶组，8 只兔术后第l 天球结膜轻度 充血水肿，角膜清，前房略浅，少许絮状混浊，余未见 明显异常；术后1 个月。3 只兔眼压升高可见其球结膜 睫状充血，角膜清，前房深浅正常，混浊不明显，晶状 体清，玻璃体未见混浊，眼底变化不明显；术后9 0 天 至1 8 0 天，未见眼部有明显改变。2 只兔因注射针头经 瞳孑L 区向后房注射时损伤晶
14、状体前囊导致晶状体 混浊。 图1C a r b o m e r 术后第1 天角膜上方H 现混浊前房内有絮状混浊。图2C a r b o m e r 术后第7 天，角膜混浊、周边角膜血管翳眼球轻度 扩张。图3C a r b o m e r 术后第4 5 天角膜水肿减轻，周边角膜血管翳减轻，眼球扩张。图4 卡波姆与正常兔眼数码照片。左为正常兔跟 右为C a r h o m e r 模型眼。 万方数据 巾同- 1 堡堕i 盘查2 Q 螋笙8 旦第9 卷第4 期 2 2 兔眼实际眼压与常规眼压汁测量值的关系 实际眼压每升高1 0 m m H g 。眼压计测量值平均 升高5 8 1 m m H g ，即
15、眼压计测量约为5 8 1 m m H g a - l “ ，实 际兔眼眼压为1 0 m m H g ( 表1 ) 。 表l眼压测量值与水袋高度关系表 2 3 兔正常眼压范围 本组青紫兰兔眼压。最小值4 m m H g 最大值 1 3 m m H g ，平均7 8 l + 2 0 6 m m H g 。即检测眼压正常范 同4 1 0 m m H g 。根据测量值与实际眼压比率关系( 测 量值5 8 1 = 实际值1 0 m m H g ) ：最小值6 8 8 m m H g ，最大 值2 2 3 7 m m H g 平均1 3 4 7 + 3 5 5 m m H g 。结果本组所， j 青紫兰兔
16、眼压范同6 2 3 m m H g 。 2 4 慢性高眼压兔模型成功标准 矫正后眼压超过2 3 m m H g ，维持时间超过2 周，为 慢性高眼压造模成功。 2 5 模型眼眼压情况 卡波姆组：术后第l 天1 0 只眼均有不同程度 的眼压升高；第2 、3 天，眼压下降，随后升高；第7 天9 只眼均维持在高眼压状态并持续超过3 0 天 第4 5 天后部分眼压下降。仍有4 只眼在2 5 m m H g 以 上：至6 0 天，8 只眼眼压回落到正常范围。本组兔眼 眼压最高达5 1 6 m m H g 一般高眼压状态维持在 2 5 m m H g I 以上，平均持续时间3 6 0 2 1 7 天。1
17、0 只兔 眼中1 只眼眼压超过2 3 m m H g 持续2 个月以上：1 只 眼术后眼压第l 天升高后即下降，以后未再升高。 造模成功率9 0 。 。 糜蛋白酶组：术后1 5 天，3 只眼眼压轻度升高，但 未超过正常范围：术后3 0 天，3 只眼超过正常眼压范 围。持续1 5 天后开始同落，在术后6 0 天全部回落至正 常范同高H 艮压状态持续平均2 0 天。本组兔眼眼压最 高达3 2 m m H g ，高眼压状态平均在2 0 3 0 m m H g 平均 持续时间1 8 0 4 4 天。该组有7 只眼术后眼压未升高， 造模成功率3 0 。( 注：眼压结果已经过矫正，为实际 眼压值。卡波姆、
18、糜蛋白酶两组造模前后平均眼压对 比表见表2 。) 表2 卡波姆、糜蛋( - t 酶模型平均眼J E 对比表( m m H g ) 3 讨论 1 9 6 5 年P e r k i n s 手持眼压计问世其构造原理与 G o l d m a n n 压平眼压计相同，因该眼压计操作灵活而 广泛川于手术室、病床旁及动物实验中。由于该眼压 计是根据人眼解竭N , i 悼，H 上构常数进行设计因此，在动物 眼测量时南于角膜、巩膜厚度等眼组织常数以及不 同种属动物筹异。使其测量值较实际值偏低。1 9 9 1 年F i n g e r 等b j 利用P e r k i n s 眼压计测量条纹家兔眼压 仅为0
19、7 9 8 k P a ( 6 m m H g ) ，这与本实验所测眼压值相 符。本实验根据物理原理对眼压进行矫正，从而尽量 排除上述误差I 大l 素的影响达到准确描述眼压情况 的目的。本实验结果亦证明该眼压计测量值与实际 值差异较大进行眼压矫正是必要的。 至今为止，世界上尚无公认的难治性青光眼 动物模型。在现有的6 种慢性高眼压青光眼模型 中，激光诱导法是利用激光光凝小梁网。产生类似 于人原发性开角型肯光眼模删但要维持升高眼 压需反复多次进行光凝一般2 3 次，间隔至少2 周。m 细胞诱导法由于成功率相对较低。冈此临床 应用较少。1 9 6 4 年K i r s h 首先报道r 白内障摘除
20、术用O f , 一糜蛋白酶溶液后灌注引起暂时性眼压升高 的临床观察。1 9 7 4 年D a v i d 等报道，利 j 7 5 1 x c t 一糜 蛋r 1 酶后房注射眼压升高明显且伴有视乳头凹 陷，其诱导的高眼压可持续1 8 0 天以上。甲基纤维 素和复方卡波姆作用原理相似，主要是阻塞前房 角，术后眼压有下降趋势者需再次注射。该方法可 维持高眼压2 3 周t 6 。然而本试验观察发现，O f 一糜 蛋白酶模型成功率较低自角膜缘进行后房注射 操作困难，针头进入后房很容易损伤品状体，而发 生白内障、虹膜后粘连等并发症，本实验在预试验 阶段曾多次尝试不同方法进行陔药物注射，均未 达到理想效果，
21、这亦可能与操作者经验不足有关。 万方数据 l 州 另外。该组模型眼压升高超过正常范围的时间约 为注射后1 个月左右，一旦眼压升高不成功，将会浪 费1 个月的时间，导致实验周期延长，这亦是该模 型方法缺点之一。卡波姆是丙烯酸与烯丙基蔗糖 或季戊四醇交链而成的高分子聚合物，是一种药 剂新辅料。该药的特点是：当P H 值较低时呈溶液 状，随着P H 值的升高，药液的粘稠度逐渐增加而形 成水凝胶状。且当P H 为6 1 2 时最为粘稠。该药同 时还有乳化性、增稠性、助悬性和成膜性门】。2 0 0 2 年徐岩旧3 等利用复方卡波姆制作青光眼模型，结 果高眼压状态持续2 0 5 0 天，平均眼压在2 9
22、3 5 m m H g 。这与本实验结果相符。且在该文的提醒 下本组实验选用了体重超过2 5 k g l 簦3 兔，以减少因 高眼压导致眼球破裂的发生。 本实验结果提示，卡波姆升高眼压效果明确，最 高可达5 0 m m H g 。此高眼压状态可维持3 0 天左右，在 眼压略下降后约1 5 天还可再次升高。虽然，卡波姆注 射后，兔眼局部炎症反应明显，可致球结膜充血、角 膜混浊、虹膜表面血管充血等但模型眼压升高确 切，维持高眼压状态时间持久，因此，是建立兔慢性 消息 生国虫医腿型盘查2 Q 螋生8 旦筻1 2 鲞筮4 塑 高眼压模型的好方法。 参考文献 lW e i n r e bR N ，L i
23、 n d s e yJ D T h ei m p o r t a n c eo fm o d e l si ng l a u c o 一 啪r e s e a r c h J JG l a u c o m a 2 0 0 5 1 4 ( 4 ) ：3 0 2 3 0 4 2 栾春生陈晓明，邓应平，等兔眼中央角膜厚度与P e r k i n s 压平眼 压关系的研究l J J 中华眼科杂志2 0 0 5 ，4 1 ( 7 ) ：6 4 2 6 4 6 3 F i n g e rP T ，M o s h f e g h iD M ，S m i t hP D e ta 1 M i c r o w a
24、 v ec y e l o d e s t r u e t i o nf o rg l a u c o m ai nar a b b i tm o d e l J A r c hO p h t h a l t 0 0 1 1 9 9 1 ，1 0 9 ( 7 ) ：1 0 0 1 1 0 0 4 4 K i r s hR E G l a u c o m af o l l o w i n gc a t a r a c te x t r a c t i o na s s o c i a t e dw i t h u s eo fM p h a c h y m o t r y p s i n J A
25、 r c hO p h t h a l m o l ，1 9 6 4 ，7 2 ：6 1 2 5D a v i dD ，M a r v i nS B l o o d - a q u e o u sb a r r i e ra n da l p h a - c h y - m o t r y p s i ng l a n c o m ai nR a b b i t s J A m e r i c a nJo fO p h t h a l m o l ， 1 9 7 4 ，7 7 ( 3 ) ：3 7 8 - 3 8 3 6 祝枚东蔡丰英复方丹参注射液对慢性高眼压兔眼视神经轴浆 流影响的研究【J
26、】巾华眼科杂志，1 9 9 1 ，2 7 ( 3 ) ：7 3 7 冯端浩，郑毅卡波姆在半同体制剂中的应用【J 】中国药学杂志， 1 9 9 8 ，1 8 ( 9 ) ：4 2 0 4 2 1 8 徐 岩陈祖基，宋洁珍复方卡波姆诱发的兔高眼压模型与其他 兔高眼压模型的比较研究【J 】，巾华服科杂志，2 0 0 2 ，3 8 ( 3 ) ：1 7 2 - 1 7 5 ( 收稿口期：2 0 0 9 0 6 1 2 ) 河北省中医药学会眼科专业委员会举办学术论坛 2 0 0 9 年7 月1 9 日( 星期日) 河北省中医药学会眼科专业 委员会在石家庄市老地方饭店举办学术论坛出席会议的 有：河北省中医
27、药学会秘书长武智主任医师：河北省中医药 学会眼科专业委员会顾问河北省中医院眼科主任医师李清 文教授；河北省中医药学会眼科专业委员会副主任委员。河 北省中医院眼科主任医师秦杏蕊教授；河北省中医药学会眼 科专业委员会副主任委员，河北省人民医院中医眼科副主任 医师张彬副教授；河北省中医药学会眼科专业委员会常务委 员河北省中医院眼科副主任白世淼副教授：河北医科大学 第三医院眼科主任，硕士生导师，主任医师赵平教授；河北医 科大学第四医院眼科主任硕士生导师主任医师管永清教 授；河北医科大学第二医院眼科王振东主治医师；现代中西 医结合杂志编辑部刘武章主任：以及河北省人民医院中医眼 科主治医师庞荣、贾海波硕十
28、、李焕丽硕士；石家庄市第二医 院眼科主治医师左玉霞硕十等。 学术论坛由河北省中医药学会眼科专业委员会副主任 委员河北省人民医院中医眼科副主任医师张彬副教授主 持各位专家学者纷纷发言，中医眼科专家李清文教授、秦 杏蕊教授围绕着应用中医药、针刺治疗眼科疑难病介绍了 自己的临床经验和心得体会。西医眼科专家赵平教授、管永 清教授介绍眼科检查的新技术、新方法及现代眼科治疗进 展；年青的医师虚心向老前辈请教在临床上遇到的问题，中 西医眼科医生互相交流，取长补短，相辅相成，刘武章主任 介绍论文书写及发表论文的要求；各位医生各述己见。大家 欢聚一堂。 河北省中医药学会秘书长武智主任医师发表了霞要讲 话。他高度评价河北省中医药学会眼科专业委员会近年来 组织开展的学术会议和学术论坛以及义诊活动等他表示 河北省中医药学会全力支持眼科专业委员会举办的各项学 术活动，勉励大家为发展和提高河北省中医眼科学术水平， 为广大的眼病患者治好眼病，使患者早日恢复光明而贡献 力量。( 张彬) 万方数据