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1、大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法! 聂克王汝俊!王建华! （山东中医药大学肿瘤实验室， 济南 “ # $ $ ! %） “ $ $ ! % %；:- % ( ; + “ !；:- + “ ; ! !； :% % ; “ 文献标识码 / ? ! # % $ % J ! $ K ! “2 * 0 K !， “GI ! ; “ % + J ! $ K ! $2 * 0 K !。单点 法求出特异结合位点数( $ - ; “A 4 B / A9 / 0 0 K !。细胞浓度在 $ ; “ # J ! $ +# “ J! $+9 / 0 0 A K !范围内， 与标记配基特异性结 合容量成正比。同一
2、样品特异结合测定方法变异系数为 ( ; $ % L。竞争抑制实验证明! “ #= “，每瓶- ; (J! $ # P S ， 比活度为- ; # ! # J ! $ ! - P S K ! （( ; ( # ! J ! $ ! $ P S 2 * 0 K !） ， 放化纯度“ + # L， 批号+ + $ , “ -， 中国原子能 科学研究院同位素所提供。合成人 / ? ! # #2 ，T Q “ $ , $ ; “，O ? C 4 B U+ ( L，O / V B 4 G /N * 5 # 2 2 * 0 K !， ) 3 “W O X%!2 2 * 0 K !，) 3 W N X -“ $
3、2 2 * 0 K !， ) 3 N 0 , $2 2 * 0 K !，Y N 0 #2 2 * 0K !，W 1 O #2 2 * 0 K !。Q / G 4 ? 2 N：) 3 W“O X%$ ; #2 2 * 0 K !，) 3 “W O X%!2 2 * 0 K !， ) 3 W N X-“ $2 2 * 0 K !，) 3 N 0 , $2 2 * 0K !， Y N 0 #2 2 * 0 K !，W 1 O 1 E # $2 2 * 0K !， 0 ? 9 * A / ! ! 2 2 * 0 K !，P E K !，Q #2 2 * 0 K !，Z . .!2 2 * 0K !。
4、! 8 “ 药品五肽胃泌素注射液： 每支% $ $“ ， 批号 + % $ # ! -， 中国科学院上海生物化学研究所上海丽珠 东风生物技术有限公司。丙谷胺片： 胃泌素受体拮 抗剂， 每片$ ; “ ， 批号+ , ! ! ! “ “， 江苏金坛市制药厂。 磷酸组织胺：QR - $ ( ! #， 生化试剂， 每瓶!， 含量 （干重计） 不少于+ , L， 批号+ ! ! $ “ + !， 中国科学院上 海生物化学研究所上海东风生化技术公司。西咪替 丁注射液：W “ 受体拮抗剂， 每“2 0$ ; “， 批号 + , $ $ !， 尼克美制药 （中山） 有限公司。硝酸毛果芸 香碱注射液：Q受体激
5、动剂， 每2 0“ 2 ， 批号 ( - $ # “ $， 天津人民制药厂。硫酸阿托品注射液：Q 受体拮抗剂， 每2 0 $ ; #2 ， 批号+ - $ - $ “， 江苏省盐 城制药厂。 ! 8 # 动物 E Z#性大鼠， 普通级， （“ $ $ “ $） ， 购 于广东省医学实验动物中心 （合格证号“ 2, * $收集一次细胞。用 ( ) * + ,8将细胞悬浮， 此为胃粘膜混和细胞悬液。 （6） 富集壁细胞： 在试管中将 # ? ?用 密度梯度混和器制成线性密度梯度， 将混和细胞悬 液铺在上面， ;4 2 2“ , * $ ;离心; 4, * $， 在中间一 层收集壁细胞。用( ) *
6、 + , 8洗细胞两次以洗去 ! “ # ? ?， 并用( ) * + , 8将壁细胞悬浮。将细胞浓度 调至; A ; 2 1 ? ? ， 用于放射配基结合实验。 ! C ! 放 射 配 基 结 合 实 验参 考D # ? ?等 .和 E + F % , * G +等 % H I % “ )分析） ： 作J点， ; 6 4 K L M % ） 。总 结合 （O 9） 非特异结合 （P D 9）Q特异结合 （D 9） 。 *用B K R - P S程序作出D 9的饱和曲线， 以D 9对 D 9 E进行线性回归 （D % H I % “ )作图） ， 求出最大结 合容量 （!, % T） 和平衡解
7、离常数 （“)） 。U单点法 （检 测特异性结合位点） ： 在饱和试验的基础上， 用近饱 和浓度的标记配基做一点分析， ; 6 4 K L M % 2 2N , # ?B ;， 求出受体特异结合位点数。 “ # $% 6 4 K L M % 2; 2 ( ) * + , 8; 2 W $ ? % U ? )M % 2 8 ? ? A ; 2 1 ? ? ） ; J 2; J 2 ! C 9 方法学考察用单点法观察 ? ? ） 对特异性结合的影响。对同一批样品 （细胞浓度; A ; 2 1 ? ? ） 进行 1 # * 1 ? # ) 5作图 用大鼠胃壁细胞悬液作为受体制 备，以; 6 4K L
8、 M % 。D 9对D 9E的D % H I % “ )作图见图6。表明 本实验受体结合符合简单单位点受体结合模型。计 算出的结合参数!, % TQ # * / ) # * + 2 01 / ) , ( 2 3% ! ; 1 # * 1 ? # ) 5 8 2 * 2 3% ! ; ? ? ;。 9 A 9 不同细胞浓度对 B的影响在所试细胞浓 度范围内 （2 3 6 4 A ; 2 1! 6 A ; 21 ? ? ） ， 标记胃泌 素特异结合位点数随细胞浓度增加而增加，呈良好 :；% C （:） 的线性关系 （!“ # $ $ $ $，“!“ # “ “ “ %，直线回归方 程为# $! 0
9、 受体激动剂毛果芸香 碱和拮抗剂阿托品、 ?受体激动剂组织胺和拮抗剂 西咪替丁均无明显影响 （抑制率分别为% “ # ( 5， + # ( 5， # ( 5，$ # - 5） 。 综上， 我们参考 A 4 4等的方法在国内建立了大 鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法， 受 体结合参数与国外报道接近， 方法学考察该受体模 型符合受体结合实验要求。本模型的建立为在国内 进一步开展胃泌素受体相关性研究、 尤其是功能性 研究提供了一种新的方法。 本文得到四川省中药研究所赵军宁研究员、 广 州中医药大学脾胃研究所刘晓秋、 唐慧琼、 邵庭荫、 杜群等老师的帮助， 特致谢忱！ 参考文献 % 赵军宁，
10、王建华， 黄衡 0 : 6 . :? . - 0 ? A B / 0 B 7 1 F 2; : 9 2A U 1 F 2 / 1 M K X，: 3 : 1 3 F : ; KJ 4 A 1A U 1 F 2 0 K 0 9_ : /C : K 2 X G 0 9 : KJ ; A 9 ; : C _ 0 1 F: 2 M 0 4 0 ; 0 M CDKA U: J J ; A V 0 8 C : 1 2 4 X% # ) $ a % “ 0 0 K 0 9 _ : / 1 ; A 9 4 X: / / A 3 0 : 1 2 K _ 0 1 F 1 F 23 2 4 4 3 A 3 2 1
11、; : 1 0 A A U ; : 19 : / 1 ; 0 3J : ; 0 2 1 : 4 3 2 4 4 J ; 2 J : ; : 1 0 A / ; : 9 2 K U ; A C“ # ,a% “ $1 Aa% “$3 2 4 4 / G 0 : 1 3 A 2 U U 0 3 2 1 A U 1 F 2 0 K 0 9: / / : X_ : / ( # “ ) 5 _ 0 1 F 0 1 F 2 / : C 2 / : C J 4 2 6 E F 2 3 A C J 2 1 0 1 0 W 2 0 8 F 0 0 1 0 9: : 4 X / 2 / / F A _ 2 K1
12、F : 1% ,7 8 9 : / 1 ; 0 _ : / A M K 1 A9 : / 1 ; 0 3J : ; 0 2 1 : 4 3 2 4 4 J ; 2 J : ; : 1 0 A /_ 0 1 F:F 0 9 F/ J 2 3 0 8 U 0 3 0 1 X 6 F G F E D B GE F 2; : K 0 A 4 0 9 : K 0 K 0 9: / 8 / : XA U9 : / 1 ; 0 ; 2 3 2 J 1 A ;0 ; : 19 : / 1 ; 0 3J : ; 0 2 1 : 43 2 4 4 J ; 2 J : ; : 1 0 A /C 2 2 1 / 1
13、F 23 ; 0 1 2 ; 0 : U A ; 2 / 1 : 4 0 / F 0 9; 2 3 2 J 8 1 A ; 0 K 0 9: / / : X 6 ( ) *+ % , #b b S T 9 : / 1 ; 0 8 ; 2 3 2 J 1 A ;；; : K 0 A 4 0 9 : K 0 K 0 9: / / : X；9 : / 1 ; 0 3J : ; 0 2 1 : 4 3 2 4 4 ； ; : 1 中国临床药学杂志 H I I H年征订启事 中国临床药学杂志 原名 临床药学 ， 创刊于% $ $ 年。由中国药学会主办， 复旦大学药学院 （原上海医 科大学药学院） 承办，
14、 以促进临床药学学术交流和信息传递为办刊宗旨的全国性学术性期刊。主要报道我国 临床药学及相关领域的新成果、 新技术、 新方法， 包括药物不良反应、 药物相互作用、 药物动力、 血药浓度监测 以及医院药学学科的研究成果与实践。设有论著、 医师药师园地、 新药之窗、 药物经济学、 合理用药、 药物不 良反应、 综述等栏目。 本刊为双月刊， 大% -开本， - )页， 逢单月 ,日出版。每期定价(元， 全年) 元。邮发代号) 8 , ( +。欢 迎广大读者到本地邮局订阅， 漏订者， 请直接汇款至本刊编辑部。地址： 上海市医学院路% + =号 $ “信箱， 邮 编： “ “ “ + ； 电话：“ % 8 - ) “ ) % $ “ “ 8 , -， 传真：“ % 8 - ) % ( - ) $ = ()- 中国药理学通报 , 8 - . & 1 &“ 8 ( ! 4 ( 7 6 ) 6 : - 7 ( )E 9 ) ) & - . “ “ %D 2 3；% & （-）