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1、中 华器官移植杂志2 0 0 6 年2 月第2 7 卷第2 期C h in J O r g a n T r a n s p l a n t , F e h 2 0 0 6 , V o l. 2 7 , N o . 2 成人骨髓间充质干细胞的培养及其向 神经元样细胞诱导分化的实验研究 陈 刚 秦 尚 振 马 廉 亭 雷 霆 潘 力 医M 一巫 【 摘要】 目的探讨在体外诱导成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的方法。方法采 用梯度离心法和全骨髓法， 利用含血清的D M E M培养基培养成人骨髓间充质干细胞， 以仔 疏基乙 醇 诱导其向神经元样细胞方向分化。应用免疫细胞化学技术对培养细胞及其分化
2、细胞进行鉴定。结果 骨髓细胞培养至第 1 0 d时， 全骨髓法收获的细胞数为( 1 . 7 3 10 . 4 4 ) X1 0 丫ml , 而梯度离心法收获 的细胞数为( 7 . 6 5士 0 . 5 2 ) x1 0 / ml ， 其差异有统计学意义( P GO . 0 1 ) ; 但两种方法所得细胞的生物学 特性没有差别口 骨髓间 充质干细胞经P 琉基乙 醇诱 导后细 胞形态发生改变， 伸出突起并交织成网; 免 疫细胞化学法检测显示5 4 . 7 6 %士3 . 6 5 %的细胞表达神经元特异性蛋白NS E， 同时3 6 . 2 8 %士4 . 2 7 % 的细胞表达神经胶质细胞特异性蛋白
3、GF AP 。结论梯度离心法较全骨髓法收获细胞数量大。在体 外条件下， 利用P - 琉基乙醇和适宜的培养液可使骨髓间 充质干细胞定向分化为神经兀 【 关键词】 骨髓; 间质干细胞卜 细胞培养技术卜 神经元 Cu l t i v a t io n o f h u ma n t o n e ma r r o w me s e n c h y m a l s t e m c e ll s a n d in d u c e d d i f f e ren ti a ti o n in t o n e u roa a- l i k e c e ll s C HE NG a n g, QI NS h a
4、a g - z h e a , MAL i a n - t i n g , e t a l . D e p a r tme n t o f Ne u r o s u r g e r y, Wu h a n Ge n e r a l Ho s p i ta l , G u a n g z h o u C o m ma n d o f P L A, Wu h a n 4 3 0 0 7 0 , C h i n a A b s t r a c t O b j e c ti v e T o e x p lo r e a w a y th a t i n d u c e h u ma n b o n e
5、 m a r r o w me s e n c h y ma l s t e m c e ll s t o d if f e r e n t i a t e in t o n e u ron - l i k e c e l ls i n v it ro. Me t h o d s B o n e m a r row me s e n c h y m a l s t e m c e l ls we r e c u l t i v a t e d in a me d i u m c o n t a i n i n g s e r u m b y u s i n g d e n s i t y g
6、r a d ie n t c e n t r if u g a t i o n m e t h o d a n d wh o l e m a r r o w m e t h o d a n d we r e i n d u c e d t o d i f f e r e n t ia t io n b y (3 - me r c a p t o e t h a n o l . It n mu n o h i s t o c h emis - t r y w e r e u s e d t o i d e n t if y t h e t y p e o f c e l ls . R e s u
7、 lt s T h e n u mb e r o f c e l l s wa s ( 1 . 7 3 士0 . 4 4 ) X 1 0 / ml b y u s i n g wh o le n a r r o w me t h o d a n d ( 7 . 6 5 士0 . 5 2 ) X 1 0 7 / ml b y u s in g d e n s i t y g r a d i e n t c e n t r if u g a t i o n me t h o d a t t h e 1 0 t h d a y c u l t iv a t io n r e s p e c t i
8、v e l y . T h e r e wa s s ta t i s t i c a l l y s ig n if i c a n t d i f f e r e n c e ( PG 0 . 0 1 ) . Af t e r t h e in d u c t i o n , b o n e ma r r o w me s e n c h y ma l s t e m c e l ls d is p la y e d p roc e s s e s t h a t f o r me d e x t e n s i v e n e t w o r k s . P o s it i v e c
9、 e l l s f o r NS E w e r e 5 4 . 7 6 % 13 . 6 5 %, a n d f o r G F A P w e r e 3 6 . 2 8 % 1 4 . 2 7 % r e s p e c t i v e l y . C o n c l u s io n s T h e n u m b e r o f c e l ls w a s m o r e w i t h d e n s i t y g r a d i e n t c e n t r if u g a t io n me t h o d t h a n w i t h wh o le ma r
10、row me t h o d . B o n e m a r row me s e n c h y ma l s t e m c e l l s c o u ld e v e n t u a l ly d if - f e r e n t in t e in t o n e u r o n - li k e c e l l s i n v it r o b y (- me r c a p t o e t h a n o l a n d o p t ima l me d iu m K e y w o r d s B o n e ma r r o w; Me s e n c h y ma l s
11、t e m c e l l s ; C e ll C u l t u r e t e c h n iq u e s ; Ne u r o n s 神经干细胞的发现为神经细胞移植治疗神经系 统损伤和退行性病变提供了有效的移植物， 但由于 目前神经干细胞的来源仅限于从胚胎干细胞诱导分 化而来或从胎脑中直接分离而来， 很难获得足够的 神经细胞移植物; 虽然可利用自体细胞体外培养扩 增后再移植到中枢神经系统内， 但中枢神经细胞位 置深在， 获取细胞必然对组织造成损伤， 因此寻找一 种新的神经于细胞的来源对于神经科学领域基础与 应用研究的发展至关重要。骨髓间充质干细胞 ( B M MS C s ) 因其
12、易获取， 易生长， 有较强的增殖能 力， 并能多向诱导分化， 从而成为组织工程常用的种 子细胞r , 7 。最近的研究表明， B M MS C s 在一定的 条 件下可分化为神经细胞， 对 自体神经移植有潜在的 应用前景 2 , 3 1 。我们体外培养了成人 B M MS C s ， 并 通过体外诱导， 对成人 B MMS C s转化为神经千细 胞 、 进而分化为神经元及神经胶质细胞进行初步探 1 寸 。 材料与 方法 作者单位: 4 3 1 1117 11 广州军区武汉总医院 神经外科 ( 陈刚、 秦 尚 振、 马廉 亭、 播力 ; 华 巾科 技大 学同 济队 学院 附属 同济 医院神 经外
13、 科 ( 雷霆、 薛 4 01 ) 一、 材料 1 . 组织来源: 本院神经外科因脑外伤手术的 1 0 例患者， 在手术之前行骨髓穿刺抽取骨髓 6 一7 ml , 中华器官 移植杂 志 2 X )6 年 2 月第 2 7 卷 第 2 期C h in J O r g a n T r a n s p la n t , F c b 2 0 0 6 , V o l . 2 7 . N o . 2 并加肝素抗凝。其中男 6例， 女 4例， 年龄 2 3 -5 8 岁。患者及家属均知情并同意。 2 . 实验试剂: D ME M/ F 1 2培养基、 N2添加剂、 胎牛血清、 仔 疏基乙醇, 2 . 5 g
14、 / L胰蛋白酶以及青霉 素唯 连 霉素双抗溶液购自G i b c o 公司， 表皮生长因子 ( E G F ) 、 碱性成纤维细胞生长因子 ( b F G F) 购 自 P e p r o T e c h 公司， 小鼠 抗人C D 7 1 单克隆抗体购自 C h e mi c o n公司， 淋巴细胞分层液购 自天津 T B I ) 生 物工程公司， 兔抗人神经元特异性烯醇化酶( N S E ) 抗体、 小鼠 抗人胶质纤维酸性蛋白( G F A P ) 抗体、 S A B C免疫组织化学试剂盒和 D A B显色试剂盒购 自武汉博士德公司。 二、 实验方法 1 . 培养液的配置: B M MS
15、C s 培养液的组成为 8 0 0 g / L D ME M / F 1 2 + 2 0 0 g / L 胎牛血清+ 青霉素 1 0 0 U/ ml +链霉素 1 0 0 U/ ml 。预诱导液的组成为 8 0 0 g / I _ D M E M / F 1 2 + 2 0 0 g / L胎牛血清 +1 m m o l / L (3 - X I 基乙醇。 诱导液的组成为 8 0 0 g / L D M E M / F 1 2 + 5 m m o l / I月 一 琉基乙醇。分化维持培 养液的组成为8 0 0 g / L D M E M / F 1 2 + 1 0 g / L N 2 添加剂+
16、2 0 n g / m l E G F + 2 ( 1 n g / m l b F G F . 2 . B MMS C s 的分离与培养: 采用梯度离心法 和全骨髓法。梯度离心法是将骨髓液置于预先加有 淋巴细胞分层液的离心管中， 2 5 0 0 r / m i n 离心3 0 m i n后， 吸取富含有核细胞的界面层， 用 B MMS C培 养液重置细胞， 显微镜下细胞计数， 调节细胞密度为 1 x 1 0 / m l - 1 x 1 0 6 / m l ， 接种于5 0 m l 培养瓶内， 置 于3 7 0C ， 体积分数为5 %的C O z ， 饱和湿度培养箱 中培养。 2 4 h 后换液
17、， 去除未贴壁细胞， 以后每隔 7 2 h 换液 1 次。待贴壁细胞生长至完全融合后， 用 2 . 5 g / L 胰蛋白 酶消化传代， 按 1 X 1 0 5 / m l 接种， 每 隔7 2 h 换液 1 次。每日 在倒置相差显微镜下进行 活细胞形态观察并选取视野照相， 将细胞固定进行 C D 7 1 免疫细胞化学检查。全骨髓法是将获取的骨 髓直接种植到含 B MMS C培养液的培养瓶中， 置于 3 7 0C ， 体积分数为5 %的C 0 2 ， 饱和湿度培养箱中 培 养， 每隔 7 2 h换液 1次， 传代培养同梯度离心法。 培养的第 1 0 d 在显微镜下细胞计数 2种方法所得 细胞数
18、， 对其细胞数量的均数进行统计学分析。 3 . B MMS C s的诱导分化培养: 实验组选取第 3 一q代传代 B MMS C s 接种到预先置有多聚赖氨酸 涂布盖玻片的6孔培养板， 待细胞生长至完全融合 后， 进行预诱导。去除B MMS C s 完全培养基， 加人 预诱导液， 在3 7 ， 体积分数为5肠的C 0 2 ， 饱和 湿度培养箱中培养 2 4 h 。去除预诱导液， 加人诱导 液， 在 3 7 C， 体积分数为 5%的 C 0 2 ， 饱和湿度培养 箱中培养5 h 。去除 诱导液， 加人分化维持培养液， 在3 7 0C， 体积分数为5%的C 0 2 ， 饱和湿度培养箱 中培养， 每
19、隔 7 2 h 换液 1次。另设 3 个对照组， 对 照 1 组为空白对照， 即在预诱导液和诱导液中均去 除P - 琉基乙 醇; 对照2 组在诱导液中去除P - 琉基乙 醇; 对照3 组在预诱导液中去除p 琉基乙醇。各组 于不同的时间点在倒置相差显微镜下进行活细胞形 态观察， 选取视野照相并将细胞固 定， 进行N S E和 G F AP免疫细胞化学检查。 4 .免疫细胞化学染色: 采用链霉亲和素一 生物 素酶复合物法( S AB C ) 对细胞的种类加以鉴定。所 用一抗分别为鉴定骨髓间充质干细胞的 C D 7 1 ， 鉴 定表达神经元特异性蛋白的 N S E和鉴定神经胶质 细胞特异性蛋白G F
20、 AP抗体。光镜下观察， 随机记 数5 0 0 个细胞， 计算阳 性细胞百分率。 5 .统计学处理: 采用 S P S S软件( V 1 1 . 0 ) 进行 t 检验， 数据用均数士标准差表示， 以尸0 . 0 5 为差 异有统计学意义。 结果 一、 骨髓间充质干细胞的细胞形态学观察 梯度 离心分 离后 的有核 骨髓 细胞 部分在 B MMS C s 培养基中培养 6h即可见到有成纤维细 胞样细胞贴壁生长。2 4 h换液去除非粘附细胞后， 可见贴壁生长的细胞大部分呈梭形， 少部分呈多角 形， 细胞核居中， 折光性强。贴壁细胞呈单层生长， 生长迅速， 细胞呈团簇状， 分布不均， 显示出集群生
21、长趋势。培养后 6-8 d可见细胞相互间紧密贴 附， 呈条索状融合， 中心细胞轮廓不清， 体积变小， 而 周边细胞形态不变。1 0一1 4 d细胞长满整个培养 瓶底部 ， 呈片状融合。若不进行传代， 细胞可继续增 殖， 互相重叠形成复层。细胞传代后生长更加迅速， 一 般6 - 7 d 可传代 1 次， 传代细胞形态仍呈多角 形、 短梭形， 随着传代次数增加， 细胞突起增多， 以多 角形细胞为主。经免疫细胞化学技术鉴定， 细胞为 C D 7 1 阳性的骨髓间充质干细胞。 采用全骨髓法原代培养的前 4 -6 d因有大量 的红细胞漂浮及粘附于瓶底， 不便于观察细胞， 只能 在红细胞较少的部位见个别细
22、胞贴壁生长。第 1 0 d 时 全骨髓法收获的细胞数为( 1 . 7 3 士 0 . 4 4 ) x 1 0 / 中华器官移植杂志2 0 0 6 年2 月第2 7 卷第2 期C h in I O r g a n T n a n e p l a n t , F e b 2 0 0 6 , V o l. 2 7 . N o . 2 m l ， 而梯度离心法收获的细胞数为( 7 . 6 5 士 0 . 5 2 ) X 1 0 / ml ， 其差异具有统计学意义( P 0 . 0 1 ) ， 说明梯 度离 心法较全骨髓法收获细胞数量大。 两种方法所 得细 胞的生物学特 性没有差别。 二、 骨髓间充质干
23、细胞的诱导情况观察 预诱导 2 4 h后， 部分细胞体积变小， 细胞质以 细胞核为中心收缩， 胞体呈锥形或球形， 周围的胞质 收缩形成细胞的突 起， 少量细胞脱落、 死亡。 诱导5 h后， 绝大多数细胞呈锥形， 细胞的突起可进一步伸 长， 立体感强， 部分细胞周围有光晕， 类似神经元。 细胞诱导分化后在分化维持培养液中继续培养， 可 维持细胞较长时间 的存活， 可见细胞胞体呈锥形、 三 角形或不规则形， 折光性强， 有 2 个或多个突起， 并 有突起相互连接交织成网。 细胞诱导后5 h 进行免 疫细胞化学染色， 扁平的骨 髓间充质干细胞N S E表 达阴性， 具有神经细胞外形的细胞 N S E
24、表达阳性或 强阳性， 胞核和胞浆染色， 突起不染色。显微镜下记 数阳 性细胞， N S E阳性细胞占细胞总数的5 4 . 7 6 % 士3 . 6 5 0 o , G F A P阳性细胞占细胞总数的3 6 . 2 8 %士 4 . 2 7 。对照 1 组细胞形态基本没有变化; 对照 2 组仅部分细胞形态发生变化; 对照 3组中虽然有一 定数量的细胞形态类似神经细胞， 但是细胞脱落、 死 亡过多。免疫细胞化学染色， 对照 7 组细胞基本不 表达 NS E ， 对照 2组部分细胞的 N S E表达呈弱阳 性， 表达率较低 5 %) ， 对照 3 组部分细胞 NS E表 达呈阳 性或强阳性， 其表达
25、率为1 9 . 3 5 %士 6 . 6 3 %. 实验组与各对照组相比， 差异有统计学意义( P 0 . 0 1 ) 讨论 1 9 8 7 年F r i e d e n s t e i n 等发现 从骨 髓分离出的单 个核细胞在一定的条件下可诱导分化为成骨细胞、 成软骨细胞、 脂肪细胞和肌母细胞 ， 而且这些细胞扩 增2 0 - 3 0 代后仍能保持多分 化潜能， 这类细 胞被 称 为间充质干细胞， 是骨、 软骨和脂肪的组织来源。最 近的研究表明， 这种干细胞不仅存在于骨髓中， 外周 血中 也含有一定数量川。 作为组织工程技术重要的 种子细胞， 骨髓间充质干细胞的研究正日益受到重 视， 由于
26、骨髓间充质干细胞在骨髓中的丰度并不高， 因此将体内的骨髓间充质干细胞在离体条件下进行 分离纯化并实行体外扩增就显得尤为重要。目前用 于分离培养骨髓间充质干细胞的方法主要有梯度离 心法和全骨髓法两种。梯度离心法是将骨髓组织用 淋巴细胞分离液进行密度梯度离心， 以祛除血细胞 成分。全骨髓法是用培养液稀释骨髓后直接培养， 通过换液祛除血细胞成分而得到骨髓间充质干细 胞。在本实验中， 我们应用两种方法分离培养骨髓 间充质干细胞均获得了成功， 经免疫细胞化学技术 鉴定， 细胞表达骨髓间充质干细胞的特异性标志 C D 7 1蛋白。对两种方法进行 比较， 发现梯度离心 法比全骨髓法在相同时间内得到的细胞数量
27、多， 细 胞能较快的增殖， 而且在培养的前期易于观察细胞 生长情况。原因可能在于: ( 1 ) 梯度离心分离后， 得 到的单核细胞较单一， 细胞的相对密度减小， 细胞可 以充分吸收营养， 因此细胞生长速度较快; ( 2 ) 全骨 髓法培养时因大量的红细胞漂浮及粘附于瓶底 ， 占 据了空间， 不利于骨髓间充质干细胞的贴壁， 部分骨 髓间充质干细胞因长时间不能贴壁生长而死亡 ， 使 有限的细胞数量进一步减少; ( 3 ) 红细胞死亡、 破碎 后释放的血红蛋白和代谢产物可能影响骨髓间充质 干细胞的生长。从本实验结果看， 我们认为梯度离 心法是一种良好的分离培养骨髓间充质干细胞的方 法。 研究结果显示
28、， 骨髓间充质干细胞至少能分化 为成骨细胞、 成软骨细胞、 成纤维细胞、 心肌细胞、 骨 骼肌细胞、 肝细胞、 上皮细胞和神经元等 8 种以上其 他组织类型的细胞 4 s 7 。在神经科学领域， 重点研 究的是骨髓间充质干细胞与神经组织及神经细胞之 间的 关联。 有研究报道， 将标记的神经干细胞注人 辐射破坏造血系统的动物体内， 在被移植动物的骨 髓、 脾及外周血中都出现了由神经干细胞分化的血 细胞困。相反地， 骨髓间充质干细胞在体内也被证 实具有分化为神经细胞及胶质细胞的能力 7 ,8 1 。 体 外条件下， 将骨髓间充质干细胞转化为神经元和神 经 胶 质 细 胞的 研 究 起步 较晚， 2
29、 0 0 0 年W o o d b u r 产 - 和S a n c h e z 9 等相继报道了在体外条件下通过化学 和生物诱导物使骨髓间充质干细胞转化为神经元 影响骨髓间充质干细胞向神经细胞、 胶质细胞系统 定向分化的因素比较复杂， 目前诱导骨髓间充质十 细胞在体外分化成为神经细胞的方法有两种: 抗氧 化剂诱导和生长因子诱导， 二者比较， 前者较快速、 分 化 率 较 高。 W o o d b u r y 等 2 1 应 用 抗氧 化 剂份 琉 基 乙 醇进行诱导分化 研究， 约5 0 环一8 0 %的细胞分 化 为神经元。 除了R - 琉基乙醇， 其他抗氧化剂如二甲 基亚讽、 叔丁对甲氧
30、酚等也有此作用。抗氧化剂诱 导作用机制尚不清楚， 研究证实， 活性氧在细胞增殖 h 华 器官移 植杂 志 2 0 0 6 年 2 月第 2 7 卷第 2 期C h i n J O r g a n T r a n s p la n t , F e b 2 0 0 6 , V o l. 2 7 , N o . 2 分 化过程中起到第二信使的 作用， 气抗氧化剂是否 通过改变骨髓间充质干细胞内的氧化还原状态使其 分化为神经细胞有待进一步研究另外， 细胞的增 飨和分化受各种生长因子和细胞因子联合作用的影 响， 在这些因素中， 神经营养因子的作用尤为关键。 目前常用的细胞因子包括 E G F , b F
31、 G F , B D N F和 R A等， 推测其可能机制在于使骨髓间充质干细胞 定向， 继而 转化为神经干细胞， 促进其增殖并决定其 分化方向。 在我 们的实验中， 采用抗氧化剂R - 琉基 乙醇预诱导骨髓间充质干细胞2 4 h 再诱导5 h 后， 能够诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞方向分化， 5 4 . 7 6 %士 3 . 6 5 %的细胞表达N S E ， 诱导分化后的 细胞在含有生长因子 E G F和 b F G F的分化维持培 养液中继续培养， 可维持细胞较长时间的存活， 说明 该方法是可行有效的， 来源于间质组织的骨髓间充 质干细胞具有广谱的分化潜能和显著的可塑性。对 照实验显示
32、， R - 琉基乙醇诱导骨髓间充质干细胞分 化的过程是连续的、 逐步的， 省略预诱导期或诱导 期， 都可能影响细胞的分化率。 本实验的结果证实: 骨髓间充质干细胞在体外 培养条件下， 能成功地分离、 扩增 ， 在特定的微环境 下， 能向神经前体细胞方向分化， 并能分化为神经元 和胶质细胞， 这为神经系统疾病的治疗奠定了非常 重要的理论和实际意义。骨髓间充质干细胞来源广 泛， 容易获得， 分离培养增殖速度快 ， 不必进行永生 化就能获得足够的细胞用于移植， 避免了从脑部获 取细胞所造成的损伤; 另外， 骨髓间充质干细胞同时 具有多种分化潜能， 易于外源基因的转染和表达， 能 够进行自体移植， 避
33、免了可能存在的免疫排斥问题， 可以作为一种潜在的自体神经移植的细胞来源。进 一步的研究将着重解决骨髓间充质干细胞的纯化、 分化为神经元的功能等问题。 参考文献 1 D e a n s R ) , Mo s e le y A B . Me s e n c h y ma l s t e m c e l ls ; b io lo g y a n d p o t e n t ia l c l in ic a l u s e s . E x p H e ma t o l , 2 0 0 0 , 2 8 : 8 7 5 - 8 8 4 . 2 Wo o d b u r y D , S c h w a r
34、z E J , P r o c k o p D J , e t a l . A d u lt r a t a n d h u - m a n b o n e m a r r o w s t rom a l c e ll s d i ff e r e n ti a t e in t o n e u r o n s . J N e u r o s c i R e s , 2 0 0 0 , 6 1 :3 6 4 - 3 7 0 . 3 D e n g W , O b roc k s M , F is c h e r I , e t a l. I n v it r o d if f e r e n
35、t i a t io n o f h u m a n m a r r o w s t r o m a l c e l ls in t o e a r ly p rog e n it o r s o f n e u r a l c e l ls b y c o n d i t io n s th a t in c re a s e in t r a c e ll u la r c y c l ic A MP . B io c h e m B i o p h y s Re, C o mm u n , 2 0 0 1 , 2 8 2 : 1 4 8巧2 4 P it t e n g e r MF ,
36、 Ma c k a y A M , B e c k S C , e t a l. Mu l t il in s a g e p o t e n - i ia l o f a d u l t h u m a n m e s e n c h y ma l s t e m c e l ls . S c ie n c e , 1 9 9 9 , 2 8 4 : 1 4 3 - 1 4 7 5 K r a u s e D S , T h e is e N D , C o l le c to r M I , e t a l . Mu lt i- o r g a n , m u lt i l in e a
37、g e e n g r a f t m e n t b y a s i n g l e b o n e m a r r o w - d e r i v e d s t e m c e ll. C e ll , 2 0 0 1 , 1 0 5 : 3 6 9 -3 7 7 . 6 巧o r n s o n C R, R i c t z e R L , R e y n o l d s B A , e t . a l . T u r n i n g b r a i n in ro b lo o d : a b e m a ro p o ie t ic f a te a d o p t ed b y
38、a d u l t n e u ml s t e m c e ll s in v i v o . S c i e n c e , 1 9 9 9 , 2 8 3 ; 5 3 4 - 5 3 7 . 7 B r a z e lt a n T R , R o s s i F MV, K e s h e t G I , e t a l. F r o m m a r ro w to b ra in : e x p r e s s i o n o f n e u r o n a l p h e n o t y p e s i n a d u l t m ic e . S c i e n c e , 2
39、0 0 日 , 2 叩 : 1 7 7 5 - 1 7 7 9 8 M c z c y E , C h a n d r o s s K J , H a r t a G , e t a l . T u r n in g b lo o d in t o b ra in : c e ll s h e a r in g n e u r o n a l a n t ig e n s g e n e r a t e d in v i v o fr o m b o n e m a r r o w . S c ie n c e , 2 0 0 0 , 2 9 0 ; 1 7 7 9 . 9 S a n c h
40、 - R a m o s J , S o n g S , C a r d o - P e la ez F , e t a l - A d u l t b o n e ma r mw s tr o m a l c e ll s d i ff e r e n t ia t e i n to n e u r a l c e lls in v i t r o . E x p N c u ro l , 2 0 0 0 , 1 6 4 ; 2 4 7 - 2 5 6 . 1 0 S c h r e c k R , R i e b e r P , B a e u c r l e P A R e a c t
41、i v e o x y g e n in t e r m e d i a r e a a s a p p a r e n tl y w id e l y u s e d mc s a e n g e r s i n t h e a c t i v a ti o n o f t h e N F k a p p a B t r a n s c r ip t io n f a c to r a n d HIV - 1 . E M B O J , 1 9 9 1 , 1 0 2 2 4 7 - 2 2 5 8 . ( ft稿 日 期 2 0 0 5 -0 4 - 2 6 1 消 息 “ 2 0 0 6
42、 年诺华移植高峰论坛” 在昆明召开 ( 本刊讯) 北京诺华制药有限公司于 2 0 0 6年 1 月 4日至8日 邀请了来自全国重点移植中心的专家在美丽的春城昆明召开 了 2 0 0 6 年诺华移植高峰论坛” 会议。 论坛探讨了目前中国人群免疫抑制方案中如何更加合理地使用环抱素 A， 提出循证基 础上肝、 肾移植受者环抱素A使用及监测的建议; 还探讨了如何选择免疫诱导治疗的适用人群，以及在加用免疫诱导治疗 后如何调整其他用药方案等。参加会议的百余名专家认真听取了多个移植中心的学术报告和经验介绍， 并对上述议题进行 了充分的讨论。 相信通过此次会议的召开， 会对如何更加规范的使用环抱素 A和更加合理的使用免疫诱导治疗提供新的思 路 ( 余海萍)