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1、实用预防医学 2 0 0 5 年6 月 第1 2 卷第3 期P r a c t i c a l P r e v e n t iv e M e d ic in e , J u n . 2 0 0 5 , V o l 1 2 , N o . 36 5 9 文章编号: 1 0 0 6 一 3 1 1 0 ( 2 0 0 5 ) 0 3 一 0 6 5 9 一 0 3【 卫生检 验 与方法 学 介绍 】 建立胃损伤模型的方法及选择 夏勇， 吴惠岭， 傅剑云， 高筱萍， 余昭， 郑红生 中图分类号: R- 3 3文献标识码: B 在研究筛选胃 病的治疗药物之前， 常需要先选择好适合的 建立胃 损伤模型方
2、法， 通常可以通过药物的作用机制、 药物的 作用时间、 实验时间、 与人胃损伤相近程度等方面来考虑选择 适合的胃损伤模型。建立胃损伤模型的方法有多种， 本文将按 化学法、 物理法、 心理因素等分类进行探讨。 1 . 1 化学性胃损伤模型 非苗体抗炎药物引起胃损伤非幽体抗炎药物( N o n s t e - r i d a l a n t i 一 in f l - a m m a t o r y d ru g s , N S A I D ) 是阿司匹 林、 消炎痛等 一类具有抗炎、 解热、 镇痛的药物。 .N S A I D引起胃损伤的机制 目 前仍有分歧， 一般认为它可以通过破坏胃粘膜屏障，
3、改变细 胞膜的通透性， 影响粘膜血流和细胞再生， 抑制前列腺素等机 制引 起胃 损伤川。 用小鼠以阿司匹林3 2 m 创 掩灌胃， 每天一 次， 连续5 -7 d 建立胃损伤模型， 可以致小鼠胃粘膜表面出血， 还可以 造成胃 粘膜细胞严重脱落2 1 . 2 氰酸甲苯醋引起胃 损伤二异氰酸甲苯醋( T D I ) 是一种 低分子化学物质， 是制造聚氨醋树醋和泡沫塑料的主要原料， 接触了T D I 者可诱发迟发性哮喘反应。经研究， 经动式吸人 T D I 染毒新西兰兔， 会造成胃扩张， 胃壁纸样薄， 上皮糜烂、 萎 缩脱落， 功能贻 尽3 。 另外还会造成肺及翠丸受损3 。 染毒方 法: 采 用2
4、 砰动 式 染 毒 柜 染 毒， 以6 5 0 g / L ， 每 天4 h 吸 人， 连 续1 0 d 可建立起胃 损伤模型 3 1 . 3 尼古丁引起胃 损伤烟草中尼古丁已被证实可增加壁细 胞 数和胃酸排量a l 。吸烟又能减少进人胃腔中前列腺素E 2 ( P G E 2 ) 含量， 降 低胃 屏障功能5 。 实验证实: 尼古丁不仅可加 重酒精引起的胃损伤， 而其本身即可引起胃的组织学损伤。尼 古丁 可 增 加胃 毛 细 血 管的 渗透性。 给 予5 m g 尼 古丁弋 体 重 的 剂量就相当于一个重度吸烟者吸人的尼古丁量6 1 。通常以 2 5 心m l 尼古丁含量的饮用水喂试验动物1
5、0 d ， 即可建立胃 损 伤模型 6 。 1 . 4 幽门 螺杆菌( H P ) 引 起胃 损伤 幽门螺杆菌分泌一些毒素 及潜在的毒性酶例如: 细胞毒素、 尿素酶、 粘蛋白酶、 脂多糖、 脂 酶和磷脂酶A， 溶血素等都对胃粘膜有直接或间接的损伤作用。 另外幽门螺杆菌能诱发一些如粘膜侵人、 嗜中性粒细胞的激 活、 单核及巨噬细胞的激活、 白细胞移动抑制、 血小板活化因 作者单位: 浙江省疾病预防控制中心( 浙江杭州3 1 0 0 0 9 ) 作者简介: 夏勇( 1 9 6 8 一) ， 男， 浙江杭州人， 学士， 副主任技师， 主要从事 卫生毒理学及保健食品功能学检测与评价工作。 子( P a
6、 f ) 、 自 身免疫反应、 嗜酸粒细胞浸润和脱颗粒等一些胃粘 膜炎症反应引起胃 损伤7 1 。 可按下述方法进行感染建立模型: 每次感染前先禁食1 2 - - 1 4 h ， 用灌胃 器给菌液1 - 2 m l , 3 0 m in 后给食， 每周感染一次， 共6 次1 8 1 1 . 5 冰乙酸引起胃 损伤冰乙酸能使 G细胞内胃泌素分泌量 增加， D细胞内生长抑素分泌量减少， G细胞数目 增加， D细胞 数目 减少， 并且使血清、 胃窦组织中胃泌素分泌增加和生长抑 素分泌减少。 以冰乙酸制作大鼠胃溃疡模型时一般有两种途 径， 一种是在大鼠胃窦前壁注入冰乙酸， 国内采用的冰乙酸注 人剂量多
7、数报告为0 . 0 l M O 1 ， 另一种是用大鼠以 戊巴比 妥钠 腹腔内麻醉， 仰卧固定、 常规消毒皮肤， 上腹部皮肤正中切口、 打开腹腔找到胃， 以1 m l 注射器在胃窦前壁注人冰乙酸0 . 0 5 m l 、 达胃壁肌层与浆膜层之间， 将大网膜组织与注射部位胃窦 壁浆膜组织缝合一针， 缝合腹膜、 腹壁、 皮肤， 术后单笼饲养 8 d 10 , u 7 ， 即可建立胃 损伤模型。 1 . 6 酒精引 起的胃 损伤一般来说， 酒精可增强细胞膜的通 透性， 破坏胃 粘膜屏障而致溃疡， 另外酒精可以刺激胃剧烈蠕 动， 引起机械性胃损伤。 模型建立简单， 实验前禁食2 4 h ( 期间 可自
8、由 饮水) ， 以无水乙 醇灌胃0 . 6 m l/ 只， 1 h 后即建立起酒精 灼烧性胃 损伤模型 ” 。 2 物理性胃损伤模型 2 . 1 缺血再灌注引 起胃 损伤 缺血再灌注是一种常用的 研究 胃损伤的动物模型， 其产生胃 损伤的原因一般认为与胃粘膜血 流减少、 组织代谢活动减弱导致处理返流H 十 能力降低、 以及再 灌注过程中 生成的大量氧自由 基有关 14 1 ， 另外胃 腔内 适量胃酸 对损伤的 发生也是一个不可缺少的重要因素7 13 。 通常采用腹 腔动脉夹闭3 0 m i n 后松开动脉夹再灌流 1h即建立起动物胃 损伤模型 14 1 2 . 2 枪弹噪声引起胃 损伤以5 6
9、 式冲锋枪射击时产生的脉 冲噪声， 对大鼠 连续进行声刺激， 结果胃粘膜损伤指数显著高 于对照组， 光镜、 电镜观察组织学变化也有显著区别; 血清促胃 液 素 ( G g ) 及 血 浆内 皮 素( E T ) 均 显 著 高 于 对 照 组， 血 浆 一 氧 化 氮( N O ) 显著低于对照组 “ 。以5 6 式冲 锋枪射击时产生的 脉 冲噪声， 对大鼠连续进行声刺激2 4 h 即可迅速建立起胃粘膜损 伤模型。 2 . 3 冷 拘束引 起胃 损伤 有资料表明 U 7 l ， 应激状态胆碱能神 经元功能亢进造成平滑肌强烈收缩， 可致胃 粘膜屏障功能下降 和粘膜缺血而导致溃疡。实验前禁食2 4
10、 h ， 自由饮水。动物四 6 6 0实用预防医学2 0 0 5 年6 月第1 2 卷第3 期P r a c t i c a l P r e v e n t iv e Me d ic in e , J u n . 2 0 0 5 , V o l 1 2 , N o . 3 肢绑扎固定后置于4冰箱则可制备应激性溃疡模型。也有 学者将大鼠捆绑固定于鼠板后， 将鼠板垂直浸人( 1 9 11 ) 水 浴中， 4 h 后制成大鼠胃 损伤模型 1 s 1 3 心理性胃损伤模型 S a w r e y WL 设计的模型: 将鼠笼的金属底栅平均分成为三 部分， 饲料和饮水的容器分别放置在笼的两端， 大鼠置于鼠
11、笼 的中央部分， 并给两边的金属栅持续地通上直流电。实验时， 每当大鼠摄食或饮水就会遭电击， 使大鼠产生想进食又怕电击 的矛盾的心理， 即前进一 后退的心理冲突( a p p r o a c h a v o i d a n c e c o n fl i c t ) . 3 0 d 后， 在心理冲突、 饥饿、 干渴、 电刺激共同 作用下， 7 6 % 的 大鼠 出 现胃 粘膜损伤U 9 1 . B a r b o r ia k 等的 试验观察表明， 将大鼠饲养在带有活动转轮的笼内， 用计算机记录一天内的活 动量， 通过改变生活节律并限制进食， 7 - - 9 d 后可以导致大鼠 胃 粘膜的 损伤
12、2 0 ,2 1 1 . 有学者认为极度的恐惧感亦可引起胃损伤。他们将鼠笼 底面栏栅的相邻两根通以不同的电极， 大鼠一旦接触两根不同 极性的栅棒就要被电击。经历几次电击之后， 大鼠被迫踩在相 同电极的栅棒上， 2 4 h 后大鼠 就出现急性胃 粘膜病变2 2 1 。 还有 学者先通过闪光和脉冲高压电刺激大鼠并使其形成心理应激， 尔后只采用闪光性刺激， 也可使大鼠 产生胃 粘膜损伤:2 2 1 另外还可以根据胃损伤因子来选择模型。据统计， 有很大 ， 部分胃 溃疡是由 幽门 螺杆菌( H P ) 的 致病作用所引起 7 1 。 所以 以幽门螺杆菌建立起的胃损伤动物模型与人类病因非常接近。 适用于
13、一般的治疗 I P 感染引起的胃溃疡及抗 H I 类药物的研 究筛选。尼古丁可以促进胃 酸的排量， 抑制P G E 2 的分泌， 降低 胃粘膜屏障功能， 是胃粘膜病变的一个重要损伤因子。如果我 们要筛选一种针对吸烟人群的胃粘膜保护剂， 用尼古丁来建立 动物模型就更有说服力。 因为职业的原因， 有部分人长期暴露在强大的噪音环境 中， 对噪音引起的急性胃 损伤也不容忽视。枪弹噪声胃损伤模 型的建立， 为研究此类因素引起的胃粘膜损伤的发病机制及筛 选针对性的治疗药物创造条件。 应激性溃疡( S U) 是由危重疾病和强烈情绪变化引起的常 见临床合并症 ” ， 冷拘束应激性溃疡模型则可用于药物对应激 性
14、胃溃疡发生的保护作用及其机制的研究。 由诸如恐惧、 紧张、 狂躁、 抑郁、 矛盾、 冲突、 臣服等心态引 起的胃 粘膜损伤都被认为是有心理因素参与的模型。但是， 以 上心理的因素一般都是通过对躯体的刺激的方式来诱导并实 现。这一类制造模型的方法虽然较好地突出了大鼠矛盾心理 冲突对胃粘膜损伤的作用， 但是没有能够完全排除相关的躯体 刺激因素( 比如电刺激、 饥饿、 干渴等) 。因此， 选择此类模型因 充分考虑躯体刺激因素对实验结果的影响。 4 讨论 如上所述， 损伤可由多种致病因素引起， 其作用机制和作 用特点各不相同， 研制筛选各种针对病因的药物对于胃 粘膜病 变的治疗具有重要意义。因此， 选
15、择、 制作合适的动物模型是 药物研制过程中经常需要考虑的问题。一般可以通过对病程 的长短、 与人类胃损伤机制的相近程度及胃粘膜的损伤因子等 方面来考虑选择适合的胃损伤模型。 从病程的长短来考虑， 胃损伤可分为急性和慢性两种类 型。对于急性酒精性胃粘膜损伤常用酒精制作的急性胃粘膜 损伤模型来模拟， 而对于一些慢性的溃疡性胃粘膜损伤常用冰 醋酸制作模型一2 3 1 。 如果从与人类胃 粘膜病变的损伤机制的相近程度来虑， 情 况就相对复杂一些。N S A I D胃损伤机制可能首先破坏胃粘膜 屏障并进人细胞内， 为胃液中的 H+进人细胞内打开道路， 造 成细胞内P H下降， 渗透压上升， 细胞肿胀变性
16、乃至坏死。然后 或与此同时， N S A I D也抑制了前列腺素的产生， 受损伤的胃粘 膜不能及时修复 。如果治疗胃溃疡的新药是以升高胃粘膜 细胞P H， 促进前列腺素产生作为治疗机制， 应该选择 N S A I D 建立胃 损伤模型比较合适。缺血再灌注也是一种常用的研究 胃损伤的动物模型， 其产生胃损伤的原因一般认为与胃粘膜血 流减少、 组织代谢活动减弱导致处理返流H+能力降低、 以及 再灌注过程中 生成的大量氧自由 基有关 13 . 14 1 。因此， 用抗酸药 或H 2 受体阻断剂等措施减少胃酸形成， 皆可对胃粘膜损伤产 生不同程度的保护作用。缺血再灌注法能为寻找抗酸药或 H 2 受体阻
17、断剂类药物提供实验基础及药效的验证标准。 参考文献 1 陈振东， 胡小龙， 梅蔚德， 非街体抗炎药物引起胃损伤的机制与对策 J . 实用癌症杂志， 1 9 9 2 , ( 7 ) : 6 0 一 6 1 . 2 赵维中， 岑德意， 王瑜， 等. 大剂量酮芬洛芬与A l l 噪美辛的致小鼠胃 粘膜损伤作用 J . 安徽医科大学学报， 1 9 9 4 , 3 4 ( 2 ) : 2 7 一 2 9 . 3 陈作兴， 陈晓琴， 韦玉忠. 吸人二异氰酸甲苯酷致大白兔肺、 胃等脏 器损害的 病理观察L J . 职业医学， 1 9 9 4 , 2 1 ( 6 ) : 4 8 . 4 J G u o F N
18、 , C h e n G Z , L i u S Q . T h e e f f e c t s o f s m o k in g a n d n i c o n t i n e o n t h e p a r ie t a l c e l l m a s s o f h u m a n b e in g s a n d r a t s J . G a s t r o e n t e r a l H e p a t o l , 1 9 8 6 , 1 : 4 5 . 5 1 M e e r e a d y D R , C la k L , C o h e n M M. C ig a r e t
19、 t e s m o k i n g r e d u c e s h u m a n g a s t r ic l u m i n a l p r o s t a g la n d in E 2 J . G u l , 1 9 8 5 , 2 6 : 1 1 9 2 . 6 J a v i s L R , Wh i t e h e a d R . E f f e c t o f n ic o n t i n e o n t h e m o r p h o lo g y o f t h e r a t g a s t r ic m u s c o s l J . G a s t r o e n
20、t e r o lo g y , 1 9 7 8 , 7 8 : 1 4 4 8 . 7 王继德， 周殿元， 张万岱. 幽门螺旋菌的致病机制 J . 国外医学消化 系疾病分册， 1 9 9 4 , 1 4 ( 1 ) : 1 4 一 1 6 . 8 张占海， 杨丽彩， 危北海， 等. 建立萎缩性胃炎幽门螺旋杆菌感染动 物模型的方法 J . 中国中西医结合脾胃 杂志， 1 9 9 6 , 4 ( 1 ) : 4 6 一 4 7 . 9 孙凤蓬， 宋于刚， 朱新生， 等. 冰乙酸性大鼠胃溃疡模型的建立及溃 疡胃 窦粘膜的光镜和透射电镜观察 J . 世界华人消化杂志， 2 0 0 1 , 9 ( 2
21、 ) : 1 3 5 一1 3 8 . 1 0 孙凤蓬， 宋于刚， 覃汉荣. 胃溃疡大鼠胃泌素、 生长抑素和“ D细 胞的变化 J . 世界华人消化杂志， 2 0 0 4 , 1 2 ( 2 ) : 3 6 3 一 3 6 6 . 1 1 蒋海清， 侯奕， 黄晓焰， 等. 辣椒治疗vq粘膜损伤及溃疡的实验与 临床研究仁 J 1 . 赣南医学院学报， 2 0 0 3 , 2 3 ( 4 ) : 3 6 9 一 3 7 0 . 实用预防医学 2 0 0 5 年6 月 第 1 2 卷 第3 期 P r a c t ic a l P r e v e n t iv e M e d i c in e ,
22、J u n . 2 0 0 5 , V o l 1 2 , N o . 3 6 6 1 文章编号: 1 0 0 6 一 3 1 1 0 ( 2 0 0 5 ) 0 3 一 0 6 6 1 一 0 2 人类精子标本的石蜡包埋与染色技术 朱文兵 ， 颜亚晖2 ， 郑 晖2 ， 蒋海鹰2 摘要: 目的探索一种简便对精子标本能够长期保存而又能观察精子形态的新途径。方法将处理后的精子采 用石蜡包埋、 切片、 巴氏染色; 薄均匀易于做精子形态分析。 与直接涂片再行巴氏染色比较。结果染色后的精子头、 颈、 体及尾部结构清晰、 完整， 厚 关键词: 精子; 石蜡包埋; 结论用石蜡包埋、 切片、 巴氏染色法与直
23、接涂片的巴氏染色法相比无差异。 染色 中图分类号: 8 3 2 1 . 1文献标识码: B 常规的精子形态观察均采用精液洗涤后， 直接涂片再行巴 氏 染色， 中 性树脂封片后镜检。该法简单、 方便， 快速， 在临床 上得以 广泛应用川。 但在实际工作中， 我们发现直接涂片常出 现涂片厚薄不均匀、 重叠、 易脱片、 易褪色， 对异常精子标本， 不 便于长期保存和进行回顾性研究。最近我们将处理后的精子 标本采用石蜡包埋、 切片、 巴氏染色， 解决了上述问题， 取得了 满意的效果。其具体操作方法介绍如下。 等量生理盐水， 混匀后取0 . 0 2 m l 涂片， 常规巴氏染色。 将上述剩余精液标本离心
24、1 0 m in , 3 0 0 0 转/ m in ， 吸干上清 液， 沿管壁缓慢加入 1 0 %福尔马林固定液 2 m l ， 精子表面的蛋 白遇到福尔马林立即凝固成团块状， 用扁平的弯头竹刮子轻轻 刮取试管底部的精子， 尽量使精子成团悬浮于固定液中， 固定6 h 以上， 去上清液， 轻轻取出精子团块， 用擦镜纸包好， 滴加伊红 染1 m i n ， 人脱水小筐， 置自 动脱水机按常规组织标本脱水、 透 明、 浸蜡、 石蜡包埋， 切成5 fa n 厚的石蜡切片， 作巴氏染色。 1 对象与方法 1 . 1 对象 本院男性不育门诊病人中随机选取1 5 例不育2 年 以上和5 例正常生育男性，
25、年龄 2 2 一3 5 岁， 每次精液量 2 一6 耐 。 1 . 2 方法 每例精液标本液化后， 用等量生理盐水洗涤2 次 ( 5 m i 司次) ， 洗出精浆， 离心 1 0 m i n , 3 0 0 0 转/ m i n ， 去上清液， 加 2 结果 实验组2 0 例标本除1 例外， 其余 1 9 例镜检观察与传统的 巴氏染色法相比无差异。染色后的精子头、 颈、 体及尾部结构 清晰、 完整， 厚薄均匀便于做形态分析， 见图1 ， 图2 0 作者单位 作者简介 1 中南大学生殖与干细胞工程研究所( 湖南 朱文兵( 1 9 6 5 一) ， 女， 湖南双峰人， 助理研究员 长沙4 1 0
26、0 7 8 ) ; 2中南大学基础医学院病理学系 ， 主要从事生殖与遗传学研究工作。通讯作者: 蒋海鹰。 一一一J工! 勺一气 2勺 尸liF.esL 1 2 张晓珠， 常雅萍， 于永利. 梅花鹿免疫细胞活性因子对乙醇型胃粘 膜损伤模型鼠的 保护作用 J . 中国生物制品学杂志， 2 0 0 3 , 1 6 ( 1 ) : 3 9一4 0 . 1 3 O w e n D A A . r e d u c t io n b y c im e t i d i n e o f a c u t e g a s t r i c h e m o r r h a g e c a u s e d b y r e
27、 in f u s io n o f b lo o k a f t e r e x p o s u r e t o e x o g e n o u s a c id d u r in g g a s t r ic is c h e m ia in r a t s J J . ( 扣 s t r o e n t e r o lo g y , 1 9 7 9 , 7 7 : 9 9 一 9 8 5 . 1 4 要瑞莉， 张连元， 门秀丽. 大鼠肢体缺血再灌注所致胃粘膜损伤及其 机制 J . 天津医 学院学报， 2 0 0 4 , 8 ( 4 ) : 4 4 8 一 4 4 9 . 1 5 裕 新，
28、 刘国实， 李栓位， 等. 枪击噪声对大鼠胃粘膜的损伤机制 J . 世界华人消化杂志， 2 0 0 0 , 8 ( 1 ) : 1 9 一 2 1 . 1 6 徐叔云， 卞如镰， 陈修. 药理实验方法学 M . 第2 版. 北京: 人民卫 生出版社， 1 9 9 1 . 9 3 6 一 9 3 8 . 1 7 张根， 孙 俊， 钱大青， 等. 中国危重病急救医学 J . 2 0 0 0 , 1 2 ( 2 ) : 3 0 一3 5. 1 8 李玉梅， 彭贵勇， 房殿春， 等. 大鼠应激性胃粘膜损伤与细胞泌酸的 关系 J . 第三军医大学学报， 2 0 0 3 , 2 5 ( 2 ) : 1 2
29、 7 一 1 2 9 . 1 9 聂时南， 李兆申， 许国铭， 等. 躯体性及心理性应激状态下大鼠胃粘 膜N O S 活性与胃粘膜损伤【 J . 第二军医大学学报， 2 0 0 0 , 2 1 ( 1 ) : 1 0 1 2. 2 0 B a r b o r ia k J . J k n o b lo c k H . W. G a s t e i c l e s io n s i n f o o c 一 r e s t r i c t e d y o u n g r a t s J . P r o c . S o c . E x p . B i o l . Me d . 1 9 7 2 , 1
30、 4 1 : 8 3 0 一 8 3 2 . 2 1 Wa t a n a b e K, H a r a CO g a w a N . R e l a t io n s h ip le t w e e n r u n n i n g a c t iv i t y r h y t h m a n d t h e d e v e lo p m e n t o f a c t iv i t y 一 s t r e s s u lc e r in r a t s 川 . J p n J P h a r m a c o l , 1 9 9 0 , 5 2 ( 3 ) : 4 2 一 4 2 9 . 吴先哲. 几种心理性胃粘膜损伤动物模型评述【 J . 湖北中医杂志 2 0 0 2 , 2 4 ( 3 ) : 5 2 一5 6 . 卫生部 1 6 6. 保健食品检验与评价技术规范 M咋 . 北京， 2 0 0 3 . 1 6 3 ( 收稿日期: 2 0 0 4 -1 2 - 0 1 )