对抗大鼠肝纤维化模型自发逆转的实验研究.pdf

《对抗大鼠肝纤维化模型自发逆转的实验研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《对抗大鼠肝纤维化模型自发逆转的实验研究.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、四川医学2 0 0 9 年1 0 月第3 0 卷( 第1 0 期) S i c h u a n M e d i c a lJ o u r n a l 2 0 0 9 ，V d 3 0 ，N o 1 0 1 5 1 3 对抗大鼠肝纤维化模型自发逆转的实验研究 刘彦1 ，王忠琼2 ，吴永耀2 ，牟晓洋2 ( I 成都市第五人民医院消化内科，四J I l 成都6 1 1 1 3 0 ；2 泸州医学院附属医院，四川泸州6 4 6 0 0 0 ) 论著 【摘要】目的探讨一种可行的方法对抗c c L 4 腹腔注射诱导的大鼠肝纤维化模型的自然恢复趋势，以确保药物 或细胞移植等方法对肝纤维化治疗效果的可靠性。

2、方法5 0 C C k 腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型，然后随机分4 组 改皮下注射不同剂量C C L 4 ( 0 0 2 0 0 8 m l l O O g ) ，通过纤维化程度分期、纤维化半定量统计分析、肝功能和血清肝纤维 化指标测定来评估肝纤维化。结果C C L , 腹腔注射6 周，肝组织；r 管区和血管周围出现较粗大的纤维间隔。在抗逆转 实验的第2 周和第4 周，皮下注射0 0 6 m l l O O g 体重C C L 4 组的纤维化水平与造模成功时的差异无统计学意义( P 0 0 5 ) 。结论时大鼠肝纤维化模型使用皮下注射5 0 C C L , ，0 0 6 m l 1 0 0 9

3、 体重，1 次周，能够将造模时的纤维化水平 维持4 周。 【关键词】对抗；大鼠；肝纤维化；自发逆转 【中图分类号】R - 3 3 2【文献标识码】A【文章编号】1 0 0 4 - 0 5 0 1 2 0 0 9 ) 1 0 - 1 5 1 3 - 0 3 n ee x p e r i m e n a o no fo p p o s i n gn a t u r a lr e c o v e r yo fH v e rf i b r o s i sm o d e li nr a t s L I UY a h 。W A N GZ h o n g - q i o g ，W U Y o n g - y

4、 a 0 2 ，e ta 1 1 C h e n g d uN o 5P e o p l e sH o s p i t a l 。C h e n g d u ，S i c h u a n6 1 1 1 3 0 ；2 T h eA f f d i a t e dH o s p i t a lo f a z h o uM e d i c a lC o l - k 酽。1 a z h o u ，S i c h u a n6 4 6 0 0 0 ，C h i n a 【A b s t r a c t 】O b e J c t i v e F o rav i a b l em e t h o dt Oo

5、 p p o s et h en a t u r a lr e c o v e r yt r e n do fC C L 4 - i n d u c e df i v e rf i b r o s i sm o d e li n r a t sb yi m r a p e r i t o n e a li n j e c t i o na f t e rs t o p p i n gi n d u c t i o n T oe n s u r et h a td r u g s ，c e l lt r a n s p l a n t a t i o na n do t h e rm e t h

6、 o d so ft r e a t m e n t t of i v e rf i b r o s i si s r e l i a b l e M e t h o d s5 0 C C L , i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n ，t w i c eaw e e k ，s u s t a i n i n gs i xw e e k si n d u c e df i v e rf i b r o s i s m o d e li nr a t s 。T h e na l lr a t sa I ed i v i d e di n t

7、 o4g r o u p sr a n d o m l ya n ds u b c u t a n e o u si n j e c t e dw i t hd i f f e r e n td o s e s5 0 C C L , ( 0 0 “ 2 0 0 8 m l l O O gw e i g h t ) ，o n c eaw e e k ，c o n t i n u i n gf o u rw e e k s ，t h r o u g ht h ef i v e ri n d e x ，f i b r o s i ss t a g e ，f i b r o s i ss e m i

8、q u a n t i t a t i v es t a f f s - t i c a la n a l y s i s ，f i v e rf u n c t i o na n ds e r u n li n d e xo ff i v e rf i b r o s i st Oa g s e s t 8f i v e rf i b r o s i s R e s u l t sC C L 4i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o ns i x w e e k s ，t h eh e a d e rd i s t r i c to ff i

9、 v e rt i s s u ea n d b l o o dv e s s e la p p e a rc o a r s ef i b e r si n t e r v a l I na n t i - r e v e r s a le x p e r i m e n t a t i o n sf i r s tt w o w e e k sa n df o u rw e e k s ，t h es t a t i s t i c a ld i f f e r e n c eo ft h el e v e lb e t w e e nf i b r o s i sm o d e la n

10、 ds u b c u t a n e o u si n j e c t i o no f0 0 6 m l 1 0 0 9 w e i g h tC C L , g r o u p w a sn o ts i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) 。第4 周时B 组1 3 1 3 分，D l 组1 8 4 分，D 2 组1 4 6 7 分，D 3 组9 分；D 4 组8 1 7 分，D 2 、D 3 组与B 组比较差异无统 计学意义( P 0 0 5 ) 。 2 5 肝功能：抗逆转实验第2 周，抗逆转0 0 6 、O 0 4 、 0 0 2 组的肝功能指标能和造模组保持

11、基本相同，这三 组的抗逆效应明显。实验第4 周，抗逆转O 0 6 ，0 0 4 组能对抗肝纤维化的自发逆转，与造模组保持相当的 纤维化水平，见表2 、表3 。 表2 抗逆转实验第2 周的肝功能比较I 卫越) 注：与造模组比较，0 ) P O 0 5 表3 抗逆转实验第4 周的肝功能比较l ? 螺) 注：与造模组比较，P O 。0 5 万方数据 I 匹lJa l 医学2 0 0 9 年l O 月第3 0 卷( 第l O 期) s “M nM e d i c a lJ o u r n a l ，2 0 0 9 。V d 3 0 ，N o 1 01 5 1 5 2 6 血清肝纤维化指标：抗逆转0 0

12、 8 和0 0 6 组的纤 维化状态在抗逆转实验第2 周和第4 周与造模组基本 一致，见表4 、表5 。 表4 抗逆转实验第2 周纤维化指标的比较( 卫蝴l 注：与造模组比较。( D F 0 0 5 表5 抗逆转实验第4 周纤维化指标的比较( ? 蟠) 注：与造模组比较，P o 0 5 3 讨论 肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础与特 征，表现为以胶原为主的肝细胞外基质各成分增多，降 解不足。确切的致肝纤维化因子不明。可能是多种细 胞因子、脂质过氧化物、K u p f f e r 细胞及活化的巨噬细 胞产生的炎症细胞因子。新的成纤维细胞包围坏死肝 细胞，胶原合成增加导致瘢痕形成，活动性胶原的

13、产 生，正常胶原的降解减少从而导致肝纤维化形成u 曲J 。 C C L 的肝毒性与自由基形成而引起肝细胞膜脂 质过氧化有关【_ 7 | 。C C L 进入肝内后，与微粒体内的 N A D PI I 一细胞色素P 4 5 0 还原系统相互作用，代谢为三 氯甲基自由基( c c G ) ，自由基于扰了D N A 和蛋白 质的合成，阻碍细胞氧化磷酸化，扰乱了三羧酸循环和 脂肪酸氧化，最终导致细胞变性、坏死。若受C C L 反 复刺激，可导致肝纤维化的发生【8J 。 本实验采用C C L 4 腹腔注射，造模第6 周肝脏组 织中纤维组织明显增多，然而肝纤维化的发展是一动 态过程，一方面取决于各种病因和损

14、伤因素的持续存 在，另一方面取决于肝内持续性的活动性炎症坏死。 C C L 诱导的大鼠肝纤维化，一旦停止毒物注射，肝纤 维化即可自发逆转【9 】。其机制包括K C s 激活【l0 1 ， T G F 一8 l 表达水平下降，神经生长因子受体p 7 5 ，与 神经生长因子( N G F ) 结合时引起肝星状细胞( H S C ) 凋亡 1 2 1 等。 在肝纤维化的治疗实验中，大多数设计了4 周的 疗程。鉴于此，本研究采用了皮下注射不同剂量的 C C L 4 来对抗自发逆转。结果发现，皮下注射0 0 6 组 与造模6 周时比较，大鼠在体重、肝重、肝脏指数、肝纤 维化程度、血清肝纤和肝功指标等方面

15、的差异不明显。 这提示实验中腹腔注射C C L 造模成功后，停止腹腔 注射，再每周一次皮下注射5 0 C C L ，0 0 6 m l 1 0 0 9 体 重，以对抗肝脏的自体修复是可行且有效的。这一结 论为今后的药物及移植研究提供了坚实的实验依据。 参考文献： 1 】杨文卓。曾民德范竹萍等氧化苦参碱防治半乳糖胺诱导大鼠 肝纤维化的实验研究 J 中华肝脏病杂志，2 0 0 2 ，1 0 ( 3 ) ：1 9 3 1 9 6 2 】 S a n t r aA ，C h o w d h u r yA ，G h o s hA ，矗以D e v e l o p m e n to fa n a n i

16、m a l m o d e lo fh e p a t i cf i b r o s i sb ye c r e t o r y s e c r e t o r ya n t i g e no fA 8 砌sg n t i m J I n d i a nJG a s t m e n t e m l ，2 0 0 0 ，1 9 ( 3 ) ：1 1 9 1 2 1 3 J e r e m ys ，D u f l i e l dS t r u a r tJ 。F o r b e s da S e l e c t i v ed e p l e t i o no fI 眦- p I a g e 8t

17、t v e a l sd i s t i n c t ，o p p i n gr o l e sd u r i n gk v e ri n j u qa n dr e p a i r J 】C l i nI n v e s t ，2 0 0 5 ，1 1 5 ( 1 ) ：5 6 6 5 4 】曾民德，王泰龄，王宝恩肝纤维化诊断及疗效评估共识 J 】中华 肝脏病杂志。2 0 0 2 ，1 0 ( 5 ) ：3 2 7 3 2 8 5 J e r e m yS D ，F o r b e ss J ，C o n s t a n d i n o nC M ，矗a 1 S e l e c t i v

18、ed e p l e t i o n0 f 咖c r 叩h a g 弛v I e a l 8d i s t i n c t o p p o s i n gr o l e sd u r i n gl i v e ri n j u r ya n dr e - p a i r J 】C l i nI n v e s t ，2 0 0 5 ，1 1 5 ( 1 ) ：5 6 6 】V I a g i w mM ，R u s i n e kH 。L e eV S 矗o A d v a n c e dl i v e rf i b r o s i s ：d i n g - n o s i s 一t I I3

19、 Dw h o l e l i v e rp 耐 u s i o l lM Ri m a g i n g - i n i t i a la 叩e l i a m d 【J 】R a d i o l o g y ，2 0 0 8 2 4 6 ( 3 ) ：9 2 6 - 9 3 4 7 O r rJ C ，L e dV ，C a m e r o nG A ，da M e c h a n i s mo fa c t i o n0 ft h ea n t i f i b r o g e n i cc e m p o u n dg l i o t o x i ni nr a t l i v e rc

20、e l l s J H e p a t o l o g y ，2 0 0 4 ， 4 0 ( 1 ) ：2 3 2 8 S e l lS H e t e r o g e n e i t ya n dp l a s t i c i t yo fh e p a t e c y t el i n e a g ec e l l s J 】 H e p a t o l n g y ，2 0 0 1 ，3 3 ( 3 ) ：7 3 8 7 5 0 9 】W a t a n a b e T 。N i i o k a M ，H o z a w as ，da G e n e q P T 蒯叽d i n t e

21、r s t i t i a lc o l l 且萨f I ei nb o t hp T 唱l 钿wa n d _ e c o v e a yp h ed r a tl i v e ff i b r o s i si n - d e d 埽c a r b o nt e t r a e h l o f i d e J 1 - l e 呻o l o g y ，2 0 0 0 ，3 3 ( 2 ) ：2 2 4 - 2 3 5 1 0 W a n gx ，M e r r i t tA J ，S e y 佑e dJ ，嚣a T a r g e t e dd e l e t i o n0 fm e k 5

22、 倒螂 c e r y l ye m b r y o n i cd e a t ha n dd d e c t si nt h ee x t r a c e l l u l a rs i g n a l - t n g u l a - t e dk i n a s e5 m y o c y t ee n h a n c e rf a c t o r2c e l ls u r v i v a lp a t h w a y J M o l C e l lB i d ，2 0 0 5 ，2 5 ( 1 ) ：3 3 6 3 4 5 1 l 】朱纲，刘海林，黄欣实验性四氧化碳诱致的大鼠肝纤维化自发逆 转研究 J 上海医学，2 0 0 6 ，2 9 ( 1 0 ) ：7 4 1 7 4 3 1 2 】王萍，刘海林大鼠肝纤维化自发逆转过程中肝星状细胞凋亡与 p 7 5 的表达 J 中华肝脏病杂志，2 0 0 6 ，1 4 ( 8 ) ：6 2 8 - 6 2 9 ( 收穑日期：2 0 0 9 - 0 3 - 3 1 ) 万方数据