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1、4 1 4 T i a n j i n M e d J , J u l 2 0 0 5 , V o l 3 3 N o 7 抗核小体抗体在系统性红斑狼疮诊断中的应用 韩锋齐文成李巍 摘要目的: 探讨抗核小体抗体( A n u A ) 在系统性红斑狼疮( S L E ) 诊断中的敏感性和特异性， 及其与疾病活动的相 关关系。方法: 用酶联免疫吸附法( E L I S A ) 检测S L E和其他风湿病患者及健康对照者血清中A n u A 、 抗d s - D N A抗体的 含量， 用系统性红斑狼疮疾病活动指数( S L E D A I ) 对狼疮患者的病情进行评价， 并分析其与A n u A的相
2、关性。结果: A n u A在S L E 患者中的阳 性率为8 4 %， 较d s - D N A抗体的阳性率( 6 6 %) 高( X z 二 4 .9 2 , P 0 .0 5 ) 0 1 .2 实验方法 A n u A 、 抗d s - D N A抗体检测试剂盒购自 欧盟 公司。实验方法为酶联免疫吸附法( E L I S A ) , ( 1 ) 抗核小体抗 体检测: 清晨空腹取血 2 m L ， 以标本缓冲液 1 :2 0 1 稀释血清; 在反应微孔内 按顺序加人标准血清、 阳性对照、 阴性对照和稀 释后的血清标本各 1 0 0 IA， 室温温育3 0 m i n ; 倒掉微孔板内 的液
3、体， 用标本缓冲液洗3 次， 除去残留的清洗液; 滴加 1 0 0 R I . 酶结合物至每一反应微孔， 室温温育3 0 m i n ; 倒掉微孔板 内的液体， 如上述步骤清洗; 滴加1 0 0 w L 底物液至每一微孔， 室温闭光温育1 5 m i n ; 滴加 1 0 0 IA终止液至每一反应微孔; 在酶标仪上以4 5 0 n m比色， 参考波长6 2 0 m n . ( 2 ) 抗d s - D N A 抗体检测: 步骤同上。 1 .3 统计学方法数据经过S P S S 1 0 .0 软件进行统计， 计数 资料采用X 2 检验， 计量资料采用两样本t 检验， 多组间比较 用方差分析9 检
4、验， 非正态性资料相关性采用秩相关分析。 2 结果 2 . 1 A n u A在 S L E 作者单位: 3 0 0 1 9 2 中的阳性率在5 0 例S L E患者 天津市第一中心医院风湿免疫科 天津医药 2 0 0 5 年 7 月第 3 3 卷第7 期 4 1 5 有4 2 例A n u A阳性， 3 3 例d s - D N A抗体阳性， 阳性 率分别为 8 4 %和 6 6 %, A n u A和抗 d s - D N A抗体 在S L E中的阳性率差别有统计学意义( 扩二 4 . 9 2 , P 0 .0 5 ) ， 见表1 。在3 0 例其他风湿性疾病组中5 例A a u A阳性
5、( 2 例类风湿性关节炎， 2 例混合性结 缔组织病， 1 例干燥综合征) , 3 例d s - D N A阳性， 与 S L E 患者比 较差别有统计学意义 ( 扩分别为2 6 .3 7 和2 3 .7 6 , P 0 .0 5 ) 。在3 0 例正常对照者中， 2 种抗 体均为阴性，与S L E患者比较差别有统计学意义 ( 均P= 0 . 0 0 0 ) 。 表1 A n u A和d s - D N A抗体在S L E患者中的阳性率 A n u A ( + ) A n u A 卜)合计 d s - D N A ( + ) d s - D N A ( 一 ) 合计 3 1 I I 3 3 1
6、 7 2 . 2 A n u A与 S L E疾病活动性的相关性分析S L E 患者A n u A定量( 7 8 士 3 4 ) R U / m L , S L E D A I 为9 土 4 , 两者呈线性正相关( r , = 0 . 6 5 9 , P 0 . 0 5 ) 。 2 . 3 A n u A与 S L E肾炎的关系A n u A阳性组 4 2 例，肾炎发生率为7 8 .5 7 % ( 3 3 / 4 2 ) , A n u A阴性组 8 例，肾炎发生率为3 7 .5 0 %( 3 / 8 ) . A n u A阳性组中 肾炎的发生率比A n u A阴性组高 ( 扩= 2 .0 8
7、 尹 0 .0 5 ) a S L E肾炎患者 A n u A为( 8 4 1 5 7 ) R U / m L ， 非 肾 炎患者为( 4 3 土 2 8 ) R U / m L ， 前者高于后者( t 二 2 . 1 7 , P 0 .0 5 ) 。 阴性的患者更具有诊断意义。A n u A和抗d s - D N A 抗体同属于抗染色体抗体， 可在疾病的不同时期出 现， 因此可能在疾病的不同阶段被检出网 。 本研究结 果显示A n u A测定值与S L E D A I 具有相关性，提示 A n u A与S L E的多系统损伤有关，可以用于检测病 情的活动性和判断治疗的效果。S L E肾炎患者
8、 A n u A测定值高于非肾炎患者，表明A n u A参与了 S L E肾炎的发生和发展。有报道认为A n u A与狼疮 肾炎的相关性比抗 d s - D N A抗体还要强， 在S L E肾 炎患者的肾小球基底膜有核小体、 A n u A及其抗原 抗体复合物的沉积。 核小体可以通过组蛋白的阳离 子部分与肾小球基底膜中强阴离子部分硫酸乙酞 肝素葡糖胺聚糖结合介导免疫应答M 0 虽然A n u A在S L E 患者中的阳性率较高， 但其 与S m抗体不同， 并非是S L E的特异性抗体， 不能 以一种抗体的阳性与否来判定S L E的诊断。 有学者 报道A n u A的出现在S L E的早期且早于
9、抗d s - D N A 抗体并持续存在，由于本组中新发 S L E的患者不 多， 笔者没有能够进行这方面的统计。在其他风湿 性疾病组中只有 5 例 A n u A阳性的患者，因此， A n u A在其他风湿性疾病中的意义还有待进一步的 研究。 本研究表明A n u A对S L E的诊断有较高的临 床价值， 并和S L E病情活动相关。 3 讨论 核小体是真核生物细胞染色体的基本单位。 染 色质原纤维由紧密排列的核小体组成。 核小体的核 心含8 个带正电荷的组蛋白 ( h i s t o n e )分子( H Z A , H 2 B , H 3 , H 4 ) , D N A缠绕其上约1 .7
10、 5 圈， 长约1 4 0 b p , 带负电 荷。 2 个核小体之间由5 06 0 b y 的D N A 链 相连。在生物活体中， 核小体的惟一来源是凋亡的 细胞。当细胞发生凋亡时， D N A在内源性核酸内切 酶作用下裂解， 细胞膜破裂并导致核小体释放4 1 。当 致病因素作用机体使细胞凋亡增加或对凋亡细胞 清除减少导致核小体增加， 刺激机体特异性T 细胞 和B 细胞产生免疫应答并介导A n u A产生。 最近的报道显示 A n u A和抗 d s - D N A抗体在 S L E中的阳性率分别为9 3 %和7 1 % 1 1 。本研究结果 显示， A n u A在S L E中的阳性率高于
11、作为S L E 诊断 标准之一的抗 d s - D N A抗体，提示 A n u A对提高 S L E的诊断率有一定意义， 特别是对抗d s - D N A抗体 参考文献 1 T a x W J M , K r a m e r s C , v a n B r u g g e n M C J , e t a l . A p o p t o s i s , n u c l e o - s o m e s , a n d n e p h r i t i s i n s y s t e m i c l u p u s e ry t h e m a t o s u s : e d i t o r i a
12、 l r e - v i e w . K i d n e y I n t , 1 9 9 5 , 4 8 :6 6 6 - 6 7 3 2 L a d e r a c h D , K o u t o u z o v S , B a c h J F , e t a l . C o n c o m i t a n t e a r l y a p p e a r - a n c e o f a n t i - r i b o n u c l e o p r o t e i n a n d a n t i - n u c l e o s o m e a n t i b o d i e s i n l
13、u p u s p r o n e m i c e . J A u t o i m m u n , 2 0 0 3 , 2 0 ( 2 ) : 1 6 1 一 1 7 0 3 B u r l i n g a m e R W , C e r v e r a R . A n t i - c h r o m a t i n ( a n t i - n u c l e o s o m e ) a u - t o a n t i b o d i e s . A u t o i m m u n R e v , 2 0 0 2 , 1 ( 6 ) : 3 2 1 - 3 2 8 4 W y l l i e
14、A H . G l u c o c o rt i c o i d - i n d u c e d t h y m o c y t e a p o p t o s i s i s a s s o c i a t - e d w i t h e n d o g e n o u s e n d o n u l c e a s e a c t i v a t i o n . N a t u r e , 1 9 8 0 , 2 8 4 : 5 5 5 - 5 5 6 5 S i m o n J A , C a b i e d e s J , O rt i z E , e t a l . A n t i
15、- n u c l e o s o m e a n t i b o d i e s i n p a t i e n t s w i t h s y s t e m i c l u p u s e ry t h e m a t o s u s o f r e c e n t o n s e t . P o t e n t i a l u t i l i t y a s a d i a g n o s t i c t o o l a n d d i s e a s e a c t i v i t y m a r k e r . R h e u m a t o l o g y ( O x f o r
16、 d ) , 2 0 0 4 , 4 3 ( 2 ) : 2 2 0 - 2 2 4 6 C h a b r e H , A m o u r a Z , P i e t t e J C , e t a l . P r e s e n t o f n u c l e o s o m e - r e - s t r i c t e d a n t i b o d i e s i n p a t i e n t s w i t h s y s t e m i c l u p u s e ry t h e m a t o s u s . A rt h r i t i s R h e u m , 1 9
17、 9 5 ,3 8 : 1 4 8 5 - 1 4 9 1 7 S i n i c o R A , B o l l i n i B , S a b a d i n i E , e t a l . T h e u s e o f l a b o r a t o ry t e s t s i n d i a g n o s i s a n d m o n i t o r i n g o f s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s . J N e p h r o l , 2 0 0 2， 1 5 ( S u p p 1 6 ) : 2 0 - 2 7 ( 2 0 0 4 - 0 7 - 2 8 收稿2 0 0 5 - 0 3 - 1 4 修回)