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1、3 讨论 临床上检测A B O血型的方法很多, 但是无论何种方法, 在A B O血型测定中, 经常出现正反定型不一致的疑难血型。 柱凝集法的血型反应卡与交叉配血反应卡往往只是实现各 自单一的目的, 缺乏进一步方法学的联合与扩展运用。单一 的血型 测 定 柱 凝 集 法 是 利 用 红 细 胞 抗 原 和 相 应 的 抗 体 ( I g M) 结合, 经离心, 凝集的红细胞悬浮在凝胶表面或凝胶中 层呈阳性反应, 而未与抗体结合的红细胞则通过凝胶沉于凝 胶底部呈阴性反应。有人提出柱凝集法虽然在检测I g G抗 体方面比较好, 但对A B O血型检测与盐水试管法检测相比 无显著性差异 1, 甚至还有
2、报道C A T法检测 A B O血型不如 手工试管法准确 2。经过临床实践, 笔者发现, 血库利用 C A T法检测A B O血型时, 依然存在正反定型不一致的疑难 血型问题, 而且大部分疑难血型是由于患者抗原减弱或者抗 体减低( 下降) 所致, 占临床疑难血型比例3 5%以上 3。本试 验中看出, 临床上患者血型抗原减弱或者抗体减低的疑难血 型主要是以抗体减低为主, 约占6 5%(1 1/1 7) 。而抗原减弱 较易出现于A B型血型, 是否与血型抗原分化成熟过程中一 种抗原影响另一种抗原的形成有关, 还是与疾病的发展、 转 归有明确的伴随关系, 有待今后进一步的研究。 盐水法接合柱凝集法就
3、是把交叉配血反应卡进一步拓 展运用, 成为本试验的接合反应卡。其原理是把盐水法反应 阳性( 肉眼不能看见或很微弱) 的反应液( 抗原抗体结合物, 不论I g G型还是I g M型) 接合( 转移) 到L i s s/C o o m b s(A n t i - I g G+C3 d) 卡上进行直接抗球蛋白试验, 这样把抗原抗体特 异性反应、 抗球蛋白试验的超敏感性结合起来, 再经过反应 卡分子筛的物理作用, 极大的提升此试验的灵敏度, 而盐水 法反应阴性的反应液接合( 转移) 到L i s s/C o o m b s(A n t i - I g G +C 3d) 卡上进行直接抗球蛋白试验则呈现阴
4、性反应。由此 可以看出, 单一的柱凝集法测定A B O血型虽然也算灵敏, 同 聚凝胺法相一致, 但是对于那些抗原减弱或者抗体减低的患 者, 还是很难确定其真正的A B O血型。盐水试管法、 聚凝胺 法、 柱凝集法和盐水法接合柱凝集法对抗- A、 抗- B标准血清 进行连续倍比稀释, 测定反应结果, 盐水法接合柱凝集法测 定标准抗血清的灵敏度要比单一的血型柱凝集法和聚凝胺 法高出3个滴度, 进一步证明盐水法接合柱凝集法的高效、 灵敏, 特别对于那些抗原减弱或者抗体减低( 下降) 的A B O 疑难血型患者尤其适用。 参 考 文 献 1 马曙轩, 刘景汗, 李锡金, 等. 应用微柱凝胶法鉴定A B
5、 O及RH (D) 血型J.中国生物制品学杂志,2 0 0 2,1 5(1) :5 3 2 R o b a c kJ D,B a r c l a yS,H i l l y e rC D. A na u t o m a t a b l ef o r m a t f o ra c - c u r a t e i mm u n o h e m a t o l o g y . t e s t i n gb yf l o wc y t o m e t r yJ ,T r a n s - f u s i o n,2 0 0 3,4 3(7) :9 1 8 3 王显荣, 许 立, 李 育, 等. 柱凝集法A
6、 B O血型正反定型不一致 原因分析J.浙江临床医学,2 0 0 4,6(1 1) :1 0 1 6 (2 0 0 5 - 0 2 - 2 3收稿,1 1 - 0 3修回) 本文编辑: 刘晓明 数字全自动血型仪在无偿献血者血型检测中的应用 谢敬文 严康峰 马伟文 莫锦政 ( 广州市番禺区血站, 广东广州5 1 1 4 0 0) 摘要: 目的 了解全自动血型仪检测用于A B O血型和R h(D) 血型的效果。方法 采用爱康全自动血型仪对血 液血型自然沉降反应检测, 有抗原抗体反应的孔的细胞由于共价键的作用使其紧密排列均匀分布在有梯度的V型 的孔底上, 没有抗原抗体反应的孔的细胞集中沉降在孔底中央
7、, 形成一个圆点。结果 数字全自动血型仪法和试管 法同时做5 0 0份样本作对比试验, 两种检测方法的结果符合率为1 0 0%, 无明显差别; 对本站6 5 7 3名无偿献血者进 行检测, 共检测出R h(D) 阴性1 3例, 阴性率为0 . 2%; 正反定型不合3 1例, 频率为0 . 4 7%。结论 全自动血型仪减 低了人为的因素所造成的影响, 通过仪器判读结果标准、 直观, 核对结果方便, 有较大的使用价值。 关键词:A B O血型 R h(D) 血型 血型检测 中图分类号:R 4 5 7 . 1 +1 R 4 4 0 文献标识码: A 文章编号:1 0 0 4 - 5 4 9 X( 2
8、 0 0 6)0 1 - 0 0 3 6 - 0 2 本站2 0 0 5年3月份开始使用全自动血型仪对无偿献血 者进行常规检测A B O和R h(D) 血型, 现报道如下。 1 材料与方法 1. 1 样本来源 本站6 5 7 3名无偿献血者的E D TA - K 2抗 凝样本。以及检测后的样本中选取A型1 0 0份、B型1 0 0 份、O型2 0 0份、A B型1 0 0份, 用作对比实验。 1. 2 试剂与仪器 抗- A和抗- B血清( 长春博德公司) , 使用 前用生理盐水配成1:7的工作液; 抗- D血清( 英国B I O - S C O T公司) , 使用前用生理盐水配成1:7的工作液
9、;2%的 A细胞和B细胞悬液, 使用前用新鲜红细胞参照文献1 配 制) ;R S P全自动加样器( 瑞士帝肯公司) ; 数字全自动血型仪 ( 深圳爱康公司) ; 振荡器( 德国H e i b o l p h公司) ; 目标板:1 0 1 2梯度V型底微板( 奥林巴斯) ; 预稀释板:1. 5 m l/孔可拆 卸9 6孔板( 浙江海门联合) 。 1. 3 试管法 方法参照文献 2 。 63 中国输血杂志2 0 0 6年2月第1 9卷第1期 C h i nJB l o o dT r a n s f u s i o n,F e b u r a r y,2 0 0 6,V o l . 1 9,N o
10、. 1 1. 4 数字全自动血型仪法( 仪器法) 在R S P上编写加样 程序: 样本血清9 l +2%的A细胞或B细胞3 8l分别加到 目标板的12排上; 样本浓缩R B C 2 0 l +8 0 0l生理盐水在 预稀释板上稀释, 然后在目标板35排分别加2 5 l稀释细 胞及抗- A、 抗- B、 抗- D血清工作液2 5 l。加完样后在振荡器 上高速混匀1 0 s, 室温放置6 0 m i n, 血型仪读板自动判读结 果:细胞均匀分布在V型孔底的为阳性, 细胞沉降集中在 孔底中央形成一点的为阴性, 其他情况打问号。A B O正 反定型一致和R h(D) 血型正常( 阳性或阴性) 在“ 血
11、型结果 栏” 给出A B O血型和R h血型, 正反定型不一致或任意一孔 为问号则打问号, 样本由血型室作进一步鉴定。 2 结果 2. 1 仪器法和试管法对比试验 结果见表1。 表1 仪器法和试管法检测结果对比(n=5 0 0) A型B型O型A B型R h(D) 符合率 试管法 1 0 01 0 02 0 01 0 05 0 01 0 0% 仪器法 1 0 01 0 02 0 01 0 05 0 01 0 0% 2. 2 仪器法对本站6 5 7 3名无偿献血者进行常规检测 A B O 和R h(D) 血 型, 共 检 测 出R h(D) 阴 性1 3例, 阴 性 率 为 0 . 2%; 正反定
12、型不合3 1例, 频率为0 . 4 7%。血型室用I g G 型抗- D血清学作进一步排除弱D抗原试验, 结果1 3份样本 均证实为R h(D) 阴性。3 1份A B O正反定型不一致样本血 型室鉴定为: 2 7份( 抗- M1 7例、 抗- N2例、 抗P 17例、 抗- E 1例) 为I g M型不规则抗体引起反定型与正定型不符导致血 型鉴定困难, 2例B3亚型和1例A B3亚型,1例是抗- A减弱 引起反定型与正定型不符导致的A B O血型鉴定困难。 3 讨论 仪器法是通过自然沉降对A B O和R h(D) 血型检测, 有 抗原抗体反应的细胞由于共价键、 范德华力等作用其紧密排 列均匀分
13、布在有梯度的V型的孔底上, 没有抗原抗体反应 的细胞集中沉降在孔底中央形成一个圆点, 仪器根据孔底的 透光率不同判断结果。 笔者在常规检测血型之前使用仪器法与试管法同时做 了5 0 0份已知A B O和R h(D) 血型样本的对比试验, 两种方 法的结果完全一致, 未出现检测出错型现象。笔者检测的 6 5 7 3份样本中仪器法检出3 1例A B O正反定型不符, 有2 7 例为不规则抗体( 均为I g M型抗体) 引起的, 不规则抗体阳 性率为0. 4%, 与报道基本一致 3。仪器法参加反应的抗原 抗体的量较小, 自然沉降反应排除了由于离心和振荡等外力 所至的假阳性和假阴性, 对A B O亚型
14、有较好的检测效果, 本 次检测出2例B 3亚型和1例A B 3亚型。本次检测中有1 例是抗体减弱引起的A B O血型鉴定困难, 仪器法反定型A 细胞判读为, 试管法反定型A细胞反应强度+以下, 通过吸 收放散试验和唾液血型物质测定确定为B型。R h(D) 阴性 检测结果与鉴定结果相符, 阴性率为0. 2%, 与报道基本一 致 4。仪器法检测的结果与血型室鉴定结果相一致。 全自动血型仪可以通过扫描仪扫描记录每孔的反应图 像, 便于更好地分析结果。整个过程由仪器完成, 通过软件 进行判读结果, 判读结果有统一的标准, 减低了人为因素造 成的影响, 电脑打印的原始记录对安全供血和举证有积极的 意义。
15、笔者通过使用体会到: 该仪器对试剂的配制要求较 高, 标准细胞洗涤一定要充分, 试剂配制的浓度要准确; 奥林 巴斯梯度板清洗要干净, 不能有残余的蛋白, 否则很容易出 现假阳性结果, 通常在0. 5%次氯酸钠溶液倒扣浸泡4 h, 可 把残余蛋白清除干净。 参 考 文 献 1 李 勇, 朱建春.血型血清学实验基本技术. 见: 李 勇, 杨贵贞 主编.人类细胞血型学实用理论与实践技术M. 1 9 9 9,2 1 4 2 1 8 2 童 军, 杨 明.红细胞血型检定. 见: 李 勇, 杨贵贞主编.人 类细胞血型学实用理论与实践技术M . 1 9 9 9,2 7 92 8 6 3 严康峰, 谢敬文,
16、莫锦政, 等.无偿献血者同种不规则抗体发生率 研究J.临床输血与检验,2 0 0 3,5(3) :1 9 5 4 严康峰, 马伟文, 莫锦政, 等. 番禺区无偿献血人群中R h血型系 统分布情况及应用研究J.江西医学检验,2 0 0 2,2 0(4) :2 3 9 (2 0 0 5 - 0 7 - 1 1收稿,2 0 0 6 - 0 1 - 0 5修回) 本文编辑: 尚 云 欢欢迎迎订订阅阅， 欢欢迎迎赐赐稿稿！ 邮发代号: 6 2 - 1 8 6 2 0 0 6年全年订价:5 4 . 0 0元 73 中国输血杂志2 0 0 6年2月第1 9卷第1期 C h i nJB l o o dT r a n s f u s i o n,F e b u r a r y,2 0 0 6,V o l . 1 9,N o . 1