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1、中国临床康复第!“卷 第#$期2006-07-10 !“ Chine6 ! 基础研究 ! 抑癌基因 p53 与 p16 及 *+,- 蛋白在皮肤增生期血管瘤中的 表达及其对血管内皮细胞的干预 .! 夏扬 1!高 颖 2!徐 光 1!刘 静 1 北京世纪坛医院,1整形外科,2病理科,北京市10003/ 夏扬!,男,1060年生,云南省昆明市人,汉族,2003年北京大学医学 部毕业,硕士,副主任医师,主要从事创面愈合方面的研究。 铁道部立项课题(120023003号). 中图分类号:43205212文献标识码:-文章编号:1671-502662006725-0000-03 收稿日期:2005-12
2、-20修回日期:2006-02-2/605-00-12-0560839“97 Expression of p53,p16 and PCNA protein in skin proliferate ?eaA=ioBa aAd t?e iAterCeAtioA oA CasDElar en?; AB *CEF 9G=H;=IJ2:;p?; AB *;=J-DDAFE AB *CEF 9G=H;=IJ L;EMEH 9KEME=I AB 4EHK; ;Sp=;DDEA AB p53Jp16 ;E BA= pACI?;=EH DD ;BB;F A RK;CEK E?GAKEDAFK;?EFKAT5 K
3、LMNOPFIPAEH D E K; :;p?; AB *A -p=EC 2005JD;=REH EH D =;D QEA7J K;= 30 D=AC H=AGp75 YBA=?;T FAD; QK; pE;D5“ :-Z WREDEAD QAVD;p ?;KAT QK; DEAD AB K; QA H=AGpD A p;=BA=? E?GAKEDAFK;?ED=I59;FEAD QEA AB N22BA= ;CE?E=EF EA 6pN 6507 ;DJ ;?p;=;DJ QK TAGV XC; TEDECC;T QEA ;D -B;=QK 051 RACG?; B=EA AB HA;T X
4、I pKADpKEA7 EAD Q;=; DA;D EXATI Q 37 J QK pKADpKEA 6pN7527J EFGX;DJT;R;CAp;T QEK TEK KASICE BACCAQ;T XI T;KIT=EA =;pC EXATI E K; E?V ?GAKEDAFK;?EFER; FA=ACJ AK;= p=AF;TG=;D Q;=; U;p BA= K; _GI AB =AC TI;EH5# PK; pADEER; DEH AB p16 ER; F;CCD Q;=; DK; FIV ACI?pK K;CEAFI;5 PK; F;CC GFC;GD AB ;H=AC H=AG
5、p QK;=; Q;=; A K X=AQ H=K; GFC;GD AB RK;CE;E pADEER;5 Y?;FEA QEAD p53 K; ;Sp=;DDEA AB *+,- p=A;E QEK KEHKVT;BEEEA FACA=;T pER; ;Sp=;DDEA ET;S Q;=; ?;=AC H=AGp ;=;T K; D ;FEA AB p53 pADEER; ;Sp=;DDEA K; ;Sp=;DDEA AB p53 Q=AH E ;Sp;=E?;K; GFC;GD AB RK;CEK; ;Sp=;DDEA AB p53 Q=AC H=AGp5PK; ?;ER; ;Sp=;DD
6、EA Q=AH;= E ;Sp;=E?;K=AC H=AGp(65223a15215,15036a05131,? b 0505)5 $ :;V ;FEA AB p16 pADEER; ;Sp=;DDEA ApCK; EDDG; D;FEAD5PK; pADEV ER; ;Sp=;DDEA AB p16 QK; DQ; ;Sp;=E?;=AC H=AGpJ K; ?;ER;CI 5% +A?p;E pADEER; ;Sp=;DDEA ET;S X;V Q; QA H=AGpD cT;= K; ApEFEI X=AQ H=EXG;T E K; GFC;GD Q;=; D;5 PK;D; ;TAK;
7、CEI QEK FCG?pEH DK;E pADEER; ;Sp=;DDEA QK=AC H=AGp(67520a/570,3/521a05/0,? b 0501)5 CONCSRFJONIp53 p=;D;D KEHK ;Sp=;DDEA E K; DUE p=ACEB;=; K; p=ACEB;=K; ;Sp=;DDEA AB p16 ED A FCAD;CI =;CA K; p=ACEB;=;E FK; =;CEEH D? 45-A6及=?蛋白在皮肤增生期血管瘤 中的表达及其对血管内皮细胞的干预Q0R1中国临床康复!#“;!“J#$PLMMN!“! QSSS1T*CHB81H-FR 摘要
8、 目的:应用免疫组化法检测抑癌基因p16,p53及:,-聚合酶!的辅助 蛋白*+,-在增生期血管瘤中的表达,及其对血管内皮细胞的影响。 方法: 实验选取2001-01 82005-02北京世纪坛医院病理科收集的手 术切除皮肤增生期血管瘤组织标本36例作为增生期血管瘤组(患者 术前均未经任何辅助性治疗), 以痔静脉标本30例作为痔静脉对照 组。患者均知情同意。室温冷却10 ?E,双蒸水洗涤,pN 752磷酸盐缓冲液浸泡 5 ?E;体积分数为051的山羊血清(磷酸盐缓冲液稀释)封闭,去血 清,加入抗,37 浸泡30 ?E;pN 752磷酸盐缓冲液冲洗;WREDEA 孵育,37 下放置30 ?E;二
9、氨基联苯胺显色,苏木精复染后,脱水、 透明、封固。 免疫组化阴性对照以磷酸盐缓冲液代替抗,其他步骤 维持不变,以确认试剂质量及控制染色效果。$p16,p53阳性信号为 棕黄色,以内皮细胞浆和8或核染成棕黄色为阳性细胞。 阴性对照除 细胞核染成蓝色外,无棕黄色反应物。 血管内皮细胞核内见棕黄色颗 粒者为*+,-蛋白染色阳性。 采用+OY-9高清晰彩色病理图像分析 系统分别对两组切片p53,p16及*+,-蛋白的表达进行图像检测, 测定每个视野下p16和p53阳性细胞的平均吸光度以及*+,-蛋白 阳性表达指数。 结果:实验选取手术切除皮肤增生期血管瘤组织标本36例,痔静脉标 本30例,全部进入结果
10、分析。 痔静脉对照组血管内皮细胞核内无棕黄色颗粒沉积,p53表达极 弱。 增生期血管瘤组p53阳性表达的平均吸光度明显强于痔静脉对照 组(65223a15215,15036a05131,? b 0505)。$两组p16阳性表达检测及 平均吸光度的比较:两组切片组织中除细胞核着色外,部分细胞浆有着 色。p16的阳性表达在增生期血管瘤组和痔静脉对照组中基本相同,平 均吸光度分别为15221a05373和15206a05267。%两组*+,-蛋白阳性 表达指数的比较:*+,-蛋白阳性表达的细胞光镜下可见核内弥漫分 布细小的棕黄色颗粒,这些内皮细胞围成血管腔及团块状,核椭圆,体 积较大。 增生期血管瘤
11、组*+,-蛋白阳性表达指数明显高于痔静脉对 照组(67520a/570,3/521a05/0,? b 0501)。 结论:抑癌基因p53在增生期血管瘤组织中呈高表达,能够促进血管内 皮细胞的增殖,但p16的表达与血管内皮细胞增殖的关系不明显。 此外 ! 抑癌基因!“#与!$%及基因,3%&;增殖细胞核抗原;血管瘤;免疫组织化学 0引言 血管瘤发生率为45675,以血管内皮细胞增殖和 生长特性为特征,一般经历增生期、退化期和退化完 成期三个阶段。 血管瘤好发于头面部,但也可以发生 于人体的任何部位。 增生期血管瘤发生率在婴幼儿时 期较高, 表现为出生时或出生后不久呈鲜红色斑,并 迅速增大, 经和
12、突变型8%晚 期开始增加,#期达到高峰,+期开始下降,因此它可 作为细胞增殖的指标。 1材料和方法 设计:非随机对照实验。 单位:北京世纪坛医院整形外科与病理科。 材料:实验选取+%(.%/+)(.-北京世纪坛医 院病理科收集的手术切除皮肤增生期血管瘤组织标 本4再选取痔静 脉标本4.例作为痔静脉对照组。 患者均知情同意。 主 要试剂:3)4,3%以体积分数为.4的过氧 化氢消除内源性过氧化物酶,孵育%. ) 阳性表达平均吸光度 增生期血管瘤组 痔静脉对照组 &.-+4S%.-%)U %4&S%4% %.+-%S44 %.+.&S+& 与痔静脉对照组比较,U? T .) 组别 3)43%& !
13、“ 2.2两组p16阳性表达检测及平均吸光度的比较 两组切片组织中除细胞核着色外, 部分细胞浆有着 色。p16的阳性表达在增生期血管瘤组和痔静脉对照 组中基本相同, 平均吸光度分别为1.2410.373和 1.2060.267。 见表1。 2.3两组PCNA蛋白阳性表达检测及平均吸光度的 比较PCNA阳性表达的细胞在光镜下可见核内弥漫 分布细小的棕黄色颗粒,这些内皮细胞围成血管腔及 团块状,核椭圆,体积较大。 与核染深蓝色、单层扁平 的PCNA蛋白阴性内皮细胞区别明显。 增生期血管瘤 组阳性表达指数为67.408.79, 痔静脉对照组阳性表 达指数为38.419.89, 两组比较差异有显著性意义(P ?/l)AB?)*C!“#$%&2006 7 ( 10 )* 10 +* 25 , !“!