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1、9 6 8陕西医学杂志 2 0 0 5 年 8 月第 3 4 卷第 8 期 一J一 一一一-一-一-一-一 - -一-一-. - - . . ， 刁 司 目 . 份一一一一 抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对持续缺血和缺血再灌注损 伤心肌细胞凋亡的影响 山东胜利油田胜利医院( 东营2 5 7 0 5 5 ) 李克林张万义 摘要目的: 探讨杭肿瘤坏死因子单克隆杭体对持续缺血和缺血再灌注损伤心肌 细胞凋亡的影响。方法: 采用大白鼠随机分为7 组。用冠脉结扎法， 建立急性心肌梗死动 物模型。以活结结扎左冠状动脉的前降支， 分别造成胆断冠脉血流和再灌注。以T UN E L 标记凋亡细胞。结果: 凋亡细胞原位标
2、记与半定量分析表明: 杭肿瘤坏死因子单克隆杭体 处理组与持续缺血组、 缺血再灌注组比较心肌细胞凋亡程度明显降低。结论: 缺血再灌注 损伤和持续缺血可导致心肌细胞凋亡， 杭肿瘤坏死因子单克隆杭体预处理能明显减轻心 肌细胞凋亡程度。 主题词心肌缺血/ 病理生理学再灌注狈伤/ 病理生理学抗体， 单克隆细胞调 亡动物， 实验大鼠， w i s t e r T h e e f f e c t o f a n t i - T N F - mA b o n t h e a p o p t o s i s o f my o c a r d i a l c e l l s d u r i n g t h e c
3、 o n t i n u o u s i s c h e mi a a n d i s c h e mi a r e p e r f u s i o n i n j u r y S h e n g l i H o s p i t a l ( D o n g y i n g 2 5 7 0 5 5 ) L i K e l i n Z h a n g Wa n y i A B S T R A C T O b j e c t i v e ; T o s t u d y t h e e f f e c t o f a n t i - T N F - m A b o n t h e a p o p t
4、o s i s o f m y o c a r d i a l c e l l s d u r i n g t h e c o n t i n u o u s i s c h e m i a a n d t h e i s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y . Me t h o d s : Wi s t a r r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o 7 g r o u p s . A c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t
5、i o n a n i m a l m o d e l s w e r e f o r m e d b y l i g a t i n g t h e c o r o n a r y a r t e r y . L T h e a n t e r i o r d e s c e n d i n g b r a n c h e s o f t h e l e f t c o r o n a r y a r t e r y w a s l i g a t e d w i t h s l i p k n o t t o b l o c k t h e b l o o d fl o w a n d r
6、 e p e r f u s e t h e m y o c a r d i u m. T h e a p o p t o t i c c e l l w a s l a b e l e d b y T U N E L . R e s u l t s : I n s i t u a p o p t o t i c c e l l l a b e l i n g a n d s e m i q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s r e v e a l : T h e d e g r e e o f t h e a p o p t o s i s o f
7、m y o c a r d i a l c e l l s d e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y i n t h e a n t i - T N F - m A b - a d m i n i s t r a t e d g r o u p c o m p a r e d w i t h c o n t i n u o u s i s c h e m i a g r o u p a n d i s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y g r o u p . C o n c l u s i
8、o n ; C o n t i n u o u s i s c h e m i a a n d i s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y c a n r e s u l t i n t h e a p o p t o s i s o f m y o c a r d i a l c e l l s ， t h e p r e c o n d i t i o n i n g w i t h a n t i - T N F - m A b c a n l e s s e n t h e d e g r e e o f t h e a p o
9、p t o s i s o f m y o c a r d i a l c e l l s s i g n i g i c a n t l y . K E Y WO R D S My o c a r d i a l is c h e m i a 净h y s i o p a t h o l o g y R e p e r f u s i o n i n j u r y / p h y s io p a t h o l o g y A n t i b o d i o s , m o n o c l o n a l A p o p t o s i s A n i m a l s , l a b o
10、 r a t o r y R a t s , w i s t e r 肿瘤坏死因子一 a ( T u m o r n e c r o s i s f a c t o r - a ，材料与方法 T N F - a ) 是一种具有多种生物学效应的细胞因子，1 动物分组雄性 Wi s t a r 大鼠8 4只， 体重 参与介导人体多种疾病的发生、 发展。 在心血管领2 6 0 士2 3 g ( 由山东中医药大学动物实验中心提 域， T N F - a 在众多心血管疾病如急性心肌梗死、供) 。 随机分为7 组， 每组1 2 只。 假手术组( A组) : 病毒性心肌炎、 心脏移植排斥反应、 慢性心衰等的
11、开胸， 前降支穿线不结扎 5 h ; 持续缺血组( B组) : 发生和发展中具有广泛的病理生理作用， 其在缺开胸 3 0 m i n后， 结扎前降支 4 . 5 h ; 缺血再灌组( C 血导致的心肌细胞凋亡发生、 发展中起到重要的组) : 开胸 3 0 m i n后， 结扎前降支 3 0 m i n ， 复灌 4 h ; 作用。 本组研究中我们分别在缺血前、 再灌前实验结扎前 1 5 m i n给a n t i - T N F - m A b 组( D组) : 方法 性心肌缺血动物， 应用抗肿瘤坏死因子单克隆抗同C组， 结扎前降支前1 5 m i n , 颈总静脉注射a n t i - 体(
12、 a n t i - T N F - m A b ) 来观察其抗心肌细胞凋亡的T N F - m A b , 0 . l m g / k g ; 复灌前 1 5 m i n给 a n t i - 作用。T N F - m A b组( E组) : 方法同C组， 复灌前1 5 m i n , 陕西医学杂志 2 0 0 5 年 8 月第 3 4 卷第 8 期 9 6 9 颈总静脉注射a n t i - T N F - m A b , 0 . l m g / k g 体重; 结扎前 1 5 m i n给 2 倍 a n t i - T N F - m A b组( F组) : 方法同C组， 结扎前降支前
13、 1 5 m i n , 颈总静脉注射 a n t i - T N F - m A b , 0 . 2 m g / k g体重; 复灌前 1 5 m i n 给2 倍a n t i - T N F - m A b 组( G组) : 方法同C组， 复 灌前 1 5 m i n , 颈总静脉注射 a n t i - T N F - mAb , 0 . 2 m g / k g 体重。 2 方法各组大鼠分别正常饲养 4 d后， 开始实验。以2 %戊巴比妥钠按5 0 m g / k g 腹腔注 射麻醉， 以针形电极擂于四肢皮下观察记录标准 肢体 II 导联心电图。气管插管， 呼吸机辅助呼吸。 开胸暴露心
14、脏， 以活结结扎左冠状动脉的前降支， 分别造成阻断冠状动脉血流和再灌注。以左心室 前壁发组或呈蓝紫色及同步心电图示 S T段抬 高, Q R S幅度升高为结扎成功标志。复灌时左心 室前壁缺血区发给消失。 心矶组织行常规石蜡包埋， 每一标本取 2 个 不同部位的切片各 1 张， 采用末端脱氧核昔酸转 移酶( T d T酶 ) 介导带荧光的d U T P原位末端标 记 ( T UN E L ) 法标记凋亡细胞核中D N A 3 - O H 末端( 试剂购自美国R o c h e 公司) 。石蜡包埋的切 片预处理， 常规脱蜡、 脱水; 用即用型胃蛋白酶( 北 京中山生物技术公司) 3 7 0C 孵育
15、 6 0 m i n , P B S洗 2 次; 加人 5 0 沁 T U N E L混合液， 湿盒 3 7 0C 孵育 6 0 m i n , P B S液漂洗 3 次， 激光共聚焦扫描显微镜 观察。 使用德国Z e i s s 公司A x i o V i s i o n ( V e r s i o n 3 . 0 6 ) 图像处理系统进行灰度测量， 选取平均吸光度 ( O p t i c a l d e n s i t y , O D ) 为定量参数， 测定凋亡细胞 的荧光表达。 3 统计学方法所有数据采用N o S A , , , 版 统计分析软件， 计量资料以Y 士: 表示， P O . 0 5 ) . 2 术中出血t观察组平均术中出血量为 9 0 m 1 ， 与对照组平均术中出血量 1 1 0 m 1 相比， t 检 验两组无显著差别伊0 . 0 5 ) . 3 术后病率指术后连续 2次体温超过 3 8 . 5 0C， 或伤口 感染者。 观察组发生术后病率者5 例， 对照组发生术后病率者 1 8 例( 术后连续两次 体温超过 3 8 . 5 者 1 4 例， 伤口感染者 4例) 。两