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1、6 1 8 C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 4 N o . 4 A u g u s t 2 0 (”中国热带医学2 0 0 4 年8 月第4 卷第4 期 检验技术 检测大肠菌群纸片可疑结果的实验研究 I n v e s t i g a t i o n i n t o t h e c a u s e s o f s u s p i c i o u s r e s u l t s i n i n s p e c t i n g t h e e f f e c t o f d i s i n f e c t i o n o f t
2、a b l e w a r e s 勿 u s i n g C a l if o r m L a b S li p . Y U S h u 一 b i n g , L IA N G J in g 一 t a o , C H E N S h u 一 l i n g . ( F o s h a n M u n ic ip a l C e n t e r f o r D i s e a s e C o n t ro l a n d P re v e n t i o n , F o s h a n 5 2 8 0 0 0 ， G u a n g d o n g , P . R . C h i n a
3、) 余淑冰， 梁景涛， 陈淑玲 摘要: 目的探讨大肠菌群纸片检测食具消毒效果时出现的可疑结果的原因。方法随机选取佛山市1 0 个饮 食店4 0 份可疑食具纸片为检浏对象， 采用5 0 m 1 乳糖胆盐发酵培养液进行实验研究。结果选取 1 0 个饮食店4 0 份 可疑阴性食具纸片， 证实了其中3 7 份为阳性， 假阴性率为9 2 . 5 %.结论对出现可疑结果的纸片可放入乳糖胆盐 发酵培养液中再按常规发酵法的程序进行大肠菌群的检浏。 关健词: 大肠菌群; 纸片法; 发酵法 中图 分类号: R - 3 3 1文肤标识玛: B文章编号: 1 0 0 9 - 9 7 2 7 ( 2 0 0 4 ) 0
4、 4 - 6 1 8 - 0 2 大肠菌群是指一群能在 3 6 c C , 2 4 h内发酵乳糖产 酸产气， 需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌。它 主要包括肠杆菌科的大肠埃希氏菌、 构椽酸杆菌、 克 雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。目前使用的大肠菌群纸片 主要是将特定的培养基附着在特定的检测纸片上， 它 对大肠菌群生长具有较强的特异性， 而抑制其它细菌 的繁殖， 所用材料设备简单， 并且操作容易， 实验所需 时间为1 6 一 1 8 h 。我国制订食( 饮) 具消毒卫生标准以 来 ， 文章报道不少， 但对纸片使用过程中出现的可 疑结果追踪的文章较少， 2 0 0 3 年6 月我们在检测饮食 店的食具消
5、毒效果时， 发现纸片上只出现红色斑点， 没有黄色背景区， 为此， 我们在实验室进行了相关实 验， 并进行了追踪调查， 现将情况报告如下。 1 材料与方法 1 . 1 检测对象随机选取佛山市 1 0 个饮食店 4 0 份 可疑食具纸片， 按纸片出现红色斑点 2 0 个/ 片4 种情况各取2片为1 个样本。 1 . 2 大肠杆菌( 8 0 9 9 ) 菌液制备取第 3 - 1 4 代的菌 种， 接种于营养琼脂斜面， 对于3 7 C 恒温箱培养 1 8 h 用接种针轻触该菌落洗于约 5 m l 生理盐水中振打 2 m i n ， 用生理盐水稀释成 1 0 个/ m 1 , 1 0 0 个/ M i
6、l l 0 0 0 个 / m l 三种不同稀释度备用。 1 . 3 材料大肠菌群检验纸片， 由广东某生物技术 有限公司生产， 均在有效期内使用; 灭菌滤纸片， 每张 纸片面积2 5 c 扩( 5 c m x 5 c m ) ， 高压灭菌后备用; 乳糖胆 盐发酵培养液， 由北京陆桥技术有限公司提供， 分装 l O m l 和5 0 m 1 试管中( 内有小倒管) 备用。 1 . 4 实验方法 1 . 4 . 1 发酵法用纸片法采样的纸片按纸片使用要 求经培养后观察结果， 发现只出现红色斑点的可疑纸 片， 将可疑纸片放人盛有5 0 m 1 灭菌乳糖胆盐培养液的 大试管中; 单纯检测大肠杆菌时，
7、把 1 m l 试样加在 l o m l 灭菌乳糖胆盐培养试管中。再按常规发酵法的 程序进行大肠菌群检测。 1 . 4 . 2 纸片法按使用说明书进行。 1 . 5 评价标准以G B 1 4 9 3 4 - 9 4 食( 饮) 具消毒卫生 标准进行评价。 2 结果 2 . 1 发酵法和纸片法检测大肠杆菌的情况当大肠 杆菌每毫升分别含有1 0 , 1 0 0 和1 0 0 0 三种不同稀释度 时， 经发酵法培养， 三种稀释度试管内大肠杆菌均为 阳性; 经纸片法培养， 三种稀释度的纸片仍为阴性( 只 出现红点， 无黄色背景区) ， 详见表 t o 表1 发醉法与纸片法检侧大肠杆菌的比较 试验方法
8、发酵法 纸片法 大肠杆菌含量( 个/ m l ) 1 0 1 0 0 1 0 0 0 +十+ 生理盐水 注: 表中“ +” 表示大肠菌群阳性， “ 一” 表示大肠菌群阴性 表2 4 0 份可疑食具纸片发酵法培养结果 红色斑点( 个) / 片样本数阳性份数阳性率( %) 5090100100 8910 1 0 3 79 2. 5 10101010一40 2 0 合计 作者单位: 佛山市疾病预防控制中心， 广东 佛山5 2 8 0 0 0 . 作者简介: 余淑冰( 1 9 5 1 一) . 女. 汉族， 4 11 主任技师 . 主要从事卫生徽生物检脸 . 万方数据 中国热带医学2 0 0 4 年8
9、 月第4 卷第4 期C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 4 N o . 4 A u g u s t 2 0 0 4 6 1 9 2 . 2 可疑食具纸片发酵法培养情况1 0 个饮食店的 4 0 份可疑食具检测纸片结果， 当纸片上出现单纯红点 可疑菌落 1 1 个/ 片或一片红晕时， 用发酵法检测证 实 1 0 0 %为大肠菌群阳性; 当纸片上出现 6 一1 0 个/ 片 时， 用发酵法检测证实 9 0 %为大肠菌群阳性， 当纸片 出现 0 . 0 5 ) . 3 讨论 人体的各部位、 各种器官和组织都可能发生厌氧 菌感染， 其中有
10、厌氧菌单独感染， 也有与需氧菌混合感 染， 约6 0 %的临床感染与厌氧菌有关。由于厌氧菌生 长缓慢， 药物敏感试验要2 一 4 d 才能得到结果， 且甲硝 基达哇等药物对大多数厌氧菌有疗效， 所以过去厌氧菌 感染多采用经验治疗， 多数情况下效果满意。但是近年 来， 随着抗菌药物的广泛使用， 厌氧菌的耐药性也逐年 增高， 单靠经验用药已无法得到满意的治疗效果， 因此 应重视和加强厌氧菌的培养和药敏试验。 厌氧菌培养的方法有多种， 临床上常用的有进口 厌氧培养设备培养， 厌氧箱、 厌氧罐和厌氧袋培养等， 但这些方法和设备昂贵， 操作复杂， 不便于厌氧培养 的床过接种; 厌氧罐和厌氧袋培养且所需消
11、耗品昂 贵， 不能重复打开使用。这些方法只利于实验室批量 标本培养使用， 不易普及推广。通过实验发现氧净 ( O x y p l a t e s T M ) 厌氧菌培养法对厌氧菌的检出不差于厌 氧袋培养法， 且较方便于厌氧标本的床边接种， 解决 了厌氧培养标本的运送和保存的难题。 总之， O x y p l a t e s T M 培养法的优点在于无需其它厌 氧装置， O x y p l a t e s T M 的划线和培养在一个标准的厌氧 培养基中， O x y p la t e s T M 能被反复使用多次， 并能重建一 个厌氧的环境。这种培养方法省去了厌氧罐、 厌氧 袋、 厌氧箱等复杂、 昂贵的消耗品， 无须预先还原 O x y p la t e S T M 或 贮 存在 厌氧空间中， 便于 实验室的 使用、 保存， 又能较好地分离出 厌氧菌， 因此， O x y p la t e s T M 培 养法值得在临床上推广使用。 收稿 日期: 2 0 0 3 - 1 1 - 2 7 ; 修回日期: 2 0 0 3 -1 2 - 3 1 万方数据