氯胺酮对内毒素致急性肺损伤细胞因子表达的影响.pdf

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1、第1 3 卷第6 期 口岸1 1 生控制 氯胺酮对内毒素致急性肺损伤细胞因子 表达的影响 张云建 天津市塘沽区肛肠医院( 天津，3 0 0 4 5 0 ) 摘要目的观察氯胺酮对内毒素致大鼠肺组织细胞因子表达的影响探讨氯胺酮抑制炎性反应的 机制。方法成年大鼠2 0 只随机分为四组( 每组5 只) ，对照纽( C 组) 、内毒素组( L 组) 、内毒素+ 氯胺酮 2 0t z g k g m i n ( L + K 2 0 生g ) 、内毒素+ 氯胺酮4 0C s k g r a i n ( L + l ( 加组) 。在注射内毒素4h 后处死动物开胸取 标本，用分光光度法测定诱生型一氧化氮合成酶(

2、 i N O S ) 、丙二醛( M D A ) 、N O i N 0 3 浓度。结果L 组肺 组织的因子的表达明显增高，氯胺酮预处理组肺组织i N O S 、M D A 、N O i ，N O j 浓度较L 组明显下降且 随着氯胺酮剂量的增加而抑制效应增加。结论氯胺酮能明显抑制内毒素诱导大鼠肺细胞因子的 表达对内毒素致肺损伤有保护作用。 关键词氯胺酮细胞因子内毒素大鼠肺 中图分类号 R 一3 3 文献标识码B 既往研究报道，全麻药氯胺酮可以抑制内毒素 ( L P S ) 诱导的细胞黏附因子及核因子KB 的过量生 成，并能减轻内毒素诱导的肺损伤。近年来有研究表 明i N O S 、M A D

3、在急性肺损伤中发挥着重要作用。 N O S 存在于肺血管内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细 胞、中性粒细胞等处。M D A 是脂质过氧化反应的终 产物，可以通过检测M D A 含量以估计体内氧自由基 的含量。此研究拟探讨氯胺酮对内毒素致大鼠肺损 伤时i N O S ，M D A ，N O i N O ；含量的影响。 1 材料与方法 1 1 动物、药物和试剂W i s t a r 大鼠，体重2 3 0 9 - 2 6 0 9 雌雄不拘( 中国医科大学动物中心提供) ，大肠杆菌 内毒素( 0 5 5 ：B 5 ，S i g m a 美国) ，盐酸氯胺酮注射液 ( 1 0 0m g 2m L ，江苏恒瑞)

4、 ，i N O S ，M D A ，N 0 i N O j 试 剂盒( 武汉博士德公司) ，7 2 2 型分光光度计( 波长 6 2 0n m ) ，低温离心机( D u p u n t S T 一2 ) 。 1 2 动物模型与分组2 0 只大鼠随机分成4 组，每 组5 只。对照组：股静脉输注生理盐水2m l _ h ；L P S 组：股静脉输注生理盐水2m L h2h 后，按5 , g k s 总 量输注L P Slh ：K 2 0 组：从股静脉以2 0I L L g k g r a i n 速 度输注氯胺酮2h 后按5m g k g 总量输注L P S1h ； K 4 0 组：从股静脉以4

5、 0 斗g k g m i n 速度输注氯胺酮 实验研究 2h 后按5m g k g 总量输注L P S1h 。各试验组在输注 L P S 完毕后4h 取肺组织，匀浆离心取上清液代测 指标。 1 3M D A 测量采用硫代巴比妥酸法原理：M D A 与 硫代巴比妥酸反应后形成红色缩合物，经正丁醇抽 提后可在紫外可见光连续分光光度计5 3 5a m 进行 比色定量。i N O S 及N O i N O ；按照试剂盒说明书操 作，依照标准公式计算其实际浓度。 1 4 统计学方法计量数据用均数标准差( X S ) 表示，应用S A S 8 0 软件进行单因素方差分析，P 0 0 5 ， 为差异有显著

6、性。 2 结果 2 1 与对照组相比，L P S 输注组肺组织的i N O S ， M D A ，N O i N O ；含量均升高，P O 0 5 。 2 2K 2 0 组与K 4 0 组肺组织的( P 0 0 5 ) 较未经处理 的单纯L P S 组低( P 0 0 5 ) ，且随着氯胺酮剂量的增加 而抑制肺组织的i N O S ，M D A ，N O i ，N O ；的生成能力 加强( P 0 0 5 ) ，结果详见表l 。 3 讨论 脓毒血症及感染性休克时肺脏的损伤m 现最 早，也是导致病人死亡的主要原因之一，主要机制之 一是肺内的P M N 释放大量的细胞因子及P M N 通过 一2

7、9 万方数据 口岸卫生控制 第1 3 卷第6 期 表1 不同剂量氯胺酮对肺组织i N O S 、M D A 、N 0 i N O i 含量的影响 与C 组相比，1 ) 0 0 l ；与L 组相比，P 0 0 5 。 “级联爆发”方式产生活性氧自由基，这些酶类及细 胞因子会造成组织损伤。在急性肺损伤时，氧化介导 的组织损伤在急性肺损伤或A R D S 的病理生理过 程中起重要作用，在各种炎症刺激下，肺血管内皮 细胞、肺泡上皮细胞、气道上皮细胞及激活的肺泡 巨噬细胞，会产生大量N O 和超氧化物，进而形成过 氧亚硝酸盐。过氧亚硝酸盐使肺内各种蛋白质的氨 基酸硝酸化和氧化，抑制蛋白质的功能。N O

8、在肺损 伤中扮演重要角色，N O S 存在于肺血管内皮细胞、 平滑肌细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等处，内毒素可 以诱导上述细胞产生大量的i N O S l l l ，随后i N O S 催 化L _ 精氨酸产生大量N O ，N O 生成增加。一方面使 机体杀伤细菌的能力增强，同时也使组织受到损 伤。N O 的代谢产物N O i ，N 0 ；是氧自由基的一种，可 引起细胞膜损伤。有研究证明，正常情况下，肺动脉 及主动脉检测不到诱生型一氧化氮合酶基因的表 达，但当内毒素进入机体后i N O Sm R N A 和蛋白表 达水平显著增力t l 2 J 。N O 的细胞毒作用主要有：N O 与 D N A

9、 合成酶、线粒体呼吸链中的F e s 基结合，形成 铁一亚硝酰基络合物，使酶中的铁活性丧失，从而 破坏许多含铁的细胞代谢关键酶的活性。另外，N O 与激活的炎性细胞产生的氧自由基相互作用，造成 组织损伤，N O 可与超氧阴离子( O i ) 迅速反应，形成 过氧亚硝基阴离子( p e r o x y n i t r i cO O N O - ) ，它不是 自由基，却是一种可自由扩散的强氧化剂，能使核 糖核酸还原酶失活，抑制D N A 复制，促进蛋白质过 氧化反应，破坏膜结构，在内毒素致急性肺损伤中起 重要作用【3 4 1 。 M D A 是脂质过氧化反应的终产物，可以通过检 测M D A 含量

10、以估计体内氧自由基的含量，S O D 是氧 自由基的清除剂，S O D 大多存在于细胞内，在细胞外 一3 0 一 间隙的保护性酶浓度很低。静脉注射内毒素后S O D 降低，说明肺内产生的氧自由基增加，消耗了S O D 或S O D 产生下降，抗过氧化反应能力下降。 在l 临床上，氯胺酮在脓毒血症及休克病人的麻 醉中发挥着重要作用。早期的了解仅限于氯胺酮兴 奋体内儿茶酚胺的作用，近年研究表明，氯胺酮能降 低内毒素休克病人的病死率。国内外有许多文献报 道氯胺酮能够减轻内毒素致大鼠肺损伤，包括降低 肺水肿、降低T N F Q 及I L 一6 的水平1 5 1 。 此研究采用两种剂量的氯胺酮处理内毒素

11、大鼠 的结果显示，L P S 能引起大鼠肺组织i N O S ，M D A ， N O i N O ；明显增加，给予一定剂量的氯胺酮处理后， 肺组织中的i N O S ，M D A ，N O ；N O i 明显下降，证明 了氯胺酮能有效降低内毒素引起的肺组织中炎性因 子的产生。氯胺酮可通过抑制N M D A 受体降低i N O S 活性，减少N O 生成；还可直接抑制巨噬细胞产生 N O 嘲。 此研究对大鼠注射L P S 后，观察到肺组织M D A 含量较正常表达增加，用氯胺酮处理后，M D A 含量 明显下降，说明氯胺酮可通过干预肺内M D A 的表达 而发挥肺保护作用。 总之，此研究证明氯

12、胺酮能明显抑制内毒素大 鼠肺组织i N O S ，M D A ，N O ；，N O i 的产生，并且当氯 胺酮剂量增大时，这种抑制效应加强。关于氯胺酮降 低这些炎症因子的确切的分子及生物学机制，有待 于进一步的实验研究。 参考文献 【l 】K i r k e b e nK A ，S t r a n dA 1 I l er o l eo f n i t r i co x i d ei ns e p s i s a l l o v e r v i e w A c t aA n a e s t h e s i o lS c a n d 1 9 9 9 ；4 3 ：2 7 5 2 8 8 2 】H i

13、 l lG E ，A n d e r s o nJ LL y d e nE R K e t a m i n ei n h i b i t s p r o i n f l a m m a t o r ye y t o k i n e i n d u c e dr e d u c t i o no fc a r d i a c i n t r a c e l l u l a rc A M Pa c c u m u l a t i o n A n e s t h A n a l g ，1 9 9 8 ；8 7 ： 1 0 1 5 1 0 1 9 3 】H a d d a dI Y ，P a t a

14、k iG ，H uP Q u a n t i t a t i o no fn i t r o t y r o s i n e l e v e l si nl u n gs e c t i o no fp a t i e n t sa n da n i m a l sw i t ha c u t el u n g i n j u r y JC l i nI n v e s t ，1 9 9 4 ；9 4 ：2 4 0 7 【4 】W i z e m a n nr im ，G a m d n e rC R ，L a s k i nJ D P r o d u c t i o no fn i t r

15、i c o x i d ea n dp e r o x y n i t r i t ei nt h el u n gd u r i n ga c u t ee n d o t o x e m i a JL e u k o cB i o l ，1 9 9 4 ；5 6 ( 2 ) ：7 5 9 7 6 8 【5 】T a n i g u c h iT S h i b a t aK ，Y a m a m o t oK K e t a m i n ei n h i b i t s e n d o t o x i n - i n d u c e ds h o c ki n r a t s A n e

16、s t h e s i o l o g y ，2 0 01 ；9 5 ： 9 2 8 9 3 2 万方数据 第1 3 卷第6 耨张凳建氯骚黼对内毒素致惫穗静损痿獭脆嗣子表达的影响 T h ee f f e c to fk e t a m i n eO i lt h ee x p r e s s i o no fc y t o k i n ei nl u n gt i s s u ei n j u r e db ye n d o t o x i n Z h a n gY u n j i a n T a n g g ua n u si n t e s t i n e sh o s p i t a

17、lo fT i a n j i n ( T i a n j i n ，3 0 0 4 5 0 ) A b s t r a c t O b j e c t i v e T os t u d yt h ee f f e c to fk e t a m i n eo nt h ee x p r e s s i o no fc y t o k i n ei nl u n gt i s s u ei n j u r e db y e n d o t o x i n ，a n df i g u r eo u ti t sr e s t r a i nm e c h a n i s mo ni n f l

18、a m m a t i o n M e t h o d s 2 0a d u l tW i s t a rr a tw e r er a n d o m l y d i v i d e di n t o4g r o u p s ，5a n i m a l si ne a c hg r o u p G r o u pl ，c o n t r o lg r o u p ，w a so n l yg i v e nn o r m a ls a l i n e 2 m l hi v ； G r o u p2 ，L P S ( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e )

19、g r o u p ，w a sg i v e nL I ) S5 m g k g ha f t e rN Si v g t tf o r2h o u r s ；G r o u p3 ，k e t a m i n e g r o u p ，W a s 蕾V e nL P Sa f t e rk e t a m i n e2 0 秘g k g m i nf o r2h o u r s ；G r o u p4W a Sg i v e nI X Sa f t e rk e t a m i n e4 0I x g k g m i nf o r2h o u r s 讹ea n i m a l sw e

20、r ee x e c u t e da f t e rN So rL P Si n j e c t i o nf o r4h o u r s a n dt h e i rc h e s t sw e r e i m m e d i a t e l yo p e n e d ，l u n g t i s s u ew e r et a k e no u t ，d e t e r m i n e di N O S 、M D A 、N O ；N O ；c o n c e n t r a t i o nw i t h s p e c t r o p h o t o m e t r y 。R e m i

21、 t sT h ei N O S 、M D A 、N O i 舞O ；c o n c e n t r a t i o no fL P Sg r o u pi ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a n c o n t r o lg r o u p s ( P 0 0 5 ) ；t h ek e t a m i n eg r o u p Si s s i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nL P Sg r o u p s 。a l s op o s i t i v e l yr e l a t e d w i

22、t ht h ed o s eo fk e t a m i n e C o n c l u s i o n K e t a m i n eC a l le v i d e n t l yi n h i b i tt h ee f f e c to fL P So nt h ee x p r e s s i o no f c y t o k i n ei nr a tl u n gt i s s u e ，a n dp r o t e c tl u n gt i s s u ef r o mi n j u r i n g 。 K e yw o r d sK e t a m i n ec y t

23、o k i n ee n d o t o x i n r a tl u n g 收稿日期2 0 0 8 一l1 2 3 信息窗 从甲鱼中检出一株麦氏弧菌 2 0 0 8 年4 月8 霹，炙津市塘沽隧疾病预防控静l 中心传染病防铺粹从中心北路水产市场采取水产品涂辕样品3 0 静其中一 份甲鱼涂抹样品经培辩后发现可疑茵落。实骏寅血清凝集安验初检为0 1 3 9 群霍乱弧茵。报送戈津市疾病预防控制中心詹确认 为一椿与0 1 3 9 殍霍乱弧莓有交叉凝集反应始麦氏弧蓊。 1 耪粹与穷法 1 1 材料 1 1 。1 标本采源样品泉源于塘活聪中心北路拇产市场 1 1 2 碱棘琼髓培豢基、碱往臻器增莲液来源

24、予莛津市卫受酚壤毒辛技秀爱论霉錾蠢臻豢基麓袁缳凄期内) 。 1 1 - 3 饕乱孤茵诊断崴清由天津市疾病预防控制中心统一提供( 在保质期内) 。 1 2 方法分离培养、生化试验均按霍乱防治手册第五版( 卫生部1 9 9 9 ) 操作。 l 。3 龊器壤强K - 3 2 鑫毒缀生物梭潮援 2 结果 2 1此茵株在碱性胨水增茵液中长有茵膜。农碱性琼脂平板上呈扁平、中间凹陷的盘状茵落，农面光滑湿润、灰白色。半透明中 心骞黑色沉淀。革兰囊色为G 一短小稹弯药秘穗，无茅戆，无荚蹊。 2 2 裁动实验取该旃鲍培养物放置玻片上，葳微镜下暗税野观察，可藏该莓呈流燕袄穿援运动：滴加一滴0 1 3 9 群霍乱诊断

25、血 清后。运动停止，凝集成决。 2 3 粘丝实验取0 S 去氧胆酸钠一滴放置玻片上，拱取该茸培养物岛之研磨，可见有细丝出琨。 2 4 血清凝集实验执驭该葛培黍耪分别与0 1 群、0 1 3 9 弹霍毳诊帮奴海和生理簸掘透行凝袈，0 1 群霍髓诊断血清一) ；生理 盐水( 一) ；0 1 3 9 群霍乱诊断血清( 十) 。 2 5V I T E K 一3 2 自动微生物检测仅篓定取普邋平板上培棼物用0 。4 5 盐水制成菌悬液，充G N I + 卡，由A I M S 鉴定系统避行鉴 定，5 t 酵凝告鉴定结摹：9 6 为麦氏羧莲。 3 结论 本例，塘沽区疫缡预防控制中心血清凝集实验初步确认为0 1 3 9 群霍乱弧茵。船经天津市痰病预防控制中心君生化仪器鉴 定隽麦氏菝燕，可晃亥蓑棘与0 1 3 9 舞霍魏弧蘩务在共羁楚捧莸霞。砖争霍羲羲蓥畿实验室检测。痘娃血涛凝集实验酌结装绝各 形态学和擞化实验结暴做出最终判髭。 资料来源：王福王英屠春风炙津市塘沽然疾病预防控制中心 3 1 万方数据