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1、第1 3 卷第5 期口岸卫生控制 水产品扇贝中沙门氏茵检测方法的优化 张秀妍马琳许岩桂英爱 大连市水产技术推广总站( 大连，1 1 6 0 2 3 ) 王慧龙 大连理工大学( 大连，1 1 6 0 2 3 ) 摘要对水产品扇贝中的沙门氏茵进行检测，用其阳性物质进行质量控制，避免了使用标准菌株的 繁琐，检测结果准确可靠。 关键词水产品沙门氏茵检测质控物质 中图分类号R 一3 3 文献标识码B 1引言 在大多数沿海国家，水产品行业是税收的主要 来源，在食品供应中也占有相当的份额。然而大多数 水产品，尤其是贝类，容易被微生物所污染。在世界 各地的水产品食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占 首位。因此，对
2、水产品和动物源性产品的致病菌检测 中，沙门氏菌被列为必检项目。 沙门氏菌是一种人畜共患的肠道致病菌，在l O 4 2 都可生长，最适生长温度为3 5 3 7 。沙门 氏菌是革兰氏阴性无芽孢杆菌，有20 0 0 多个血清 型，是一群形态和培养特性都类似的肠杆菌科中的 一个大属。沙门氏菌目前通用的检测方法是按照国 家标准G B4 7 8 9 2 0 2 0 3 进行的常规检测，但是该方 法在检测过程中需要采用沙门氏菌标准菌株进行对 照，而标准菌株需要定期转种、复壮、专用冷藏箱放 置等，操作步骤比较繁琐，增加了菌株污染环境的机 会，易给人身带来伤害。而在该论文中，利用辽宁省 检验检疫技术科学研究所研
3、制的沙门氏菌阳性物质 对水产品中沙门氏菌的定性检测进行质量控制，可 以有效克服常规检测方法中存在的缺点，减少了沙 门氏菌外泄的机会，检测结果同样准确。 2 材料和方法 2 1 材料 培养基及生化鉴定管购于北京陆桥技术有限责 任公司；沙门氏菌阳性质控物质购于北京兰伯瑞生 物技术有限公司。 2 2 样品 以购于大连农贸市场的虾夷扇贝作为水产品的 实验研究 代表，按照G B4 7 8 9 2 0 2 0 0 3 要求取样，制备样品。 2 3 方法 2 3 1 增菌培养 扇贝样品的增菌培养按照国家标准G B T 4 7 8 9 2 0 2 0 3 的方法直接增菌。以无菌操作称取2 5g 扇贝肉样品，加
4、入2 2 5m L 缓冲蛋白胨水，用均质器 以80 0 0r m i n 1 00 0 0r m i n 匀浆lm i n ，于3 6 培 养1 8h 增菌。然后移取1 0m L ，转种于1 0 0m L 的氯 化镁孑L 雀绿( M M ) 增菌液内，于4 2 培养2 0h 。同时 另取1 0m L ，转种于1 0 0m L 亚硒酸盐胱氨酸( S C ) 增 菌液中，于3 6 的条件下培养2 0h 。 沙门氏菌阳性质控物质增菌培养沙门氏菌阳 性质控物质装于处于高真空状态的西林瓶中，从开 启到测试结束均应按照无菌操作进行。该阳性物质 开启后立即加人o 5m L 蒸馏水进行再水化，然后放 入2 5
5、m L 的缓冲蛋白胨增菌液中。在3 6 的条件下 增菌培养1 8h 。将该培养液平均分成两份，一份接种 于1 0 0m LM M 中于4 2 培养2 0h ，另一份接种于 1 0 0m LS C 中于3 6c C 培养2 0h 。 2 3 2 分离培养 取增菌液一杯，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂 平板和个D H L 琼脂平板。两种增菌液可同时划线 接种于同一个平板上，于3 6 1 培养2 4h ，观察各 个平板上生长的菌落。挑取可疑典型菌落进行革兰 氏染色镜检；另挑取可疑菌落接种于T S I 琼脂试管 中，于3 6 1 培养2 4h ，观察其培养特征。 2 3 3 生化实验 自选择性琼脂平板上直
6、接挑取数个可疑菌落， 一3 1 万方数据 口岸卫牛控制第1 3 卷第5 期 接种于生化反应试剂管中，包括靛基质( 蛋白胨水) ： 尿素( p H7 2 ) 、K C N 、赖氨酸脱羧酶、尿素酶琼脂等， 于3 6 1 培养2 4h ，观察结果。 3 结果 3 1 菌落培养特征 3 1 1 扇贝样品菌落培养特征 D H L 琼脂上长出圆形菌落、不透明，灰色或灰白 色。湿润，粘性较大，附着于培养基上不易刮取；乳糖 阳性的菌株为粉红色，中心不带黑色。B S 琼脂上长 出绿色菌落，周同培养基微变黑或不变黑。革兰氏染 色结果为阴性杆菌，部分有芽孢。在T S I 琼脂上斜面 产酸、产气、不产H 2 s 。
7、3 1 2 沙门氏菌阳性质控物质菌落培养特征 两种增菌液分离菌在D H L 琼脂上长出圆形、表 面光滑、中心带黑色或几乎全黑色、边缘无色、透明 的菌落，乳糖阳性的菌株为粉红色、中心带黑色；在 B S 琼脂上获得无色透明、湿润光滑、中等大小、圆形 带黑色中心的菌落，或为菌落黑色有金属光泽、菌落 周围培养基呈黑色或棕色。革兰氏染色结果为阴性 两端钝圆短粗杆菌，无芽孢、荚膜。在T S I 琼脂上产 气、产H 2 s 、斜面变黄、底层产酸有动力。 3 2 生化试验 生化培养液经3 6 1 培养2 4h 后，扇贝样品 和沙门氏菌阳性质控物质的生化反应结果详见表l 。 表1扇贝样品和沙门氏菌阳性质控物质的
8、生化反应结果 注1 为扇贝样品、为沙门氏茵阳性质控物质；+ 表示I t E I , l i ，一表示阴性；I N D 一靛基质，O N P G - - I B 半乳糖苷醇，C r r _ 枸橼酸盐， U R E 一尿素，K C N 一氰化钾，L D C 一赖氨酸，M A N 一甘露醇，V P V P 实验，H 2 s 一硫化氢 4 讨论 该文采用沙门氏菌阳性物质作为质量控制的手 段，对水产品扇贝中的沙门氏菌按照相关标准进行 定性检测，可以有效地对沙门氏菌的阳性检出进行 监控，并避免了沙门氏菌标准菌株保存步骤的繁琐。 但是该阳性质控物质仍然含有活的微生物，不要直 接用手接触，操作过程中要注意生物
9、安全性，避免菌 株污染。 5 结论 根据扇贝样品和沙门氏菌阳性质控物质的菌落 形态、培养特征及生化反应结果可知，被测样品中沙 门氏菌的检测结果为阴性。因此，对水产品扇贝中的 沙门氏菌进行检测，用其阳性物质进行质量控制，检 测结果准确可靠，也避免了使用标准菌株给操作带 来的繁琐和不安全因素，值得推广应用。 参考文献 【l 】赵宏，张宏伟，魏亚东，等水产品中沙门氏菌的检测和确证 口岸卫生控制，2 0 0 6 ；1 l ( 4 ) ：2 2 2 3 【2 】G B4 7 8 9 2 0 - 2 0 0 3 食品卫生微生物学检验一沙门氏菌检 验中国标准出版社2 0 0 4 ：1 3 1 O p t i
10、 m i z i n go ft h em e t h o df o rS a l m o n e l l ad e t e r m i n a f i o ni na q u a t i cp r o d u c t Z h a n gX i u y a n M aL i nX uY a nG u iY i n g m D a l i a nf i s h e r yt e c h n i c a le x t e n s i o nc e n t e r ( D a l i a n ，11 6 0 2 3 ) W a n gH u i l o n g D a l i a nu n i v
11、e r s i t yo ft e c h n o l o g y ( D a l i a n ，11 6 0 2 3 ) A b s t r a c tT od e t e c tS a l m o n e l l ai na q u a t i cp r o d u c t ，d oq u a l i t yc o n t r o lw i t hp o s i t i v em a t e r i a l T h i sw a y ，a c c u r a t e a n da u t h e n t i cr e s u l t sc a nb er e a c h e d ，a l s ot h et r o u b l e s o m eo fu s i n go fs t a n d a r dS a l m o n e l l as t r a i n sc a nb e e l i m i n a t e d K e yw o r d sA q u a t i c p r o d u c t S a l m o n e H ad e t e r m i n a t i o n q u a l i t y - c o n t r o l 收稿日期2 0 0 8 - 0 5 2 0 3 2 万方数据