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1、论著 文章编号： !“#$%“% （#?，AB CD=#E;?，F790 1,?#GH?，0I3 J=#K=?（1HLL; HM NOHKOHLHG，8HDPO, Q=L=OPG Q;R=SL I?=T;PU=OG，J=V? )!“WXLHP; O,; M;U=Y=L=OG HM O,; SH?UOPDSO=H? ?R MHPKO=H? HM SPO=L; Z=O, =KKHPOL=E;R S,H?RPHSGO;U YG O=UUD;#;?=?;P=? O;S,?HLHG “# $“%LHK;PU; P;T;PU; OP?USP=XOU; （,-./-） ;?; ZU =?OPHRDS;R =
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6、不同 程度的损伤， 但是软骨本身的修复能力非常有限 ! ， 依 靠软骨的自发修复通常不能使病变的软骨得到有效和 完全的恢复， 而目前也缺乏有效的外科手段来修复 基金项目： 国家 “*+” 生物高技术基金资助项目 （ 组： 实验组 （! ?“型胶原酶消化 分离制备软骨细胞悬液， 进行原代培养， 细胞长至 6=?汇合时 用 =-+?胰酶消化传代。 真核表达载体 (/转染细胞端粒酶活性的检测 使用端粒酶检测试剂盒 （47ABC） 采用 “$( （($K） ， L 引物 （KK） （上海生工生物公司合成） ， 反应条件为： M% N、 ;= D； O= N、 ;= D； P+ N、 % D， ;= 个
7、循环， 最后 P+ N 延伸 )= B7J。阴性对照以裂解液代替端粒酶提取液， 以 5(0Q 上游引物 （KK） 代替 “4 引物。($ 产物用 M?聚丙酰胺电泳 （)P R， % B7J； +%= R， ) !） 进行分离。用试剂盒提供的 “4$6 作为阳性对照。 )-%转染细胞致瘤性检测 将转染的软骨细胞 （)- S )=6个） 接种于裸鼠皮下， 分别于 ;、 O 个月取材进行 Q# 染色。 )-体外构建细胞!P N孵育 6 ! 后， 在 01#1 （含 )=?234） 中培养 +% * %6 !， 移植至裸鼠皮下。 )-O软骨形成的检测 复合体植入后 ; 和 O 个月分别取材， 标本经
8、%?多聚甲醛 固定、 包埋、 切片后， 进行番红 “T” 个月可见大部分转染的软骨细胞死亡， O 个月软骨细胞 全部坏死， 吸收， 转染软骨细胞致瘤性为阴性。 +-;标本的大体观察、 组织化学和免疫组织化学检测 实验组和对照 ) 组， 复合体已被软骨样组织包裹， 弹性较 好， 体积有所缩小； 对照 + 组明显缩小， 周围被覆纤维样组织。 植入后 ; 个月， 实验组组织切片显示番红 “T” 和甲苯胺蓝 染色阳性的新生软骨形成， 修复区与周围软骨连接较好； 对照 ) 组， 切片周边有部分软骨样组织形成， 但中间为阴性； 对照 + 组 染色为阴性。植入后 O 个月， 材料基本降解， 实验组新生软骨
9、组织逐渐相互连接融合， 番红 “T” 和甲苯胺蓝染色阳性， 软骨细 胞和软骨基质丰富， 关节缺损基本修复； 对照 ) 组，新生软骨样 组织范围较 ; 个月有所扩大， 但中间无明显染色， 关节缺损部 分修复； 对照 + 组， 无明显软骨样组织形成。 实验组， 术后 ; 个月切片可见大量的“型胶原染色阳性的 软骨细胞， O 个月阳性范围明显扩大； 对照 ) 组， 切片周边可见 “型胶原染色阳性的软骨细胞， O 个月阳性范围有所扩大， 但中 间为阴性； 对照 + 组，“型胶原染色阴性。实验组与对照 ) 组 比较 （# V =-=） ， 实验组与对照 + 组比较 （# V =-=)） ， 两者相差 有
10、显著性意义。 #讨论 据报道， 仅在美国， 每年有上百万人因疾病或事故 造成组织或器官损伤， 其中包括大量的关节软骨的损 伤， 治疗这些病人耗资 %= 亿美元。针对人体损伤的 组织或器官进行治疗的主要方法是进行异体组织或器 官移植， 但这种治疗方法受到供体缺乏的严重限制。 由于软骨组织自身的修复能力非常有限， 因此如何对 损伤的软骨组织进行有效的修复治疗， 一直是临床迫 切需要解决的问题， 也是临床医学研究的重点之一。 科研人员在这方面进行了多种研究和探索， 其中包括 胚胎干细胞的定向诱导分化和软骨组织工程体外构建 软骨组织等， 特别是软骨组织工程的发展给软骨缺损 的修复带来了希望。但是正常软
11、骨细胞在体外培养容 易出现去分化现象， 很难扩增出足够的软骨细胞用于 工程化软骨体外构建的需要。 端粒酶因其能稳定细胞末端端粒长度、 延长细胞 寿命而备受关注。端粒酶的功能主要是通过向端粒末 端添加 !“#、 阻止端粒随细胞分裂而逐渐缩短， 从 而避免细胞出现 “复制、 衰老” 现象。人端粒酶逆转录 酶基因 （$!% 一起成功地在体外构建和裸鼠 体内形成了软骨组织。实验结果证明 $!%，“# $%, %PP?Q6 JP Q2623?) =26JJFJ2G Q$J)3JQR6?G J 3?K=53 JP Q$J)3= )?P?Q6G 5 = Q=5? SJ)? D , D BJ? DJ56 A2
12、3F “S，LL8，8L （(） ： *ML N *0, MT3?) U %，E=365 V，W2X=Y9ZJ=YJ5Q #, T3J65?3G 5 65GG2?H =66?3GJ :，“# $%, !?JS?3? ?F6$ K3?)5Q6G 3?K5Q=65? Q=K=Q56R JP $2S= P5C3JC=G6 D , ;3JQ Z=6 “Q=) AQ5 A“， LL-， .L （-） ： (* N (., 0D=QYGJ O E，“# $%, AKJ6=?J2G 3?K=53 JP P29 6$5QY?GG )?P?Q6G JP =365Q2=3 Q=365=F? 5 = FJ=6 SJ
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14、性较低， 密集的梭形瘤细胞与胶原纤维， 围 绕一个中心作放射状排列， 称为车辐状结构 （A6J35PJ3S 结构） 。 :F E ;，A?5S E “，B?6?R =6$J，-(，-. （(） ： 0(. N 0-H -I5?53=9AJ=3?G &，W5= V，W=? %，“# $%H G：= Q55QJK=6$JJF5Q= G62)R JP -( Q=G?G D H D %23 “Q=) ?3?J，-(-，1 （0） ： * N *1H M陈忠年H 实用外科病理学 E H 上海： 上海医科大学出版社，LL8H .H *)3?= T，WJ77= “，B3JFJ A，“# $%H G：?K?35?Q? 456$ * Q=G?G D H D %23 “Q=) ?3?J，-(， 0 （0） ： *-8 N *-LH （编辑王红）