注入不同刺激性液体建立小型猪胃溃疡模型.pdf

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1、第2 6 卷第4 期 2 0 0 9 年8 月 实验动物科学 L A B O R A T O R YA N l M A LS C I E N C E V o l l 2 6N o 4 A u g u s t2 0 0 9 注入不同刺激性液体建立小型猪胃溃疡模型* 田宇瑛罗明富徐一慧张维波 王广军王瑞红李翠红 ( 中国中医科学院针灸研究所，北京1 0 0 7 0 0 ) 摘要：目的摸索并建立小型猪胃溃疡模型。方法使用三种不同刺激性液体通过胃管灌入小型猪胃内，3h 后处 死取材，石蜡包埋及冷冻切片，用H E 染色，在普通光镜下观察与照相。结果用9 5 乙醇灌胃后，肉眼观察幽门附 近胃黏膜皱襞较完整

2、，色淡红，表面光滑，局部显示有轻微充血、水肿和深红色，镜下显示胃粘膜上皮和胃小凹较完 整，但有部分上皮肿胀，出现轻微损伤；用无水乙醇灌胃后，肉眼观察幽门附近胃黏膜皱襞虽较完整，但黏膜暗红颜 色的深度和面积均比9 5 乙醇灌胃模型有明显增加，镜下显示胃黏膜上皮受损，明显变薄，但仍残留少量上皮组 织，胃小凹变短，出现明显破损的溃疡面；用3 6 的冰乙酸灌胃后，肉眼观察胃内壁隆起呈明显白黄色，呈严重缺血 坏死状态，镜下显示胃溃疡组织黏膜上皮层损伤严重，部分区域黏膜上皮层完全消失，暴露出固有膜组织。结论 用冰乙酸灌胃是比较理想的造模方法。 关键词：胃溃疡；小型猪；动物模型 中图分类号：R 3 3 2文

3、献标识码：A文章编号：1 0 0 6 6 1 7 9 ( 2 0 0 9 ) 0 4 0 0 3 2 0 3 经脉脏腑相关的研究已经进行了几十年，其主 要思路是通过观察体表刺激后内脏的反应研究两者 的相关性。这种方法的不足之处是一次实验只能刺 激一个体表部位，如果想了解其它部位的情况就要 重新给予新的刺激，不能同步地观察不同部位刺激 对脏腑影响的差异，而且体表部位面积很大，充分比 较不同部位的差异需要很多次实验，工作量很大。 中医理论认为“有诸于内，必形于外”，任何内脏的病 理变化，都可以反应在体表上，而经络系统正是沟通 内脏与体表的联络系统。通过经络的联系，在相关 的经脉穴位上可出现病理反应

4、点，成为诊断疾病的 线索。因此，如果我们反方向地研究，通过观察改变 内脏状态后体表的反应研究两者的相关性，则问题 可以得到较好的解决。胃溃疡模型是较常使用的内 脏病理模型，国内外传统的建立的胃溃疡模型大多 使用大白鼠、兔子等较小的多毛动物，其不足之处是 这些动物体积较小，比较体表反应的空间分布差异 比较困难，另外由于多毛的缘故，体表的测量和观察 都比较局限。小型猪是用于医学实验的一种新型实 验动物，它已广泛使用于人的循环系统、消化系统、 免疫系统、皮肤组织等方面的研究，在动脉硬化症、 胃溃疡、心瓣膜修复、血管移殖、人类肥胖症及皮肤 科领域的研究中，小型猪是很有价值的实验动纠川， 因此本研究选择

5、小型猪建立胃溃疡病理模型。 1 材料和方法 使用北京农业大学培育的实验用小型猪4 只， 雄性，体重在8 5 1 1 5k g ，采用2 进1 2 ：1 分装的戊 巴比妥钠腹腔注射( 1 5 2m L k g 相当于3 0 4 0m g k g ) 麻醉空腹小型猪。首先测量小型猪下唇 至剑突下的食道长度，然后从口腔插入1 2F r 型号胃 导管，插至长度超过食道长度2 3e m ，由于动物处 于麻醉状态，胃管通过会厌部，动物不能作吞咽动作 配合而会有阻力，故操作者动作要慢，以防损伤会厌 部。插好后为验证是否插入胃中，将胃管另一端插 入水中，观察水中是否产生气泡，以排除插到肺脏的 可能。然后使用2

6、 0m L 注射器分别推人9 5 乙醇、 无水乙醇或3 6 的冰乙酸1 5m L ( 实际进入胃中 1 0m L ，胃管存留5m L ) ，造成局部溃疡损伤。 收稿1 3 期：2 0 0 9 0 2 2 0 基金项目：科技部9 7 3 项目资助课题( 2 0 0 6 C B 5 0 4 5 0 7 ) 作者简介：田宇瑛( 1 9 6 3 一) ，女，副主任技师，研究方向：从事针灸经络的基础实验研究。E m a i l ：y u y i n g t i a n y a h o o o o m e n 通讯作者：张维波，E - m a i l ：p r o f j i r I g l u o t

7、i l l 万方数据 第4 期田宇瑛等：注入不同刺激性液体建立小型猪胃溃疡模型 3 3 实验分为：9 5 乙醇：一只；无水乙醇：一只； 3 6 的冰乙酸：两只，其中灌人9 5 乙醇、无水乙 醇、3 6 的冰乙酸小型猪各一只，注射后3h 取材； 灌入3 6 的冰乙酸的另一只注射后一天取材，当天 禁食。以后用注射大剂量巴比妥纳加心内注射空气 栓塞方法处死动物，剖腹取胃脏，沿胃大弯剖开暴露 胃内壁，用肉眼观察胃内壁与周围正常胃组织( 呈粉 白色) 区别明显的片状溃疡面，然后用S o n y 8 2 8 数码 照相机拍照。取红色炎性变化的胃组织及正常胃组 织，经无水乙醇固定，石蜡包埋及冷冻切片，用H

8、E 染色，在普通光镜下观察与照相。 2 结果 三种造模观察结果显示，用9 5 乙醇灌胃后， 肉眼观察幽门附近胃黏膜皱襞较完整，黏膜色淡红， 表面光滑，局部显示轻微充血、水肿和深红色( 文后 彩版I 中图1 一A ) ；镜下显示胃粘膜上皮和胃小凹 较完整，但有部分上皮肿胀，出现轻微损伤( 文后彩 版I 中图2 一A ) 。无水乙醇灌胃后，肉眼观察幽门 附近胃黏膜皱襞虽较完整，但黏膜发暗红的颜色深 度和面积均比9 5 乙醇灌胃模型有明显增加( 文后 彩版I 中图1 一B ) ；镜下显示胃黏膜上皮受损，明显 变薄，但仍残留少量上皮组织，胃小凹变短，出现明 显破损的溃疡面( 文后彩版I 中图2 一B

9、) 。用3 6 的冰乙酸灌胃后，经肉眼观察胃内壁隆起呈明显白 黄色，呈严重缺血坏死状态( 文后彩版I 中图1 一 C ) ；镜下显示胃溃疡组织黏膜上皮层损伤严重，部 分区域黏膜上皮层完全消失，暴露出固有膜组织( 文 后彩版I 中图2 一c ) 。注射1d 后取材的猪溃疡更 为明显，溃疡面边界清晰可见( 图略) 。 3 讨论 胃溃疡模型是一个常用的动物病理模型，以往 国内的研究多使用大白鼠建立该模型，其方法有水 浸应激型【2 J 、乙酸灼烧型伸1 、乙醇致胃粘膜损伤型H 1 及幽门结扎型胃溃疡模型旧1 ，国外有文献报道用口 服Hp y l o r i ( 幽门螺杆菌) 的方法制造猪的胃炎和胃 溃

10、疡的病理模型【引。本研究是一个新的尝试，针对 小型猪和人在解剖学、生理学方面有着极其相似的 特点1 和实验的需要，我们采用经口腔插入胃管注 射刺激性液体的方法制造胃溃疡模型。采用插胃管 方法的优点是不破坏猪的基本生理状态，比腹腔手 术的方法对动物的干扰小，便于进一步观察内脏体 表相关规律，缺点是难以定点制造胃溃疡。由于本 工作仅研究内脏一体表的相关性，对胃溃疡的准确 位置和面积要求不高，故使用胃管注入法是可行的。 插胃管的一个注意点就是不要插到肺脏里，由于猪 处于麻醉状态，各种深浅反射均减弱，呼吸道黏膜刺 激性反射减弱甚至消失，有时容易将管子插到肺里， 排除的方法就是观察胃管是否有气体排出，如

11、果没 有，说明胃管插入部位正确。小猪胃的长度大概为 十厘米左右，插入胃管的长度超过食道2 3c m ，以 确保刺激性液体全部进入胃中。 研究结果表明，用3 6 冰乙酸1 5m L 灌胃，制造 胃溃疡模型的方法是可行的，其溃疡面清晰可见，病 理切片表明胃幽门附近黏膜损伤严重。用无水乙醇 灌胃也能产生一定的溃疡，但效果比冰乙酸差一些。 实验中还发现，灌胃后动物对麻药的敏感性明显变 差，再次麻醉需要较大的剂量，如控制不当，动物将 因过量麻醉引起呼吸麻痹而死亡，使得进一步用激 光多普勒血流成像仪观察体表血流量无法进行，相 比之下，用冰乙酸灌胃是比较理想的造模方法。 中医理论认为，内脏的疾病会通过经络反

12、映在 体表上，在体表形成病理反应点，这种体表的变化有 可能通过体表血流量的变化反映出来。在确定用冰 乙酸灌胃是比较理想的造模方法后，相继用冰乙酸 造模四只小型猪，造模后即刻用激光多普勒血流成 像技术观察体表血流变化，其中有两只小型猪在后 肢胃经区域，血流量有较明显升高，一只在腹部靠近 腿的部位，血流也有较明显升高，该结果与张栋“ 1 等 曾用家兔制造胆囊炎模型，然后用红外热像仪观察 到体表循胆经区域出现高温带，取得类似的结果。 由于体表反应可以通过医学影像学技术进行大面积 的同步观察，有利于分析比较不同脏器在体表上反 应的差异，通过观察内脏疾病与体表病理变化的关 系有可能揭示经穴脏腑相关规律，

13、克服了体表 内脏方向研究的技术难题。该研究的一个关键 步骤就是如何改变内脏状态，制造内脏病理模型是 一个基本方法，本研究在国内首次应用小型猪成功 制造胃溃疡模型，为将来的研究工作奠定了基础。 参考文献 1 景志忠，张永兴，王自强甘肃蕨麻猪实验动物化利用前景 J 万方数据 3 4 实验动物科学2 6 卷 实验动物科学与管理，1 9 9 7 ，1 4 ( 4 ) 6 4 6 5 2 徐叔云，卞如濂，陈修药理实验方法学 M 第二版北京： 人民卫生出版社，1 9 9 4 1 1 5 7 1 1 6 0 3 雍定国胃溃疡模型建立的方法研究 J 中国药理学报，1 9 9 1 ， 1 2 ( 6 ) ：5

14、2 2 4 王国中，陈志伟，潘洪明，等丹参抗人鼠乙醇性胃粘膜损伤的 作用及机制 J 中国中西医结合消化杂志，2 0 0 2 ，1 0 ( 6 ) ：3 4 0 5 K r a k o w k aS ，R i n g sDM ，E l l i sJA E x p e r i m e n t a li n d u c t i o no f b a c t e r i a l g a s t r i t i sa n dg a s t r i cu l c e rd i s e a s ei ng n o t o b i o f i cs w i n ei n o c u l a t e dw i

15、t h p o r c i n eH e l i c o b a c t e r - l i k es p e c i e s 【J J A mJV e tR e s ，2 0 0 5 ，6 6 ( 6 ) ： 9 4 5 9 5 2 6 】詹纯列，徐本法，白朝晖小型猪在医学实验中的应用 J 中 国实验动物学杂志，2 0 0 0 ，1 0 ( 2 ) 8 1 1 8 1 3 【7 张栋，付卫星，叶燕燕，等实验性胆囊炎家兔体表循经高温 线显示 J J 上海针灸杂志，2 0 0 1 ，2 0 ( 1 ) ：4 2 。4 3 M i n i - P i gM o d e lo fG a s t r

16、o h e l c o m aI n d u c e db yD i f f e r e n tI r r i t a n tR e a g e n t s T I A NY u 一) r i n g ，L U OM i n g f u ，X UY i - h u i ，Z H A N GW e i - b o ，W A N GG u a n g - j l l I l ，W A N GR u i h o n g ，L IC u i h o n g ( I n s t i t u t e 矿A c u p u n c t u r ea n dM o x i b u s t i o n ，C h

17、 i n e s eA c a d e m yo f C h i n e s eM e d i c a lS c i e n c e s ，B d j q n g1 0 0 7 0 0 ，C h n a ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v e E s t a b l i s h i n gm i n i p i gm o d e lo fg a s t r o h e l c o m a M e t h o d s T h r e ed i f f e r e n ti r r i t a n tr e a g e n t sw e r e i n j e c

18、 t e di n t ot h es t o m a c ho fm i n i p i g st h r o u g hg a s t r i ct u b ea n dt h et i s s u eo fs t o m a c hw a sg o t t e na f t e rk i l l i n gt h ep i gt h r e e h o u r sa f t e rt h ei n j e c t i o n T h et i s s u ew a se m b e d d e db yp a r a f f i n ，s l i c e da n dd y e db y

19、H Ew h i c hw a so b s e r v e da n dp h o t o u n d e rm i c r o s c o p e R e s u l t sA f t e ri n j e c t i n g9 5 a l c o h o l ，t h eg a s t r i cm u c o u sm e m b r a n ew a si n t a c t ，l i g h tr e da n ds m o o t h w h i l eo n l yal i t t l ec o n g e s t i o n ，e d e m aa n dd e e pr e

20、 dc o l o ri nl o c iu n d e rm a c m g r a p h y T h ee p i d e r m i sa n dg a s t r i cf o v e o l a w a si n t a c tw h i l es w e l l i n ga n ds l i g h t l yd a m a g e di nl o c iu n d e rm i c r o s c o p e A f t e ri n j e c t i n ga n h y d r o u sa l c o h o l ，a l t h o u g ht h e g a s

21、 t r i cm u c o u sm e m b r a n ew a ss t i l li n t a c ta r o u n dp y l o r u s ，b u tt h em e m b r a n ew i t hr e dc o l o rw a sd e e p e ra n dw i d e rt h a nt h a t o fi n j e c t i n g9 5 a l c o h 0 1 U n d e rm i c r o s c o p e t h ee p i d e r m i sw a sd a m a g e da n db e c a m eo

22、 b v i o u s l yt h i nb u ts t i l ls o m e e p i d e r m i sw a sk e p t T h eg a s t r i cf o v e o l ab e c a m es h o r ta n dg a s t r o h e l c o m aa p p e a r e do b v i o u s l y A f t e ri n j e c t i n g3 6 g h c i a l a c e t i ca c i d ，t h ei n t e r n a lw a i lo fs t o m a c hh u n

23、c h e dw i t hw h i t ea n dy e l l o wc o l o rw h i c hw a si s c h e m i aa n dd e a di nt i s s u e T h e e p i d e r m i sw a sd a m a g e ds e v e r e l ya n dd i s a p p e a r e dp a r t l yw h i l ei n h e r e n tm e m b r a n et i s s u ea p p e a r e d C o n c l u s i o ni n j e c t i n g

24、g l a c i a la c e t i ca c i dt h r o u g hg a s t r i ct u b ei si d e a lm e t h o dt om a k eg a s t r o h e l c o m a K e yw o r d s ：M i n i p i gm o d e lo fg a s t r o h e l c o m a ；A n i m a lm o d e l 。棚m _ H - _ - 。_ _ 一- - “- - I 。_ “w H - - H I H - _ - 一“H H “。_ - H - “叫。- - “_ 。 ( 上接第

25、3 l 页) Q u a l i t yC o n t r o lo ft h eL a b o r a t o r yZ e b r a f i s ha n dA c u t eT o x i c i t y T e s to nt h eZ e b r a f i s hi nD i f f e r e n tH e a l t hC o n d i t i o n s Z H A N GJ i n g j i ，Y I NH a o w e n ，Z H A OH u a q i n g ( B i o a s s a ya n dS o a yA s s e s s m e n tL

26、 a b o r a t o r y ，s h 州A c a d e m yo fP u b l i cM e a s u r e m e n t ，3 h a n g h a i2 0 1 2 0 3 ，C h n a ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v e T os t u d yt h et o x i c i t yo fz e b r a f i s hi nd i f f e r e n th e a l t l Ic o n d i t i o n se x p o s e dt ot h es a m ec h e m i c a l p o

27、l l u t a n t ，a n dt od i s c u s st h es u i t a b i l i t yo fc u r r e n tq u a l i t yc o n t r o l ( Q C ) o fl a b o r a t o r yf i s h M e t h o d sA c c o r d i n gt ot h e O E C D2 0 3F i s hA c u t eT o x i c i t yT e s tm e t h o d ，h e a l t h ya n ds i c kz e b r a f i s hw e r e p l a

28、 c e di nm e t h o m y la n dp o t a s s i u m d i c h r o m a t e ( K 2C r 20 7 ) r e s p e c t i v e l y R e s u l t sa n dC o n c l u s i o nT h ev a l u e so fK 2C r 20 72 4h L C 卯a n dM e t h o m y l9 6h L C o ft h eh e a l t h yf i s hw e r e3 2 3 3 8m s La n d4 9 1m s Lr e s p e c t i v e l y

29、 ，a n dw e r e3 0 2 5 5m g La n d3 0 4m s Li nt h es i c k f i s h A l t h o u g ht h el ( 2C r 20 72 4h L C v a l u e so fb o t hf i s hm e e tt h eQ Cr e q u i r e m e n t ，t h e r ei sas i g n i f i c a n td i f f e r e n c eo n t h e9 6 h - L C 5 0v o , l l e 8b e t w e e nt h et w og r o u p so

30、 ff i s hi nt h ea c u t et o x i c i t yt e s to fm e t h o m y l K e yw o r d s ：Z e b r a f i s h ( B r a c h y d a n i or e r i o ) ；Q u a l i t yc o n t r o l ；T o x i c i t yt e s t 万方数据 田字瑛等：注入不同刺激性液体建立小型猪胃溃疡模型 T I A NY u - y i n g ，e ta 1 M i n i - P i gM o d e lo fG a s t r o h e l c o m aI

31、 n d u c e db yD i f f e r e n t I r r i t a n tR e a g e n t s A 图l A 图1 一B 图l C BC 9 5 乙醇灌胃后，肉眼观察胃幽门附近黏膜较润泽，圈右侧局部有轻微发暗 无水乙醇灌胃后，肉眼观察胃幽门附近黏膜大部分发暗，溃疡加重一 3 6 冰乙酸灌胃后，肉眼观察胃幽门附近黏膜呈白黄色，溃疡加重 A B C 图2 A9 5 乙醇灌胃后，胃幽门附近黏膜轻微损伤( H E 染色，1 0 ) 图2 - B 无水乙醇灌胃后，胃幽门附近黏膜溃疡加重，脱落，变薄( H E 染色，x 1 0 ) 图2 - C3 6 冰乙酸灌胃后，胃幽门附近黏膜损伤严重( H E 染色，x 1 0 ) 图版I P l a t eI 万方数据