注射用头孢噻肟钠的含量测定及体外抗菌活性检查.pdf

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1、测定吸收度， 计算， 葡聚糖与样品溶液的R S D分别为0 . 1 5 % 和 0 . 2 3 %( n = 5 ) ， 结果表明: 葡聚糖溶液和样品溶液在2 h 内 均显色稳定。 3 . 5 重复性试验 取同批号的样品溶液5份， 照样品测定项下处理后， 苯 酚一 硫酸法显色后 2 0 m i n分别测定吸收度， 计算 R S D为 2 . 5 3 % ( n = 5 ) ， 结果表明: 该测定方法重现性良 好。 3 . 6 加样回收率试验 分别取同一批号( 0 4 1 1 2 1 ) 的超顺磁性葡聚糖氧化铁纳 米颗粒溶液9 份， 每份约1 m L ， 分别精密称定， 分别精密加人 干燥至恒重

2、的葡聚糖5 , 1 5 , 2 5 m g ， 依次照样品溶液的制备与 测定项下处理， 测定其加样回收率( n 二 3 ) ， 结果平均回收率 分别为9 7 . 3 % , 1 0 4 . 3 % , 1 0 2 . 6 % ; R S D为3 . 6 5 %。 表1 加样回收率测定结果( n = 3 ) T a b 1 R e s u l t s o f r e c o v e ry t e s t ( n = 3 ) 加人量 ( m g ) 回收率 ( %) 平均回收率 ( %) 2 5 . 3 测得量 ( - g ) 5 . 0 6 1 5 . 5 4 2 5 . 9 6 R S D (

3、 % ) 5 . 2 1 4. 9 9 7 . 3 1 0 4 . 3 1 0 2 . 6 1 0 1 . 4 3 . 6 5 用分光光度计在适当波长处可以测定多糖的含量。 4 . 2 样品中除葡聚糖外， 还含有较高浓度的铁， 此外还有甘 露醇、 构椽酸等。铁离子与苯酚可生成有色物质， 对实验有 干扰。比 较不经过强酸性阳离子交换树脂的样品， 当样品浓 度增大时， 会在波长4 8 5 n m和4 9 3 n m处出现最大吸收， 当样 品浓度降低时， 仅在波长4 8 8 n m处有最大吸收， 但样品加样 回收率测定时， 高、 中、 低3 浓度的平均回收率均在 1 3 0 - 1 6 9 %之间，

4、 回收率偏大， 可能是样品中的铁离子对显色反应 有增强作用。 4 . 3 本研究中所选用的阳离子交换树脂的填充物为强酸性 的苯乙 烯一 二乙 烯苯共聚物， 以0 . 2 m o l L一 1 的F e C l 3 溶液照 样品的测定项下进行处理， 测得的吸收度均低于0 . 0 0 5 ， 但以 0 . 2 m o l L一 1 的F e C 1 3 溶液以同 样稀释倍数， 不过树脂处理， 会在4 8 4 n m波长处有最大吸收， 吸收度为0 . 1 3 7 ， 结果也表明 该树脂能有效去除铁离子的干扰。 4 . 4 由于样品为黑棕色液体， 在用移液管量取时可能因不 易准确读数而产生误差， 所以

5、 采取重量法来测定样品中葡聚 糖的含量， 计算含量时可通过样品重量及相对密度计算。 4 . 5 比 较了以D 一 无水葡萄糖和葡聚糖作为对照品， 最后选 择了与原料分子量相近的葡聚糖作为对照品， 以校正测定结 果， 对葡聚糖溶液和样品溶液的紫外扫描结果表明: 二者均 在4 8 8 n m波长处有最大吸收， 虽与文献报道的4 9 0 n m不同， 但多次扫描， 结果稳定。 参考文献 许乙凯. 磁共振对比剂的发展概况及存在问题 J . 第一军医 大学学报， 2 0 0 2 , 2 2 ( 9 ) : 7 6 9 . I a m b e rt G , F a t t a l E , C o u v

6、r e u r P . N a n o p a rt ic u l a t e s y s t e m s f o r t h e d e l i v e ry o f a n t i s e n s e o l i g o n u c l e o t i d e s J . A d v D r u g D e l i v R e v , 2 0 0 1 , 4 7 ( 1 ) : 9 9 . 张玉忠， 张雪林. 转铁蛋白受体与磁共振分子影像学研究近况 J . 国 外医 学 临 床 放 射学 分册， 2 0 0 4 , 2 7 ( 5 ) : 2 6 5 . 李民勤， 徐慧显， 何炳林， 等.

7、 葡聚糖磁性毫微粒的制备【 J . 高等 学 校化学 学报， 1 9 9 6 , 1 7 ( 1 ) : 1 4 7 . 曹正国， 周四维， 孙凯， 等. 超顺磁性葡聚糖氧化铁纳米颗粒的 制备及其作为基因载体的可行性研究【 J . 癌症， 2 0 0 4 , 2 3 ( 1 0 ) : 1 1 0 5 . 收稿日 期: 2 0 0 4 -0 6 -01 ，.1一1一 12 rLresL ，J，月.J一lesJ 345 resLFesLr.L 3 . 7 样品溶液的制备与测定 取超顺磁性葡聚糖氧化铁纳米颗粒溶液约 1 m L , 精密称 定， 置2 5 m L 量瓶中， 精密加人等量的浓盐酸 1

8、 m L ， 振摇， 待样 品溶解呈黄色澄清溶液后， 加纯化水稀释至刻度， 混匀。另 精密吸取上述溶液2 m L ， 置小烧杯中， 加水8 m L ， 定量转移至 强酸性阳离子交换树脂柱中， 收集洗脱液， 置2 5 m L 量瓶中， 待溶液全部过柱后， 用水1 2 m L 分次洗涤试管， 并加人柱中， 收集洗脱液置同一量瓶中， 用水稀释至刻度， 摇匀， 即得供试 品溶液。 精密量取葡聚 糖对照品溶液( 约4 0 N .g / m L ) 和供试品溶 液各1 m L 置l O m L 具塞试管中， 分别精密加人5 %的苯酚溶 液1 m L ， 摇匀， 分别精密加人浓硫酸 5 m L ， 摇匀，

9、室温放置 2 0 m i n以上， 待溶液冷却至室温， 以试剂空白为参比， 在 4 8 8 n m波长处分别测定吸收度， 计算， 即得。 4 讨论 4 . 1 多糖在强酸作用下水解， 并脱水生成糠醛或其衍生物， 再与酚性化合物如苯酚缩合成有色物质， 反应迅速、 完全、 有 色物质稳定， 且其生成量与多糖含量存在定量关系， 所以可 注射用头抱唆肪钠的含量测定及体外抗菌活性检查 张碧玫， 傅静( 天 津 医 科 大 学 总 医 院 药 剂 科， 天 津3 0 0 0 5 2 ) 摘要: 目 的 建立高效液相色 谱法测定注射用头 抱味肪钠含量， 并考察其体外抗菌活 性。方法 采用K r o m a

10、s il C l。 色 语柱( 4 . 6 m m x 2 5 0 m m , 5 Nun) ， 甲 醉 一 磷酸 盐 缓冲 液( 3 0 : 7 0 ) 为 流动 相， 头 袍派酮 钠为内 标物， 流 速为1 m L “ m i n i - ， 检测波长为2 5 4 n m a 采用 微童 稀 释法 测定 其对不同 菌 株的M I C o 结果 头 艳 邃厉钠 在5 - 5 0 w g “ m L - 内 呈 现良 好线性关系 ( r = 0 . 9 9 9 9 , n = 3 ) o 回收率为9 8 . 2 % a - 1 0 0 . 4 % a ( R S D为0 . 8 2 % , n

11、 = 6 ) .测定三个不同厂家5 批样品含量均符合中国药典2 0 0 ( ) 版规定。M I C显 币 画 厕毛 质 雨 药 孚 杂 悉 2 而 年 2 面 第 2 3 港第1 期C h in J M A P ,2 0 0 6 F e b r u a r y , V o l . 2 3 N o . I 5 1 示不同的临床意义。结论该内 标法简便、 快速、 结果准确可靠， 可用于头抱4“ s * t 注射剂的含量测定， 体外杭菌活性的刚定 为临床合理用药提供依据。 关键词: 头袍邃肪钠; 高效液相色谱法; 体外杭菌活性 中图分类号: 8 9 1 7 . 7 9 5 . 1文献标识码: B文章

12、编号: 1 0 0 7 - 7 6 9 3 ( 2 0 0 6 ) 0 1 - 0 0 5 1 -0 3 D e t e r mi n a t i o n o f c e f o t a x i me s o d i u m i n j e c t i o n b y H P L C a n d i n v i t r o a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y a s s a y M A N G B i - m e i , F U J i n g ( D e p a r tm e n t o f P h a r m a c y , G e n e

13、r a l H o s p i ta l o f T i a n j i n M e d ic a l U n iv e r s i ty , T i a n j in 3 0 0 0 5 2 ， C h in a A B S T R A C T : O B J E C T I V E T o e s t a b l i s h a n H P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f c e f o t a x i m e s o d i u m i n j e c t i o n a n d t o i n v e

14、s t i g a t e i n v i t r o a n ti b a c t e r i a l a c ti v i ty . M E T H O D S K r o m a s il C ,$ c o l u m n ( 4 . 6 m m x 2 5 0 m m , 5 L m ) w a s u s e d . T h e M o b i l e 灿a s e w a s m e th a n o l - p h o s p h a t e b u ff e r ( 3 0 : 7 0 , v / v ) , c e f o p e r a z o n e s o d iu m

15、 w a s i n t e r n a l s t a n d a r d , t h e fl o w r a t e w a s l m L m i n 一 a n d t h e d e t e c t io n w a v e l e n g th w a s a t 2 5 4 n m . T h e M I C s f o r d i ff e re n t s t r a i n s w e re d e t e r m i n e d 场m i n o r d i l u t i o n m e t h o d . R E S U L T S T h e li n e a r

16、 r a n g e o f c e f o t a x i m e s o- d i u m w a s 5 一 5 0 w g m L 一 ( r = 0 . 9 9 9 9 , n 二 3 ) . T h e r e c o v e ry w a s 9 8 . 2 %一 1 0 0 . 4 %( R S D w a s 0 . 8 2 % , n = 6 ) . 5 b a t c h e s o f s a m p l e s o f t h r e e d i ff e r e n t p h a r m a c e u t i c a l p l a n t s w e re d

17、 e t e r m i n e d . T h e i r c o n t e n t s a c c o r d e d w i t h C h i n e s e P h a r m a c o p e i a ( 2 0 0 0 ) . T h e r e s u l t s o f M I C s h o w e d t h e d i ff e re n t c li n i c a l s i 脚f i c a n c e . C O N C L U S I O N T h i s m e t h o d w a s p r o v e d t o b e s i m p l e

18、 , a c c u r a t e , 州e k a n d r e li a b l e , c a n b e u s e d f o r d e t e r m i n a t i o n o f c e f o t a x i m e s o d i u m f o r i n j e c t i o n . T h e i n v i t r o a n t i b a c t e r i a l a c t i v i ty a s s a y m a y p r o v i d e b a s i s f o r c li n i c a l d r u g s r a t i

19、 o n a l u t i li z a t i o n . K E Y WO R D S : c e f o t a x i m e s o d i u m ; H P L C ; a n t i b a c t e r i a l a c t i v i ty i n v i t r o 注射用头抱唆厉钠( c e f o t a x i m e s o d i u m ) 又名治菌必妥、 凯福隆， 为第三代头抱菌素， 抗菌谱广， 抗菌活性强， 临床应 用广泛。目 前报道的方法大多采用H P L C 外标法、 紫外分光 光 度 法 “ J 。 本实 验建 立了内 标法 测 定注射用头 抱

20、01 厉钠 含 量的高效液相色谱法并收集市售的三个厂家5 批样品， 测定 该药含量， 并采用微量稀释法对该药体外抗菌活性进行测 定， 为评价医疗用药质量提供实验依据。 1 仪器与试药 美国贝克曼黄金系列通用II 型H P L C 仪( 1 1 0 B 泵， 4 0 6 接口， U V一 1 6 6 检测器， A S T 一 4 8 6 微机系统， 黄金系统软件 6 . 0 版) ， M I C 药敏测试盒( 天津高达新技术研究所) 。 头抱唾厉对照品( 含量9 0 . 6 %， 中国药品生物制品检定 所， 批号: 1 3 0 4 8 3 - 2 0 0 1 0 2 ) ; 头抱呱酮钠( 美国P

21、 f i z e r ， 批号: 2 5 8 3 5 0 1 7 ) 供内 标; 头抱唾肪钠( 珠海联邦制药股份有限公司 中山 分公司， 批号: 0 3 0 9 1 0 0 2 , 0 3 0 9 1 0 0 3 , 0 3 0 9 1 0 0 4 ; 安徽威尔 曼制药有限公司， 批号: 0 3 0 1 0 1 ; 华北制药集团股份有限责任 公司， 批号: 0 3 0 1 0 3 ) ; 甲 醇为色谱纯， 磷酸二氢钾与磷酸氢二 钠为分析纯， 纯化水( 本院制剂室自 制) 。 2 色谱条件 2 . 1 色谱条件色谱柱 K r o m a s i l C ,: 柱( 5 1.t.m , 2 5 0

22、 m m x 4 . 6 m m ) ; 流动相: 甲 醇一 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( 3 0 : 7 0 ) ; 检 测 波 长: 2 5 4 n m ; 流 速: 1 m L m in 一 ; 进样量: 2 0 P ,L 。 在上述条件下头抱噬肪钠与头抱呱酮钠达 到基线分离， 头抱唾肪钠保留时间为5 . 8 9 m i n ， 头抱呱酮保留 时间为9 . 2 0 m i n 。结果见图t o 2 . 2 系统适应性试验 2 . 2 . 1 理论板数 精称头抱唾肘钠对照品适量配制成一定 浓度溶液， 进样， 记录色谱图， 量供试品主成分保留时间t o l .压月且.杯 一。 一 C h i

23、n I M A P , 2 0 0 6 F e b r u a r y , V o l . 2 3 N o . l 图1 H P L C色谱图 F i g 1 H P L C c h r o m a t o g r a m s a . 头袍邃肪钠对照品 b . 头袍噬厉钠样品 1 . 对照品 2 ， 内 标物 a . re f e re n c e o f c e f o t a x i m e s o d i u m b . s a m p l e o f c e f o t a x i m e s o d i u m 1 . ref e ren c e 2 . i n t e r n a

24、l s t a n d a r d 和 半峰 高 宽W h / 2 ， 按n = 5 . 5 4 ( t ,t / W , 2 ) x ， 求得n 二 1 6 6 4 ， 符 合 中国药典2 0 0 0 版规定的理论塔板数按头抱噬肪峰计算不小 于1 2 0 0 的规定。 2 . 2 . 2 分离度定量分析时， 为便于准确测量， 要求定量峰 与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。按R二 2 ( t z - t a l ) / ( W , + 飞 ) 求出R = 3 . 6 , R 1 . 5 ， 内标物与被测物分离 完全， 符合中国药典2 0 0 1) 版规定的分离度应大于 1 . 5的规 定。

25、2 . 2 . 3 拖尾因子为保证测量精度， 应检测待测峰的拖尾 因子T 是否符合各品种项下的规定。拖尾因子T = 叭.05h/ 2 d , ， 由 试验数据得出T = 0 . 9 8 ， 符合中国药典2 0 0 ( 版在0 . 9 5 一 1 . 0 5 之间的规定。 2 . 2 . 4 重复性 精密称取头抱唾厉对照品适量， 稀释定容 中国现代应用药学杂志2 0 0 6 年2 月第2 3 卷第1 期 成1 0 0 L g m L - ， 精密称取头抱呱酮钠适量， 稀释定容成 4 0 0 w g m L 一 ， 取头 抱唾 厉对照 液2 . O m L ， 加人 头 抱呱 酮 钠溶 液0 .

26、5 m L 定容l O m L ， 制 成2 0 L g m L 一 。 连 续 进样5 次。 峰 面积测量值R S D为1 . 6 2 %， 符合中国药典2 0 0 0 版二部关于 R S D不大于2 . 0 %的规定。经过上述系统适用性试验得出结 论: 试验操作系统符合中国药典2 0 0 0 版二部的测定注射用 头抱唾肪钠的条件。 2 . 3 线性关系试验 精密称取头抱唾肪对照品适量， 用纯化水溶解并稀释制 成l o o “ m L 一 的溶液。 精密 称取头 抱呱酮钠适量， 用纯化 水 溶解 并 稀释制 成4 0 0 L g “ m L - 的内 标溶液。 分别取头抱 唾厉对照品溶液0

27、. 5 , 2 . 0 , 3 . 0 , 4 . 0 , 5 . O m L ， 各加0 . 5 m L 头抱 呱酮钠内标溶液， 置l O m L 量瓶中稀释至刻度， 并将此系列溶 液按选定的色谱条件进行测试， 依次进样2 0 W L 。以峰面积 比A i / A s ( 头抱唾厉对照品/ 头抱呱酮钠) 为纵坐标， 头抱唾 厉浓度C为横坐标， 进行线性回归分析， 头抱ol # 在 5 - - 5 0 林 9 . M L - 内 线性关系良 好， 回 归方程A V A s = 0 . 5 4 8 1 C 十 0 . 0 5 1 5 , r 二 0 . 9 9 9 9 ( n 二 3 ) 。 2

28、 . 4 精密度试验 精 密 称取头抱唾肪对照品 适量， 稀释定容成1 0 0 F L g m L 一 ， 精密 称 取头 抱呱 酮钠 适量， 稀释 定容 成4 0 0 W g m L 一 ， 取头抱唾厉对照液1 . 5 , 2 . 0 , 2 . 5 m L 各加人头抱呢酮钠溶液 0 . 5 m L ， 定容l O m L ， 制成1 5 , 2 0 , 2 5 L g “ m L - 溶液， 于同日 内 重复测定6次， 每次间隔l h 。测得R S D分别为0 . 7 0 %, 0 . 8 0 %, 0 . 8 4 % ( n = 6 ) 。 2 . 5 回收率试验 精密称量某一批号已知含

29、量样品 适量各3 份于1 0 m L 量 瓶中， 制 成低、 中、 高三 个浓度， 再分别加人对照品0 . 5 m L ， 定 容l 0 m L 。平行进样2 次， 测得结果见表t o 表1 回收率试验结果( n = 6 ) T a b 1 T h e r e s u l t o f r e c o v e ry t e s t ( n = 6 ) 为( 9 7 . 8 2 士 0 . 8 1 ) %， ( 1 0 1 . 6 土 0 . 7 3 ) %， ( 1 0 3 . 0 土 0 . 2 3 ) %， ( 9 7 . 7 0 士 0 . 9 7 ) %， ( 1 0 0 . 4 土 0

30、 . 8 9 ) %。 2 . 7 体外抗菌活性的测定及结果 为测定本药体外抗菌活性， 采用微量稀释法选用N C C L S ( 美国临床实验室标准化委员会) 2 0 0 3 年规则所规定的标准 菌株大肠埃希菌A T C C 2 5 9 2 2 ， 铜绿假单胞菌A T C C 2 7 8 5 3 测 定药物对常见致病菌大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌的最低抑菌 浓度M I C ( m i n i m a l i n h i b i t o ry c o n c e n t r a t i o n ) 。结果见表2 0 表2 M I C测定结果( n 二 3 ) Ta b 2 批次 T h e r e

31、 s u l t s o f M I C ( n 二 3 ) 大肠埃希菌 A T C C 2 5 9 2 2铜绿假单胞菌A T C C 2 7 8 5 3 W g m L 一 11 9 m L 一 A 0 . ( 万1 6 0口62 ，孟内， 0 . 0 3 -0 . 0 3 0 . 0 6 BCD 已知量 ( W g ) 加入量 ( 林 9 ) 测得量 ( W g ) 回收量 ( 卜 9 ) 回收率 ( %) 平均回收率 ( %) 1 5 . 3 0 5 . 4 0 2 0 . 7 0 5 . 4 0 1 0 0 . 0 5 . 4 05 . 4 2 1 0 0 . 4 E 0 . 0 6

32、6 4 3 讨论 中国药典2 0 0 0 版二部中采用的流动相比例为甲醇一 磷酸 盐缓冲液( 1 1 : 8 9 ) ， 在本实验系统中药品出峰时间较长， 经调 节比 例为甲 醇一 磷酸盐缓冲液( 3 0 7 0 ) 时头抱唾肘和头抱呱 酮的保留时间适宜， 且两者完全分离。选择同为第三代抗生 素的头抱呱酮钠为内标物， 则提示本方法除可测定头抱唾厉 钠含量之外， 也可同时测定头抱呱酮钠含量。经本方法测定 头抱呢酮钠样品的含量均符合中国药典2 0 0 () 版二部关于头 抱邃)q i 钠按无水物计算含头抱唾gt C .6 H n N s O , S z ) 不得少 于8 6 . 0 %; 按平均装

33、量计算含头抱唾肪( C ,6 H n N S 0 7 S Z ) 应为 标示量的9 3 . 0 %一 1 0 7 . 0 %的规定 4 ) 。 根据N C C I S 2 0 0 3 年 规则， 体外抗菌活性进行测定结果表明， 注射用头抱唾肘钠 对大肠埃希菌的抑制作用强于铜绿假单胞菌。本药品对大 肠埃希菌均为敏感， 对铜绿假单胞菌1 / 5 敏感; 3 / 5 中 介; 1 / 5 耐药。提醒广大医 务人员进一步增强病原学观念， 有效延缓 细菌耐药性的增长， 严格掌握适应症， 杜绝抗生素滥用现象， 提高抗生素抗感染疗效。 5 . 4 09 9 . 2 9士0 . 8 2 参考文献 明金兰， 朱

34、会琴. H P L C 法测定头抱嘎厉钠含量【 J . 药物分析 杂志， 2 0 0 0 , 2 0 ( 4 ) : 2 7 1 翟晓波， 顾斌. 注射用头抱ps肪钠与西米替丁注射液在4 种输 液中配伍后的稳定性【 I . 中国临床药学杂志， 2 0 0 3 , 1 2 ( 2 ) 8 6 一8 . 赵宁听， 李忠福. 分光光度法测定头抱唆u钠含量 J . 黑龙 江医药， 2 0 0 2 , 1 5 ( 2 ) : 8 6 - 8 7 . 收稿 日 期: 2 0 0 4 -0 4 - 1 4 一一，一仁 .12 r.LF.L 1 5 . 9 0 2 0 . 4 0 2 1 . 2 0 2 5

35、. 5 0 5 . 4 0 5 . 4 0 2 1 . 3 2 2 5 . 7 3 2 6 . 5 0 3 0 . 8 7 5 . 3 3 5 . 3 0 9 8 . 7 0 9 8 . 1 5 5 . 3 7 9 9 . 4 4 2 6 . 5 0 5 . 4 0 3 1 . 8 5 5 . 3 5 9 9 . 0 7 2 . 6 样品 含量测定 分别精密称取 5个批号的待测样品适量各 3份。置 5 0 m L 量瓶中定容， 分别精密量取2 m l 置 l O m L 量瓶中， 稀释 至头 抱唾 厉 钠浓度为2 0 l ,g m L 一 ， 再分别加人精密量取的 头 抱呱 酮 溶液2 0 N .g - m L - 。 按内 标法求其含量， 结果分别 3 中国现代应用药学杂志2 0 0 6 年2 月第2 3 卷第1 期C h i n J M A P , 2 0 0 6 F e b r u a r y , V o l . 2 3 N o . l 5 3