浏阳霉素亚慢性毒性与氧化损伤的实验研究.pdf

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1、2 3 4 实用预防医学2 0 0 4 年4 月第I 1 卷第2 期P r a c t ic a l P r e v e n t iv e Me d i c in e , A p r . 2 0 0 4 , V o l 1 1 , N o . 2 文章编号: 1 0 0 6 一 3 1 1 0 ( 2 0 0 4 ) 0 2 一 0 2 3 4 一 0 4 【 论著 】 浏阳霉素亚慢性毒性与氧化损伤的实验研究 张洪霞， 钟才高， 安飞云，曾明， 高泽宣， 刘新民 摘要: 目 的 探讨浏阳 霉素( L i u y a n g m y c in ) 亚慢性毒性与氧化损伤的定量敏感指标和毒作用靶器官

2、。 方法 将 健康S D 大鼠 随机分成5 个组， 每组2 0 只， 雌雄各半。 根据急 性毒性试验结果， 分别设4 0 , 2 0 0 , 1 0 0 0 m g / 吨. b w三个浏阳 霉 素 染 毒 组( 即 低、 中、 高 剂 量 组) 、 空白 对 照 组与 溶 剂 对照 组。 给大鼠 每天 灌胃 染毒1 次， 每 周6 天， 连 续3 个月， 每天 观 察动物进食、 饮水、 活动、 毛发、 大小便和常见临床症状， 动物的体重和食物消耗量每周测定 1 次， 血象指标和尿液生化指 标在试验前后各测定1 次， 试验结束时测定血液生化指标、 脏器系数和血液、 肝脏、 肾脏组织氧化损伤等指

3、标， 所有受试动 物实施大体解剖检查， 其中高剂量组和对照组的主要器官组织以及其他组具有肉眼可见异常的器官组织进行病理组织学 检查。结果浏阳霉素染毒组动物器官组织病理学、 体重增长率和食物消耗量未见明显异常; 高剂量组部分动物在染 毒后期出现萎靡、 毛发缺乏光泽、 行为活动明显减少等现象。与空白对照组和溶剂对照组比较， 中、 高剂量组谷丙转氨酶 ( A L T ) 活性与尿液丙二醛( MD A ) 含量明显增加( P 5 0 0 0 m g / k g . b w ) ， 浏阳霉素低、 中、 高剂量染毒组剂量依次为4 0 , 2 0 0 , 1 0 0 0 m g / k g . b w 。每

4、天染毒 1 次， 每周6 天， 连续3 个月。 每天观察动物的一般毒性反应， 食物消耗量与体重每周测量 1 次。 1 . 2 . 2 检测指标 1 . 2 . 2 . 1 尿酶、 尿蛋白检测实验结束时， 从每组2 0只动物 中分别随机抽取 1 0只动物进行尿酶、 尿蛋白检测。采用粪尿 分离器收集试验动物当晚2 0 : 0 0至次日5 : 0 0的 1 2 h 尿液， 收 集期间， 禁食， 自由饮水， 尿样收集后， 用尿液试剂盒测定尿蛋 白、 尿肌醉、 乳酸脱氢酶( L D H) , r - L 一 谷氨酞转肤酶( r -G T ) , N 一 乙酞一 份 1 ) 氨基葡萄糖昔酶( N A G

5、) . 1 . 2 . 2 . 2 血液生化指标实验结束时， 股动脉采血， 用美国康 仁M 5 6 0 型自 动生化分析仪测定尿素氮( B U N ) 、 肌配( C r ) 、 胆固 醇( C H O L ) 、 胆红素门B i l l ) , 葡萄糖( G L U) 、 总蛋白( T P ) 、 白蛋 白( A L B ) 、 谷丙转氨酶( A L T ) 、 谷草转氨酶( A S T ) 、 碱性磷酸酶 ( A L P ) o 1 . 2 . 2 . 3 血象指标实验前和试验结束时采集血液， 用日 本 F C - 1 1 0 0 型全自动血球计数仪， 测定红细胞( R B C ) 、 血

6、红素 ( H b ) 、 白细胞( WB C ) 、 血小板( P L T ) 数以及白细胞分类。 1 . 2 . 2 . 4 脏器系数大体解剖肉眼观察各组织器官的变化， 称肝、 肾、 心、 脾、 肺、 脑等主要脏器湿重， 计算脏器系数， 脏器系 数= 脏器湿重( g ) / 体重( g ) x 1 0 0 0 1 . 2 . 2 . 5 氧化损伤检测从每组2 0 只动物中分别随机抽取 1 0只动物， 每只动物各取肝、 肾组织0 . 1 g ， 放人小烧杯， 加人1 0 2 结果 2 . 1 一般性指标实验观察发现， 染毒初期， 各组动物进食、 饮水、 活动、 大小便与呼吸情况等方面均无异常发

7、现。染毒后 期， 中、 高剂量组部分动物被毛杂乱， 失去光泽。高剂量组动物 肝脏系数明显大于空白对照组和溶剂对照组( P 0 . 0 5 ) ， 浏阳 霉素染毒组动物体重增长率、 食物消耗量、 组织病理学等指标 与空白 对照组和溶剂对照组比较未见明显差别， 见表1 , 2 , 3 0 表I 浏阳.素对动物体皿增长率的影响( 于土、 ) 组别 动 物数 ( 只) 染毒前体重 ( 只 ) 不同 染毒 期体 重 增长 率0 % ) I 月末2 月末3 月末 空白对照2 0 1 1 1 . 1 2 士9 . 1 9 8 5 . 8 9 士 5 . 5 7 1 1 3 . 5 7 土 9 . 2 0 1

8、 5 3 . 3 6 士 8 . 0 6 溶剂对照 2 0 1 1 1 . 8 4 士8 . 4 6 8 1.6 0 士5 . 8 3 1 2 4 . 3 7 士1 1 . 的 1 5 1 . 0 2 士1 1 . 1 9 4 0 m g 1 嗽b w 2 0 1 1 0 . 6 4 士 7 . 6 8 8 1.3 4 士7 . 4 8 1 2 3 . 4 8 士1 0 . 8 8 1 4 9 . 9 9 士1 1 . 5 2 2 0 0 耐 嗽. b w 2 0 1 1 1 . 9 6 1 6 . 8 6 8 0 . 4 3 土6 . 0 0 1 1 3 . 0 8 士6 . 8 8 1 3

9、 5 . 4 7 士9 . 0 6 1 0 0 0 耐 砍. b w 2 0 1 0 6 . 8 6 士 8 . 2 3 6 8 . 8 2 士7 . 1 4 1 1 9 . 5 3 士1 0 . 2 1 1 5 0 . 2 5 士8 . 8 0 表 2 浏阳扭素对动物食物消耗:E的影响( 牙土、 ) 组别 动物数 ( 只) 不同 染毒 期 食物 消 耗量( W / k q . d ) 染毒 前1 月末2 月末3 月末 空白对照2 0 1 5 5 . 9 4 + 3 5 . 8 5 1 2 6 . 8 4 11 9 . 6 9 1 2 3 . 5 2 +1 8 . 4 5 1 0 8 . 6

10、0 士1 6 . 0 4 溶剂对照2 0 1 5 4 . 7 5 士 2 9 . 7 3 1 1 8 . 7 0 士1 6 . 1 9 1 1 0 . 5 5 士1 6 . 3 3 1 1 0 . 0 3 +1 9 . 0 3 4 0 m v j 掩. b w 2 0 1 5 0 . 4 0 士 4 1.1 7 1 0 5 . 6 1 士 4 0 . 5 0 1 2 7 . 2 7 土 2 4 . 6 7 1 0 8 . 0 7 士1 9 . 3 6 2 0 0 m * d 狱. b w 2 0 1 5 2 . 2 1 士 4 5 . 6 8 1 1 5 . 4 6 士 2 8 . 5 1 1

11、 2 5 . 0 0 士 2 8 . 0 0 1 1 7 . 7 3 士2 3 . 9 9 1 0 0 0 耐 橄肠2 01 3 8 . 7 9 士 3 3 . 1 4 1 1 3 . 9 1 士 3 0 . 4 7 1 2 6 . 4 8 士 3 4 . 5 0 1 1 3 . 1 7 士1 7 . 1 6 表3 浏阳尽素对动物脏器系数的影响( 牙士 、 ) 动物数脏器系数 到1 力IJ一 ( 只)肝肾心脾肺脑 空白对照2 0 3 . 0 9 士 0 . 8 4 0 . 7 6 士 0 . 1 8 0 . 3 6 士叮1 . 0 8 0 . 3 6 士0 . 0 7( ) 6 4 士 于 5

12、 0 . 4 5 士 0 . 0 5 溶剂对照2 0 2 . 9 6士 0 . 4 6 0 . 7 3 士 0 . 1 3 0 . 3 4 士0 . 0 5( ) 4 5 士 0 . 1 8 0 . 6 7 士 0 . 1 5 0 . 4 5 土 0 . 0 9 4 0 n 司 橄. 6 w2 0 2 . 6 4 1 0 . 8 0 0 . 7 7 ! 0 . 1 3 0 . 3 3 10 . 0 7( )3 8 10 . 2 1 0 . 6 8 10 . 1 7 0 . 4 3 1 0 . 1 1 7 2 0 0 n/ 味 6 w2 0 3 . 0 4 士 0 . 5 6 0 . 6 9 i

13、 0 . 1 1 9 0 . 3 7 士0 . 0 7 0 . 4 0 10 . 1 5 0 . 6 9 士0 . 1 6 0 . 5 0 士 0 . 0 9 1 0 0 0 wj 味 阮2 0 3 . 2 4 1 0 . 5 7 - h 0 . 7 1 士 0 . 1 0 0 . 3 7 土 0 . 0 8 0 . 4 2 士 0 . 2 4 0 . 6 9 士 1 1 . 2 0 0 . 4 8 士 0 . 0 9 注: 数字右上角a : 与空白对照比较， P 0 . 0 5 ; b . 与溶剂对 明比较, P 0 . 0 5 , 万方数据 2 3 6实用预防医学2 0 0 4 年4 月第

14、1 1 卷第2 期P r a c t ic a l P r e v e n t iv e Me d ic in e , A p r . 2 0 0 4 , V o l 1 1 , N o . 2 2 . 2 血象、 血液与 尿液生 化指标中、 高剂量组血清谷丙转氨 酶( A L T ) 活性明显高于空白对照组和溶剂对照组( P0 . 0 5 ) ; 其余各项指标未见明显异常， 见表4 , 5 , 6 0 2 . 3 氧化损伤指标与空白对照组和溶剂对照组相比较， 中、 高剂量组尿液MD A含量明显升高( P 0 . 0 5 ) ; 各剂量组肾脏 组织S O D活性明显降低( P0 . 0 5 )

15、 ， 并呈一定效应关系; 肝、 肾、 血液R O S 含量未见明显差别， 见表7 , 8 , 9 0 表4 浏阳.素对动物血液生化指标的影响( 二士、 ) 生化指标空白对照( n =2 0 )溶剂对照( n = 2 0 )4 0 n 词橄. b w ( n = 2 0 )2 0 0 m g / 掩. b w ( n = 2 0 ) 1 0 0 0 m g / 吨. b w ( n = 2 0 ) 13 U N ( n u i ro l / I )6 . 0 5士1 . 3 16. 0 3士 1 . 4 0 6. 2 6士1 . 5 27 . 0 5士2 . 9 75 . 驯】 士0. 9 1

16、C r ( p i n o l/ 1 ) 41.3 8士7. 6 23 9 . 6 6+4. 814 1 . 1 2士6 . 6 741 . 0 3士6. 1 63 9 . 1 3士5 . 7 3 G L U ( i n n x i l/ L )5. 3 6士 1 . 3 65. 3 2士l . 引)4. 8 9士 1 . 7 35. 4 7士 1 . 1 45 . 7 9士0 . 8 6 C H O L ( mmo l/ L )61+0. 311 . 4 7士0. 2 61 . 4 8士0. 2 21 . 3 7士0. 2 81 . 5 6士0. 1 6 T B i l i ( lu r w

17、 l / L ) 1 . 9 7士0 . 6 41 . 7 4士0 . 5 52. 01士0. 5 72. 1 3士0. 9 52. 21士 1 . 3 0 T P ( R / L 6 4. 0 5士5. 1 86 4. 3 6士4. 6 06 5. 9 0士5. 5 861 . 8 6士7. 0 561 . 0 3士5 . 2 6 A L B ( 对L 3 7. 5 8士7. 2 83 5. 7 2士6. 5 63 4. 4 7士6. 3 83 6. 61士7. 4 73 9. 1 2士7. 2 4 A L T ( U / I ) 3 6. 6 3士9 . 1 93 9. 5 9士 1 2.

18、 7141 . 0 3土 1 2. 6 34 8 . 7 8 士1 7 . 7 8 - h4 7 . 8 7 士1 8 . 7 8 n b A S l ( U I I )日 1 . 0 6士2 8 . 2 3 A L l ( U / I ) 1 3 2. 7 4士6 4. 9 4 1 1 7 . 6 6士3 9 . 4 3 1 5 8. 3 5士9 8 . 0 9 1 1 2. 8 9士4 0 . 1 1 1 2 2. 8 8士5 6. 8 1 1 1 3 . 6 4士4 4. 8 3 1 1 9. 3 7士6 3. 1 3 1 2 5. 0 5士4 2. 1 1 1 3 9. 4 8土5 1

19、 . 1 9 注: 数字右上角a ; 与空白 对照比较， P 0 . 0 5 ; b : 与溶剂对照比较， P 0 . 0 5 0 表5 浏阳扭寮对血象指标的影响( 妥士、 ) 组别动物( 只)R I X . ( x 1 0 1 2 / 1 )H b ( 刁L )P L T ( x 1 0 9 / L ) WB C ( x 1 0 9 / L ) W 一 S ( %) WB C分类 W一M( %)W一L ( %) 空白对照2 07. 3 2士0 明1 7 3. 9 5士 1 5. 5 52 5 9. 6 0士6 9. 2 4 1 1 . 1 2士2. 6 96 6 . 4士1 1.71 0.

20、2 3士5. 72 3. 3 士8. 9 溶剂对照2 07. 1 3士1 . 2 46 1 ) 士2 5. 1 02 5 6 . 2 5 士6 2 . 1 8 1 1 . 6 3土3 . 9 26 9. 1士 1 0. 79. 0士4. 021.9 士8. 8 口广7 乙nl.卜 目.孟 4 0 n 词k g . 腼 2 07. 51士0. 6 84 5士6. 酬】3 0 6 . 8 0士6 9 . 2 2 9 . 7 8士3 . 2 86 7. 8士9. 09. 8士4. 02 2 . 4 士7 . 5 2 0 0 m g / k g . b w 2 吸 】7. 6 2士0. 9 71 7

21、3. 驯】 士 1 9. 9 7 3 0 2 . 3 0士9 3 . 8 3 1 1 . 0 0士2 . 6 76 5 . 2士 1 2. 89. 7士4.2 5. 1 士1 0 . 8 1 0 0 0 n 司k g . b w 2 07 . 5 7士0 . 7 31 7 1 . 3 5士1 1 . 3 32 6 7 . 3 5士9 9 . 4 5 1 0 . 8 5士2 . 5 16 4. 4士 1 0. 29. 1士4. 9 2 6 . 5士9 . 1 衰6 浏阳.紊对尿液生化指标的影响( x士 、 ) 组别动物数( 只) 尿液生化指标 L D H ( U / t t v n o l .

22、C r )N A G ( U / m mo l . C r ) Y 一 G T ( U / g . p ro t ) 空白对照1 01 4 2 . 7 0士2 6 . 4 84. 0 4土0. 5 81 8士9 9 . 8 7 尿蛋白( g I L ) 0 . 4 8士0. 1 1 Ulj弓了 ，.几0护 内J， 溶剂对照 1 01 2 6 . 8 8士2 6 . 3 73 . 9 9士0 . 6 96 2士4 0. 4 40. 6 0士0. 0 7 4 0 n 回橄. b w 1 01 5 3 . 4 8 12 8 . 8 73. 4 7士0. 1 90 7士8 4 . 5 0 0. 3 5

23、士0. 0 7 2 0 0 n 侧k g . 6 w 1 0 0 0 n 叨橄. b w 1 0 ( 0 1 9 0 . 7 0士2 4 . 3 5 1 6 6 . 3 9士2 0. 7 1 2 . 9 4土0 . 3 12 03 . 6 7士3 4. 9 20. 6 4士0. 0 9 3 . 6 3士0 . 5 21 9 7 . 5 5 士4 7 . 8 80 . 5 0士0 . 0 4 万方数据 实用预防医学 2 0 0 4 年4 月 第 1 1 卷第2 期P r a c t ic a l P r e v e n t iv e Me d ic i n e , A p r . 2 0 0 4

24、 , V o l 1 1 , N o . 2 2 3 7 裹 7浏阳祥素对肝脏、 肾脏、 血液、 尿液中MD A含f的影响( s1 S ) MA含 量 动 物 数 ( 只) 肝脏肾 脏而 液屎 访 ( m 动m g p m t ) ( n m o ll n ig p m t ) ( n m o ll m l)( 朋 1 刃 a 空 白 对 照1 0 6 . 1 2 士 1 . 0 7 4 . 5 4 士 0 . 3 7 5 . 5 9 士 0 . 3 4 3 . 2 1 士 1 加 溶 剂 对 照1 0 4 . 6 2 1 0 . 3 5 4 . 1 8 1 0 . 2 1 T 7 0 t 1

25、 . 4 6 5 . 4 1 + 0 . 8 9 叨 喇掩泳1 0 5 . 5 7 士 0 . 5 5 4 . 1 2 士 0 . 2 5 6 . 7 6 士 0 卯4 . 7 0 士 0 . 7 2 2 0 0 喇k g . 肠1 0 5 . 8 9 1 0 . 5 0 3 . 9 3 1 0 . 1 2 6 . 5 0 1 0 . 4 0 9 . 8 5 1 1 . 6 4 “ 6 I O O O n tg l k g . b w 1 0 4 . 4 4 1 0 . 6 0 4 . 0 5 1 0 . 3 2 5 . 4 2 + 0 . 2 9 9 . 7 5 1 1 . 6 3 “ b

26、注: 数字右上角a : 与空白 对照比较， P 0 . 0 5 ; b ; 与溶剂对照比较， P 0 . 0 5 0 裹8 浏阳.景对肝脏、 肾脏、 血液中S O D活性的影响( .r 士 * ) 峨) ) 活性 组别 动 物数 ( 只) 血液 肝脏肾脏血 访 ( N U l m g p o t ( N U l n g p t o t( N U I 耐) 空白对照3 1 . 4 7 14 . 3 5 1 0 1 . 9 2 13 . 2 9 3 6 3图 士 7 1 . 5 3 溶剂对照3 7 . 7 7 1 I . 即 1 1 1.4 5 士 2 . 9 2 3 3 2 . 的 1 5 4

27、. 8 9 3 2 1 3 4 . 4 3 2 5 士 4 7 . 2 5 n钊/ 3734 4 0 m g/ 橄 . b w2 8 . 8 6 1 3 . 3 4 2 0 0 喇喊 . 阮1 03 6 . 9 3 1 4 . 5 1 9 2 . 0 1 1 2 . 8 5 汕 9 7 . 3 4 + 4 . 0 9 b 1 0 0 0 m g / k g . b w 1 0 4 0 . 3 3 1 5 . 6 9 8 1 . 5 9 1 3 . 4 8 “ b 3 5 6 . 8 3 士 1 4 . 5 8 注: 数字右上角a : 与空白 对照比较， P 0 . 0 5 ; 6 ; 与溶剂对

28、照比较， P 0 . 0 5 0 衰9 浏阳.紊对肝脏、 肾脏、 血液中R O S 含，的影晌( S士 、 ) 危害不容忽视。目 前国内外尚无浏阳霉素慢性毒性研究资料， 因此探讨浏阳霉素对人体健康的潜在性危害具有重要意义。 血清转氨酶变化是反映肝细胞损害的重要指标之一， A L T 与A S I 、 主要存在于肝脏细胞内， 当细胞损害或死亡时， 逸出肝 细胞膜， 进人血液循环而使血清水平升高。 浏阳 霉素中、 高剂 量组血清A L T升高， 高剂量组肝脏脏器系数增大， 但其组织病 理学检查未见明显改变， 表明浏阳霉素在一定剂量水平引起肝 脏功能性改变早于器质性改变。 近年来研究发现氧化损伤是许

29、多环境化学毒物引起机体危 害的 机制之一 5 .6 1 。 外来化学毒物进人机体后， 可使体内 活性氧 族( R O S ) 生成增多或使体内抗氧化酶清除活性氧能力降低或体 内生物分子损伤后的修复能力减弱， 继之导致生物机体组织细 胞损伤。本次实验中， 浏阳霉素未见引起肝、 肾及血液中R O S 明显增多现象， 可能通过影响生物体内的酶性抗氧化系统而导 致氧化损伤。超氧化物歧化酶( S O D ) 是生物机体酶性抗氧化系 统中的重要酶类， 它具有歧化超氧阴离子( 吓 ) 生成 H 2 O z 和 q 的能力， 其化学本质是一种蛋白质， 含有金属辅基及其活性 成分， 易受外来化学毒物的攻击而受到

30、损伤， 故该酶活性降低亦 可以反映外来化学毒物对机体的氧化损伤作用。浏阳霉素在 4 0 m 创 掩. b w及其以上染毒水平， 肾脏S O D活性明显降低， 并存 在一定剂量一 效应关系， 在中、 高剂量组尿液 M D A含量明显增 高， 而肝脏与血液的MD A含量未见显著改变， 表明浏阳霉素可 能对肾脏具有氧化损伤作用。值得提出的是， 肝、 肾、 血液中 S O D , M D A与R O S 指标之间未见明显联系; 另外， 浏阳霉素高 剂量组血液中R O S 降低， 其原因有待进一步研究。 本次实验表明， 血清 A L I ， 活性、 尿液 M D A含量和肾脏 S O I 活性可作为评价

31、浏阳霉素亚慢性毒性与氧化损伤的定量敏 感指标， 肝、 肾可能是浏阳霉素的主要毒作用靶器官。 R ( 6含量 组别 动物数 ( 只) 肾脏 肝脏肾 胜血 访 血液 ( U / r rg p r o t ) ( U m g p ro t 参考文献 ( Ut n l ) 空白对照9 . 7 1 1 0 . 6 3 2 1.4 0 11 . 0 2 6 4 1 . 8 5 士 9 . 6 7 溶剂对照 9 . 4 8 1 0 . 8 9 2 3 . 4 1 11 . 2 1 5 8 9 . 6 4 1 2 5 . 9 3 4 0 m g 1 蚊. 肠9 . 4 9 1 0 . 5 4 2 3 . 2

32、7 11 . 2 65 6 7 . 9 4土3 1朋 2 0 0 m gJ 掩 . b w 1 09 . 7 9 1 0 . 9 9 2 2 . 2 7 士1.2 95 5 4 . 7 3 13 1 . 8 4 1 0 0 0 司橄 . b w 1 01 1 . 8 5 1 1 . 3 6 2 0 . 9 3 土 0 . 8 5 2 7 7 . 0 8 士 4 2 . 3 4 - b 注: 数字右上角a:与空白 对照比较， P 0 . 0 5 ; 6 : 与 溶剂对照比较， P 0 . 0 5 6 ( 4 ) : 2 3 5 一 4 7 . ( 收稿日 期: 2 0 0 4 一 0 2 一 0 6 ) 万方数据