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1、J. of Chinese Microcirculation Jun. 2006，Vol. 10， No. 3 作者单位： 210002 江苏南京， 解放军南京军区南京总医院中西 医结合科 第一作者简介： 赵智明 （1979-） ， 男， 呼和浩特人， 硕士。从事中 西医结合心血管疾病基础和临床研究。 文章编号： 1007-8568 （2006） 03-0190-03实验研究 溶血磷脂酸对新生大鼠心肌成纤维 细胞分泌 NO、 ET 和 TGF1 的影响 赵智明， 蔡 辉， 郭郡浩 【摘要】 目的 探讨溶血磷脂酸 （LPA） 对新生大鼠心肌成纤维细胞 （CFs） 分泌内皮素 （ET） ， 一氧
2、化氮 （NO） 和转化生长因子 1 （TGF1） 的影响。方法 采用胰酶消化法和差素贴壁法获取 CFs， 用放 射免疫分析法、 硝酸还原酶法和酶联免疫吸附测定法 （ELISA） 分别测定不同条件下培养的 CFs 培养液 上清液中的 ET、 NO 和 TGF1 水平。结果 在给定浓度范围内溶血磷脂酸可以按剂量依赖的方式抑制 CFs 分泌 ET 和 TGF1 （P 0. 05） 。结论 溶 血磷脂酸可以剂量依赖性抑制新生大鼠 CFs 分泌 ET 和 TGF1， 对 NO 合成无显著影响， 从而改变 ET 与 NO 相对关系。溶血磷脂酸可以通过影响 CFs 分泌的生物活性物质改变局部内分泌平衡， 可
3、能间接 抑制心肌纤维化。 【关键词】 溶血磷脂酸； 内皮素； 一氧化氮； 转化生长因子 1； 心肌成纤维细胞 中图分类号： Q545 + . 1 文献标识码： B Effects of Lysophosphatidic Acid on the Production of ET，NO and TGF 1in Myocardial Fibro- blasts in Neonate Rats ZHAO Zhi-ming，CAI Hui，GUO Jun-hao. Dept. of Combined Western and Chinese Medicine，General Hospital of Nan
4、jing Military Command，Nanjing 210002，China 【Abstract】 Objective To investigate the effects of lysophosphatidic acid on the production of ET, NO and TGF1 in cardiac fibroblasts ( CFs) in neonate rats. Methods CFs were isolated by trypsin digestion method, the changes of ET, NO and TGF1 production fro
5、m CFs were examined by radio immunoassay, ni- trate reductase-dependent assay and by enzyme linked immunosorbent assay( ELISA) , respectively. Results LPA( 1 10 -9 - 1 10 -6 mol/ L) decreased ET and TGF1 synthesis in a concentration-dependent manner ( P 0. 05。 讨 论 心肌纤维化是压力负荷增加左室肥厚的重要 病理学特征， 可以使心肌硬度增
6、加， 顺应性下降最 终导致心力衰竭。CFs 是心肌纤维化的主要效应细 胞， 其增殖及产生的胶原代谢平衡失调是心肌纤维 191 J. of Chinese Microcirculation Jun. 2006，Vol. 10， No. 3 化的主要病理基础。内源性神经内分泌因子激活 参与心肌纤维化的发生过程。CFs 具有合成分泌 ET、 NO、 TGF1 等多种生物活性物质的能力 3， 4。 虽然 CFs 分泌的细胞因子不是血清中细胞因 子的主要来源， 但是在心脏局部， 尤其在细胞外间 质及心肌胶原网代谢过程中 CFs 所分泌的细胞活 性物质就是不可忽视的重要因素了。所以通过体 外实验研究其分泌
7、相关因子的作用可以了解 CFs 受到外界刺激因素作用后局部细胞因子的分泌情 况， 对于体外研究细胞作用有积极意义。了解细胞 分泌细胞因子的能力强弱以及相关刺激因素是否 可以刺激或抑制特定细胞因子分泌有助于进一步 探讨刺激因素对细胞功能的影响。 ET 与 TGF1 是公认的促 CFs 增殖的细胞因 子， NO 具有抑制 CFs 增殖的作用。LPA 是一个具 有多种生物学功能的活性物质 5， 6， 对 CFs 的增殖、 移行、 基质胶原网代谢以及分泌细胞因子等功能都 有作用， 其生物学功能与生物种属、 细胞类型、 及其 表达 LPA 受体亚型有关， 但是有 LPA 与 CFs 分泌细 胞因子关系尚
8、不清楚。 ET、 NO 和 TGF1 对心血管系统有重要作 用 7， 8， 与心肌纤维化的发生、 发展有密切关系。结 果显示， 对照组 CFs 能分泌 ET、 NO、 TGF1， 与文献 报道结果一致。本实验结果显示 LPA 对 CFs 分泌 ET 和 TGF1 的能力有抑制作用， 且抑制能力随浓 度的升高而增强。 NO 作为一种重要的抑制纤维化的活性物质， 虽然也受到一定程度抑制， 也有随 LPA 浓度改变而 改变的趋势， 但是低浓度 LPA 对 NO 的抑制作用无 统计学意义 （P 0. 05） 。提示 LPA 对抑制纤维化 的 NO 合成并无明显抑制作用。 在心血管系统， LPA 可以通
9、过激活 MAPK 途径 促进血管平滑肌细胞增殖， 在低浓度下抑制平滑肌 细胞移行， 通过激活细胞外信号调节激酶 （extra cel- lular signal regulated kinase，ERK） 促进细胞移行和 增殖诱发动脉粥样硬化。虽然 LPA 作为一种重要 的细胞丝裂原素， 可以促进多种细胞增殖， 但是越 来越多的研究表明 LPA 的作用非常多样化， 不仅仅 可以促进细胞增殖还可以抑制细胞增殖及胶原合 成 9 11。 本试验研究发现 LPA 对促 CFs 增殖的细胞因 子 ET、 TGF1 合成分泌有明显的抑制作用， 对抑制 CFs 增殖的 NO， 在低浓度下无明显抑制作用。提示
10、 LPA 可能通过抑制促细胞增殖因子而间接影响细 胞增殖， 关于 LPA 可以通过抑制促 CFs 增殖的细胞 因子而达到抑制 CFs 增殖的具体机理需要进一步 研究。 参 考 文 献 1 MacKenna D， Summerour SR， Villarreal FJ. Role of mechanical fac- tors in modulating cardiac fibroblast function and extracellular matrix synthesis J . Cardiovasc Res. 2000 ， 46 （2） ： 257 263 2 Long CS，Brown
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15、s TGF-beta-mediated stimulation of type 1 collagen mRNA stability via an ERK-dependent pathway in dermal fibroblasts J . Matrix Biol. 2004， 23 （6） ： 353 361 11 Kim DS，Park SH，Kim SE， et al. Lysophosphatidic acid inhibits melanocyte proliferation via cell cycle arrest J . Arch Pharm Res. 2003， 26 （12） ： 1055 1060 12 Huang JS，Crilly KS，Kiss Z.Ethanol enhances the stimulatory effects of lysophosphatidic acid on DNA synthesis but not cell prolif- eration in human and mouse fibroblasts J . 1：Arch Biochem Bio- phys. 2000， 381 （2） ： 328 334 （收稿： 2006 -03 -20 修回： 2006 -05 -09） 291