火把花根片对哮喘大鼠气管平滑肌细胞L型钙通道的作用.pdf

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1、7 9 2 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 4 J u 1 ; 2 0 ( 7 ) ; 7 9 2 - 6 火把花根片对哮喘大鼠气管平滑肌细胞 L型钙通道的作用 程仕虎， 罗雅玲， 赖文岩， 史亮， 罗亮 ( 第一军医大学南方医院呼吸科， 广东 广州 5 1 0 5 1 5 ) 中国图书分类号:R - 3 3 2 ; R 2 8 2 . 7 1 ; R 3 2 2 . 3 3 ; R 3 2 9 . 2 4 ; R 3 4 8 . 2 ; R 5 6 2 . 2 5 0 . 5 3

2、 ; R 9 7 4 . 3 文献标识码; A 文章编号: 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 4 ) 0 7 一 0 7 9 2 一 0 5 摘要: 目的探讨火把花根片对哮喘大鼠气管平滑肌细胞L 型钙通道 L - t y p e c a l c i u m ( L - L . . ) c h a n n e l 的作用。方法 将6 Wi s t a r 大鼠分为正常对照组、 哮喘组、 火把花根片 ( H u o b a h u a g e n t a b l e t , H B T ) 治疗组及地塞米松( d e x a m e t h a - s o n e , D X M

3、 ) 治疗组共4 组， 分别给予相应的处理， 观测大鼠 支气管平滑肌细胞 L - L c 。 在正常时， 哮喘发作时， 以及给予 H B T 及D X M治疗后的变化。结果火把花根片治疗后的 哮喘大鼠的L - L c 。 与哮喘组以及正常对照组大鼠通道开放概 率相比 差异均有显著性( P 0 . 0 5 ， F i g 3 ) 。 2 . 3 哮喘大鼠气管平滑肌细胞 L - L c e 开放概率的 改变 哮喘大鼠 组与正常对照组相比L - L c 。 的活动 增强， 通道开放的概率( P O ) 增加。当钳制电压为0 m V时， L - L c 。 的P O 值从0 . 0 8 4 5 土 0

4、 . 0 2 8 增至0 . 1 4 4 4 土 0 . 0 6 4 ( n = 2 4 , P 0 . 0 5 ) ; 而关闭时间短成分( : 。 。 ) 和长成分( T 2 ) 均缩短( P 0 . 0 5 ) ， 结果显示火 把花根片对哮喘大鼠 气管平滑肌细胞L - L c ， 的电导 无明显影响( F i g 3 ) o 2 . 5 . 2 地塞米松对哮喘大鼠气管平滑肌细胞L - L c e 的作用哮喘组L - L c 。 的电导为( 2 3 . 5 土 2 . 1 ) p S , 地塞米松组为( 2 2 . 5土 2 . 3 ) p S , ( n = 1 3 , 尸 0 . 0 5

5、 ) ， 结果显示地塞米松对哮喘大鼠气管平滑肌 细胞L - L c 。 的电导无明显影响( F i g 3 ) . 2 . 5 . 3 火把花根片对L - L c . P o 的影响火把花根 片使哮喘大鼠气管平滑肌细胞L - L . P O 显著降低。 当钳位电压为0 M v时， P O与哮喘组相比差异有显 著性。哮喘组0 . 1 4 1 t 0 . 0 6 6 ; 火把花根片组0 . 0 6 7 土 0 . 0 3 3 ， ( n = 2 5 ， F= 6 . 3 8 1 ， t = 3 . 7 9 8 ， P 0 . 0 5 , F i g 4 D ) 。火把花根片能逆转 哮喘大鼠L -

6、L c 。 通道动力学的改变。 A: a s t h ma r a t sB : c u r e w i t h h u o b a h u a g e n C: c u r e wi t h DXMD : n o r m a l c o n t r o l g r o u p 0 .5 p A I 1 0 0 m s F i g 2 R e c o r d i n g s o f L “ L c , c u r r e n t s o f a s t h m a r a t s ( E h is + 7 0 m V; E c i s 0 m V; D o w n w a r d d e fl

7、 e c t io n i n d i c a t e s o p e n i n g ) A ; R e c o r d in g s L - L C . c u r r e n t s o f a s t h m a r a ts ; B ; R e c o r d i n g s L - L C . c u r r e n t s o f a s t h m a r a t s t h a t w e re c u r e d w it h h u o b a h u a g e n t a b l e t ; C ; R e c o r d i n g s L - L C d c u

8、r r e n t s o f a s t h m a r a t s t h a t w e re c u r e d w i t h D X M; D ; R e c o r d i n g s L - L c , c u r r e n t s o f n o r m a l c o n t ro l g r o u p 万方数据 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 4 J u t ; 2 0 ( 7 ) 7 9 5 令 A t h m e .Hu o b h DXM F i g

9、 3 E f f e c t o f h u a b a h u a g e n t a b l e n t o n L - L c , 160刚12010080604020刁 的uo一1.osqo0oq任二N 们n六引户户U n入Zn斗2 suo一1目奋osqoJOJ0q任nN tCU n丫， ，J 0 2 . 0 4 . 0 2000806040200 C价 20008060 仍u0ll月AU的qo nnUO 4， 如0OqujnZ F i g 4 A m p l i t u d e h i s t o g r a m s o f c o n t rol a n d u n t re a

10、t e d ma c o n t ro l g r o u p, t a b l e t s g ro u p g r o u p, t r e a t e d a s t h - wi t h a n d a s t h m a c o n t rol g rou p t r e a t e d w i t h D X M res p e c t i v e l y . F ig 4 A , B , C 分别为正常对照组、 哮喘组、 哮喘 大鼠H B T治疗组、 哮喘大鼠D X M治疗组的通道开 放数目一 幅度图， 记录的细胞数均为1 2个， 在开放 的幅度相同， 记录的时间相同的情况下，

11、开放的数目 多少反映了开放的概率。从图中可看出哮喘组开放 概率最高， H B T及 D X M治疗使哮喘大鼠气管平滑 肌细胞I - L c , P o 减少。当E h 为+ 7 0 m V , E e 为0 m V 时， 正常对照组为0 . 0 8 4 5 士 0 . 0 2 8 ， 哮喘组为0 . 1 4 4 4 士 0 . 0 6 4 ， 两组 P O比较差异有显著性， 使用 H B T及 D X M治疗后的P O 与哮喘组相比 差异有显著性。 3 讨论 支气管哮喘是由嗜酸细胞、 肥大细胞和T淋巴 细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症。气道炎 症是哮喘患者气道可逆性阻塞和非特异性支气管高

12、反应性的 重要决定因素9 。 这是近年来哮喘患者 机制研究的重大进展。哮喘治疗的重点由单纯控制 症状转变为预防和抑制气道炎症。非特异性抗炎药 糖皮质激素 ( G C ) 和肾上腺素能R 受体激动剂( P - A R ) 是目 前防治哮喘的主药 10 。 但糖皮质激素可 引起水钠储留、 脂肪重新分布、 骨质疏松等一系列严 重的问题限制了其进一步的使用。 中药火把花根为我国所特有的中药原料， 经特 殊工艺制成， 其主要成分为生物碱、 菇类、 内醋、 酚酸 等， 类似皮质类固醇而无其严重的副作用， 已经有研 究表明火把花根片对豚鼠气道炎症有明显的抑制作 用 川， 我们 组的 实验也已 证实了 火把花

13、根片能抑制 哮喘豚鼠肺灌洗液中嗜酸粒细胞上的I L 一受体的 表达 ” 。 王 莉等 ” 已 使用火把花根片治疗哮喘患 者取得了一定的经验。为了进一步研究其机制， 我 们使用了膜片钳的方法对其进行深人研究， 这在国 内外还未见报道。 本研究表明， 哮喘大鼠L - L c 。 的活动明显增强， 通道开放的 概率增加。主要是由于哮喘大鼠L - L c . 开放时间延长而关闭时间缩短。为了实验进行的顺 利， 使用了钾通道阻断剂 T A E ， 这对实验结果可能 产生一定的干扰， 因为T A E本身也可以引起支气管 平滑肌细胞的 兴奋性增加 14 1 。 为了把这个影响降 至最小， 使用了多个对照组，

14、 两两之间相互比较。结 果发现， 哮喘大鼠L - L c 。 活动增强， 通道开放的概率 增加， L - L c 。 开放时间延长而关闭时间缩短。H B T 与 D X M能降低通道开放的概率， 缩短哮喘大鼠L - L , 开放时间和延长哮喘大鼠L - L c 。 关闭的时间。H B T 与D X M均能逆转哮喘大鼠L - L c 。 动力学的改变。 本研究发现与正常大鼠 相比， 哮喘大鼠L - L c 。 活 动明显增强， 通道开放的概率增加。H B T 与D X M 逆转哮喘大鼠L - L c 。 动力学的改变。这说明H B T 能 部分代替 D X M的作用， 可减少了 D X M的使用

15、剂 量， 减少 D X M引起的副作用。这意味着 H B T在治 疗哮喘方面具有广阔的临床应用前景， 同时也提出 了一个新思路， 如果能把 H B T中的对治疗哮喘有效 的成分提练出来， 那将对临床医生而言又多了一个 对付哮喘及气道高反应性的有力武器。 万方数据 7 9 6 中国 药 理学通报 C h i n e s e P h a r m a c o lo g ic a l B u l le t i n 2 0 0 4 7 u 1 ; 2 0 ( 7 ) 参考文献: 1 谢宗万主编. 全国中草药汇编( 下册 M ， 第2 版， 北京: 人 民卫生出版社， 1 9 9 6 , 9 0 . 2

16、李夏玉， 方维佳.火把花根片治疗 1 叭 肾病6 0例临床观察 J . 中 草药， 2 0 0 1 , 3 2 ( 9 ) ; 8 2 5 - 6 . 3 钟清， 甘华.甲氨喋吟与火把花根治疗类风湿性关节炎的 临床疗效观察 J 重庆医科大学学报， 2 0 0 2 , 2 7 ( 2 ) : 2 0 9 - 1 3 . 4 张建勇， 赵建军， 陈应华， 任明强 火把花根片对哮喘豚鼠气道 炎症的 作用 J . 贵州IK 药 杂志， 2 0 0 1 , 1 0 ; 8 9 0 一 2 . 5 M a n z o l l i S , M a c e d o . S o a r e s M F e t

17、a l . A l l e r g i c i n fl a m m a t i o n i n h y p o t h y ro i d r a t s J . J A l l e r g y C l i n i c l m m u n o l , 1 9 9 9 ; 1 0 4 ( 3 p t 1 ) : 5 9 5 一 印. 6 吴昌归， 孙滨， 毛宝龄. 哮喘豚鼠肺内P 物质的分布与地塞 米松对其影响【 J . 中 华结核与呼吸杂志， 1 9 9 8 , 2 1 ( 1 ) ; 1 6 - 8 . 7 H o n g y a n g L i u , Z h i l i n g X io

18、 n g , N i c h o l a s S p e r e l a k i s . C y c l i c n u c l e o - t i d e s re g u l a t e t h e a c t i v i ty o f L - t y p e c a l c i u m c h a n n e l s in s m o o t h m u s c l e c e l l s f r o m r a t p o rt a l v e i n J . J M o l C e l l c a r d i o l , 1 9 9 6 , 2 9 : 1 4 1 1 一 2 1 .

19、 8 F l e is c h m a n B K , W a n g Y X , K o t l i k o f f M I . V o l t a g e - d e p e n d e n t c a l - c i u m c u r r e n t s a n d c y t o s o l i c c a l c i u m i n e q u i n e a ir w a y m y o c y t e s J . J P h y s i o l , 1 9 9 6 , 4 9 2 : 3 4 7 一 5 8 . 9 N e l s o n M, W o r l e y J F

20、. D i h y d ro p y r i d i n e i n h ib i t io n o f s in g l e c a l c iu m c h a n n e l s a n d c o n t r a c t i o n i n r a b b i t m e s e n t e r i c a rt e ry d e p e n d s o n v o l t a g e J . J P h y s i o l L o n d , 1 9 8 9 , 4 1 2 : 6 5 一 9 1 . 1 0 3 N a t i o n a l H e a r t l u n g a

21、 n d B l o o d I n s t i t u t e a n d N a t io n I n s t i tu t e o f H e a l t h o f U S A . I n t e rn a t io n a l c o n s e n s u s r e p o r t o n d i a g n o s e s a n d t r e a t m e n t o f a s t h m a , 1 9 9 2 , 1 一 7 7 1 1 张建勇， 赵建军， 陈应华， 任明强 火把花根片对哮喘豚鼠气道 炎症抑制作用的实验研究【 J .遵义医学院学报， 2 0 0 3

22、, ( 2 ) ; 1 2 1一9 . 1 2 L u o L , L u o Y L , L a i W Y . E f f e c t s o f H u o b a h u a g e n t a b l e t o n t h e e x p r e s s i o n o f i n te r l e u k i n - 3 r e c e p t o r m R N A i n a s t h m a t i c g u i n e a p i g b r o n c h o a l v e o l a r l a v a g e fl u i d a n d e o s i n

23、o p h il i n fl i l t r a t i o n . D i Y i J u n Y i D o X U E B a o , 2 0 0 3 ， 2 3 ( 1 0 ) : 1 0 6 9 一 7 3 . 仁 1 3 王莉， 相芳. 火把花根片的临床应用 J .时珍国医国药 品， 2 0 0 2 , ( 9 ) 8 6 9 一 7 2 . 1 4 S t a n f i e l d P R . T e t r a e t h y l a m m o n i u m i o n s a n d t h e p o t a s s i u m p e r m e a - b il

24、 i t y o f e x c it a b l e c e l l s J . R e v P h y s i l o B i o c h e m P h a r m a c , 1 9 8 3 ， 9 7 . E f f e c t o f h u a b a h u a g e n t a b l e t o n L - t y p e c a l c i u m c h a n n e l o f t r a c h e a s mo o t h mu s c l e c e l l s i n r a t s wi t h a s t h ma C H E N G S h i -

25、h u ， L U O Y a - l i n g ， L A I We n - y a n ， S H I L a n g , L U O L i a n g ( D e p t o f R e s p i r a t o r y D is e a s e , N a n F a n g H o s p i t a l , F i r s t M i l i t a r y M e d i c a l U n i v e r s i t y , G u a n g z h o u 5 1 0 5 1 5 ， C h i n a ) A b s t r a c t : A i m T o s

26、t u d y t h e e f f e c t s o f h u a b a h u a g e n s i g n i f i c a n t l y . W h i l e i n g r o u p C ， w h i c h w a s t r e a t e d t a b l e t o n v o l t a g e s e n s i t i v i t y o f c a l c i u m c h a n n e l s i n t r a - w i t h h u o b a h u a g e n t a b l e t s ， C h a n n e l o

27、p e n t i m e c o n s t a n t s c h e a s m o o t h m u s c l e c e l l( T S M C )o f a s t h m a r a t s .( T o , a n d T , )a n d C l o s e t i m e c o n s t a n t s( T , , a n d: 二 ) Me t h o d s M a l e w i s t a r r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o k e p t u n c h a n g e d(

28、P 0 . 0 5 ) .A t t h e s a m e t i m e c o m - f o u r g r o u p s : g r o u p A( n 二 1 0 ) w e r e c o n t r o l a n d u n - p a r e d w i t h g r o u p B ， t h e L - L c e C h a n n e l o p e n t i m e c o n - t r e a t e d ; G ro u p B( n = 9 ) w e r e a s t h m a c o n t ro l g r o u p ;s t a n

29、t s ( ， 。 ， a n d T o)s h o rt e n e d s i g n i f i c a n t l y a n d C l o s e g r o u p C( n = 1 0 ) w e r e t r e a t e d w i t h h u o b a h u a g e n t a b - t i m e c o n s t a n t s( T . , a n d T . z )p ro l o n g e d s i g n if i c a n t l y i n l e t s ， a n d g r o u p D( n = 1 0 ) w e r

30、 e t r e a t e d w i t h D X M . g r o u p C . I n g r o u p D ， w e c o m p a r e d t h e r e s u l t b e - S i n g l e T S M C w a s a c u t e l y i s o l a t e d f ro m t h e r a t s . S i n g l e t w e e n h u o b a h u a g e n t a b l e t s a n d D X M，a n d g o t t h e c h a n n e l c u r r e

31、n t s w e r e r e c o r d e d b y u s i n g t h e p a t c h s a m e r e s u l t s . C o n c l u s i o n L - L c . c h a n n e l a c t i v i t y i n - c l a m p t e c h n i q u e i n o n - c e l l a t t a c h c o n f i g u r a t i o n . R e - c r e a s e d s i g n i fi c a n t l y i n a s t h m a g r

32、o u p . H u o b a h u a g e n s u i t s C o m p a r e d w i t h g r o u p A ， t h e L - L , c h a n n e l t a b l e t s a n d D X M r e v e r s e d t h e e f f e c t o f a s t h m a o n L - L c . a c t i v i t y i n c r e a s e d s i g n ifi c a n t l y i n g ro u p B o n t h e o n - c h a n n e l .

33、 T h e e f f e c t o f h u o b a h u a g e n t a b l e t s a n d D X M c e l l a t t a c h r e c o r d i n g . C h a n n e l o p e n p r o b a b i l i t y ( P o ) o f o n T S M C m a y b e p a rt l y m e d i a t e d v i a a c t i v a t i o n o f L - L - L c a c h a n n e l i n g r o u p B i n c r e

34、a s e d s i g n i f i c a n t l y c o m - L c a c h a n n e l . p a r e d w i t h t h a t i n g r o u p A( P 0 . 0 5) . C h a n n e l o p e n K e y w o r d s : h u o b a h u a g e n t a b l e t ; d e x a m e t h a s o n e ; t r a - t i m e c o n s t a n t s ( T o , a n d T O 2 )p r o l o n g e d s i g n i f i c a n t l y i n c h e a ; c a l c i u m c h a n n e l ; s m o o t h m u s c l e g r o u p B ; C l o s e t i m e c o n s t a n t s ( : 。 : a n d: 。 : ) s h o rt e n e d 万方数据