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1、收稿日期： !“#$%“$%“+ 4:?8023+ A4?+ BC?+ 98D /BC 抗人间充质干细胞单克隆抗体的制备 及生物学特性研究 廖志雄%， 沈建根%， 来晓瑜!， 黄EF*3） 的单克隆抗体， 为鉴定、 分选 ;EF*3 奠定基础。 方法： 以多供体 ;EF*3 免疫 GHIGD * 小鼠， 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体， 并以间接免疫荧光 法、 免疫组织化学法和流式细胞术等检测单克隆抗体在细胞及组织中的表达。结果： 建立了 # 个能 分泌抗人间充质干细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株， 该组单抗能与人间充质干细胞特异性结合， 而 对所检测的人间充质和非间充质来源的组织和细胞均未见交叉反
2、应， # 个单抗的相对亲和力分别 为： JKG% % L %“、 JKG6 % L %“#、 JK*) % L %“、JK.%! % L %“#、 JKM%“ % L %“#； 表位分析： JKG%、 JK.%!、 JKM%“ 针对相同的表位， JK*) 和 JKG6 则分别针对不同的表位。流式细胞分析显示分离 培养的 ;EF*3 阳性表达率为 JKG% N,+ )(O、 JKG6 NN+ “,O、 JK*) NN+ %!O、 JK.%! (P N(O 和 JKM%“ N)+ ,O。结论： # 株杂交瘤分泌的单克隆抗体均能与人间充质干细胞发生特异性结合， 为 深入研究 ;EF*3 的生物学功能
3、奠定了基础。 关键词 1$T1:85%， FU.VW X108$5B8%， IHR Y10:$Z?!， B*4) )%“)， /4Z1C:/0 BB 0802ZABC Z 18C1B9 9ZBB 3?99B33?22Z B3;19; 3B9B（?A;） ， ; （?4C） ， ?D;E （; MO KMN（?D;E）$=） H !“#$%L5:EEH Q Q 人骨髓间充质干细胞 （(67$ VC。目前， 鉴定 (-5 34 的方法都是通过在培养过程中出现分化表 型， 然后逆推得知是否为 (-34， 尚无直接方法 可以鉴定到 (-34。制备特异性 (-34 表面 膜分子的单克隆抗体对于 (-34
4、 的分选及研 究具有重要意义。本研究应用杂交瘤技术制备 了 : 株抗 (-34 的单克隆抗体 （-./0） ， 并对 其生物学特性进行了研究， 现报告如下。 /0 材料与方法 /H /0 细胞、 动物及组织标本来源Q (-34、 WX5 = 细胞、 Y$U“、 血管内皮细胞、 组织标本及大鼠 -34 由浙江大学血液学研究所提供， 3ZER=、 WX5= 由浙江大学免疫学研究所保存， A/XAR 4 小鼠购自上海必凯实验动物中心。 /H 10试剂Q次黄嘌呤 （W） 、 氨基喋呤 （/） 、 胸 腺嘧啶 （P） 为 3“#7$ 公司产品，YZ-I5;B= 为 日本制药株式会社产品， F“.%,5G
5、$S6* 分离液购 自上海试剂二厂， 胎牛血清、 X5-D- 培养 液、 聚乙二醇 （ZD， -B=） 、 小鼠单克隆抗 体分型试剂购自 IA4 AYX 公司， 羊抗小鼠 I# _ I#-5FIP4 为 /XP/ 公司产品， 辣根过氧 化物酶 （3!1*G$8“+“O =LL =H =;） 密度梯度离心后， 收集单个核细 胞层， 用 ZA3 液洗 E 次， 细胞重悬于含 ;=N 胎 牛血清的 X5-D- 培养液， 按 E 密度接 种于 P5E: .7E培养瓶， 置 :N 4E、 CLa 孵育培 养， BK ( 后更换培养液， 弃去非贴壁细胞， 以后 C bB + 换液 ; 次， 贴壁细胞约 K
6、=N bM=N 融合 后用 =H E:N胰酶5; 77%,R X DP/ 消化， 按 ;c E 传代培养。培养后的 -34 以多种单抗进行 流式细胞仪检测， 骨髓 -34 表面抗原特征为 4EM _ 、 4BB _ 、 4; _ 、 4CB V 、 4B: V 、 WX/5 Y V 。 /H 30抗 (-34 -./0 的制备及纯化Q采用多 供体 （E 份以上供者） (-34， 以 =H =; 7%,R X GW LH E ZA3 悬浮免疫 A/XAR 4 小鼠， 每只 =H E 7, （; ） 腹腔注射， 每周 ; 次， 共 B 次， 于融合 前 C + 加强免疫 ; 次。取免疫小鼠脾细胞和
7、小 鼠骨髓瘤细胞 3ZER= 在 :=N ZD （-B=） 作 用下融合， 用含 E=N 小牛血清的 W/P 选择性 培养基培养。以改良的间接免疫荧光法筛选抗 体： ; 表面膜蛋白 表面膜蛋白 ， 用免疫组织化学法测定间充质和非间充质来源 的 ! 消 化后以生理盐水悬浮后加入到 JKKJ;LMNO 管中， 每管 !“ !7， 加单克隆抗体 !“ !7 （!P !“） 室 温孵育 单克隆抗体杂交 瘤细胞 2 株， 定名为 UV$!、 UV$)、 UV(9、 UV.! H;L XYKJ LJXJ5X:M; MO 45%6 ONM8 O:ZJ BY6N:LM8H 5J77 7:;J 45%6 W:X
8、JN %5:XJ/KJN;HXH;X WYKJ UV$!P !“)!P 9. 万方数据 ! ! 本研究以人源多供体 “#$% 作为免疫原免 疫 4?34 “ 6， “$AB “， : CDE “FD:9D9 : CDE “;C%F=;K; : CDE LHZZA # ZN, O E +4,.， ,PP,， RQ （,） ： *NW5E P ! : CDE “;%;$: CDE =;1;=C:9H VM 9KGDC:C:9H HI GF=9I9;J， LFD:F=;N ;GCJ;J +FKC K;%;L+MKCD %:;K L;DD% O E * ?$01, !“， ,PPQ， ,W （5） ： ,*N,W5E 责任编辑! 黄晓花 55*! ! !浙江大学学报 （医学版）第 /* 卷 万方数据