抗菌肽FALL39及其突变肽对诱生型一氧化氮产生的影响.pdf

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1、第2 8 卷第6 期 2 0 0 8 年1 2 月 国际病理科学与临床杂志 h t e m a t i o n a lJ o u m a l0 fP a l h o l o 科柚dC l i n i c a lM e d i c i n e V 0 1 2 8 n e c N o 6 2 0 0 8 论著 抗菌肽F A L L 一3 9 及其突变肽对诱生型一氧化氮产生的影响 郝杰杨云霞，王伯瑶 ( 四川大学华西基础医学与法医学院，成都6 1 0 0 4 4 ) 摘要目的：比较人抗茵肤F A L L - 3 9 及其突变肽对细菌脂多糖( 1 i p 叩0 l y s a c c h 鲥d e 8

2、 ，u ) s ) 介导的诱生型一 氧化氮( n i t r i co x i d e ，N O ) 产生的影响。方法：体外常规培养人单核吞噬细胞T H P 1 ，L P s 刺激细胞，分别用人抗茵 肽F A L L - 3 9 以及突变肽F A L L - 3 9 L y s 2 4 ，F A L L 3 9 一L y s 3 2 ，F A L L - 3 9 L y s 2 4 3 2 处理细胞。应用R T P C R 方法测定L P S 诱生型一氧化氮合酶( i n d u c e dn i t r i co x i d es y n t h a ，i N O S ) 以及F A L L

3、 - 3 9m R N A 的表达，用硝酸还原酶法测定细胞 培养上清液中N 0 的含量。小鼠腹腔注射更生霉素和L P s 建立内毒素血症模型，分别用抗茵肤处理动物，取血测定 血清中N 0 的含量。结果：U ) s 刺激F A L L 3 9m R N A 的表达增加；同时也诱导N 0m R N A 的表达以及细胞培养上清 液中N 0 含量的增加。人抗茵肤F A L L 3 9 及其突变肽F A L L 3 9 L y s 2 4 ，F A L L - 3 9 L y s 3 2 ，F A L L 3 9 L y s 2 4 3 2 可以抑制 u ) s 诱导的N O 的产生；其中F A L L

4、 - 3 9 - L y s 2 4 3 2 的抑制作用最为明显。结论：抗茵肽F A L L - 3 9 及其突变肤具有抗内 毒素作用，其机制与抑制吣诱导的N 0 产生有关。 关键词抗茵肤；F A u 广3 9 ；突变；一氧化氮 【中图分类号 R 3 6 4 5 文献标识码】A 文章编号】1 6 7 3 - 2 5 8 8 ( 2 0 0 8 ) 0 6 J D 4 6 l J D 4 E f f e c to fa n t i b a c t e r i a lp e p t i d eF A L L - 3 9a n di t sm u t a n tp e p t i d e so n

5、p r o d u c t i o no fI l i t r i cO x i d ei n d u c e db yl i p o p o l y s a c c h a r i d e s H A OJ i e ，Y A N GY u n - x i a ，W A N GB o - y a o ( 耽咖吼讯口S 矾D 甜矿Z i r 妇面d 肋黼如肘列如沁，l s 如 眦儿，访世r s 缸y ，c 明础6 1 0 0 4 l ，吼妇m ) A b s t r 躯t o b j 6 v e T os t u d yt l l ee 虢c to fa n t i b a c t 葫a lp

6、e p t i d eF A L L - 3 9 锄di tm u t a n t p e - t i d e so np r o d u c t i o no fn i t r i co x i d e ( N O ) i n d u c e db yl i p o p o l y s a c c h 撕d e s ( U ) s ) M e t h o d s7 I H P - 1 c e U sw e r et r e a t e dw i t IU 玛，F A L L - 3 9 肌di tr n u t a n tp e t i d e sF A L L - 3 9 L y s 2

7、4 ，F A L L 一3 9 L y s 3 2 ，F A L L 3 9 L y s 2 4 3 2 S e m i q u 舳t i t a t i v er e v e r s e t r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i n 陀a c t i o n ( R T P C R ) w 鹳u dt od e t e m i n et h eF A L L - 3 9a n di N O Sm R N Ae x p r e s s i o n N Oc o n t e n tw a sd e t e c t e db yu s

8、i n gn i t r a t er e d u c t a 啪t l l o d 1 1 1 ee n d o t o x i m am o d e li nB A L B CI I l i c ew 酗c r e a t e d b yu s i n gU ) sa n da c t i n o m y c i nD r 1 1 l eI I l i c e w e r et r e a t e dw i t ht l l ep e p t i d e sa n dN Oc o n t e n ti ns e m mw 鹊d e t e c t e d R e s u l 缸T h eF

9、 A L L - 3 9a n d i N O Sm R N Ae x p r e s s i o nw e r ei n c r e 鹤e di n d u c e db yU ) s F A L L - 3 9a n di tm u t a n tp e t i d e si n h i b i t e dt h ei n d u c e dn i t r i co x i d es y n t h a s e ( i N O S ) m R N Ae x p r e s s i o na n dt h ep r o d u c t i o no fN Oi n m P 一1c e l l

10、 s A m o n g t l l e m F A L L 3 9 L y s 2 4 3 2h a dt l em o s tp o t e n t i a le 虢c t C o n c l u s i o n A n t i b a c t e r i a L lp e p t i d eF A L L - 3 9 A n di t sm u t a n t p e t i d e sh a v ea n t i e n d o t o 】【i ne f f e c t ， a I l dt l l i se f k c ti sa s s o c i a t e d w i t hi

11、 n h i b i t o no fi N O S m R N Ae x p r e s s i o na n dN Op m d u c t i o n K e yw o r l s a n t i b a c t e r i a lp e p t i d e ； F A L L 3 9 ； m u t a t i o n ； n i t r i co x i d e I n tJP a t l l o lc l i nM e d ，2 0 0 8 ，2 8 ( 6 ) ：0 4 6 1 D 4 】 收稿日期：2 0 0 8 一0 9 0 4修回日期：2 0 0 8 一l l l l 作者

12、简介：郝杰( 1 9 8 3 ) ，女，山西太原人，硕士研究生，主要从事抗炎免疫药理学研究。 通讯作者：杨云霞，E m a i l ：j a c q u e s i M c o m 基金项目：国家自然科学基金( 3 9 6 7 0 6 8 3 ) 珏i sw o r kw 鼬p p o n e db yN a t i a lN 越u r a iS c i e m eF 0 u n d m i mo f C h i m ( 3 9 6 7 0 6 8 3 ) 4 6 l 万方数据 第6 期 国际病理科学与临床杂志 第2 8 卷 内源性抗菌肽( e n d o g e n o u sa n t i

13、 b i o t i cp e p t i d e s ，简 称抗菌肽) 被认为是机体在进化过程中产生的广泛 存在的免疫活性分子。抗菌肽是由基因编码，具有 广谱抗微生物活性，有的还具有抗内毒素作用。 人类抗菌肽主要有防御素家族和C a t h e l i c i d i n 家族蛋白，其中C a t h e l i c i d i n 家族蛋白是新近发现的 一组抗菌肽家族，其家族成员均具有高度保守的信 号序列和C a t h e l i n 样区，以及各种各样的C 末端抗 菌功能域，因此称之为c a t h e l i c i d i n 家族 1 。人类第 1 个c a t h e l i

14、c i d i n 是从人骨髓文库中分离出的c D N A 的开放阅读框推测出来的，因其N 端最初的4 个氨 基酸分别为F - A L - L ，全长有3 9 个氨基酸而命名为 F A L L - 3 9 ，以后分离获得的天然肽分子N 端开始的 F A 两个氨基酸残基缺如，因此称为L L - 3 7 ，二者的 功能完全相同心J 。F A L L 一3 9 基因分布广泛，其抗菌 谱较广，但抗菌活性一般；同时具有一定的抗内毒素 作用。 N o 是一氧化氮合酶( n i t r i co x i d es y n t h a s e ， N O S ) 分解底物精氨酸的产物。有原生型( c N O

15、S ) 和 诱生型( i N O s ) 两种。通常在病理情况下由内毒素 和或细胞因子( T N F ，I L 一1 ，I F N 一1 等) 刺激，激活 i N O S 而合成大量的N O ，在炎症局部可发挥抗炎和 杀菌等保护性作用，而全身性的大量释放的N O 则 参与机体炎症反应和感染、创伤引起的器官功能损 害。笔者前期已经提纯并纯化人抗菌肽F A L L - 3 9 以 及突变肽F A L L 一3 9 一L y s 2 4 ( 天然肽第2 4 位碱基由碱 性赖氨酸替代中性谷氨酰胺) 、F A L L 3 9 一L y s 3 2 ( 第 3 2 位碱基由赖氨酸替代中性天门冬氨酸) 、F

16、 A L L 一 3 9 一L y s 2 4 3 2 ( 第2 4 ，3 2 位同时用赖氨酸替代) ，发现 突变肽可以增强抗菌活性圳，本研究在此基础上探 讨其对细菌内毒素介导的人单核吞噬细胞T H P l 的 N O 产生的影响。 1 材料与方法 1 1 主要试剂及动物人抗菌肽F A L L - 3 9 以及 突变肽F A L L 3 9 L y s 2 4 ，F A L L - 3 9 一L y s 3 2 ，F A L L 一3 9 - L y s 2 4 3 2 由本室纯化。人单核细胞系T H P l ，为四 川大学华西医学中心感染与免疫研究室惠赠。细胞 完全培养基：9 0 R P M

17、 l l 6 4 0 、1 0 胎牛血清、 4m o L L 谷氨酰胺、1 0 0m L 硫酸链霉素、1 0 0U m L 青霉素G 钠。细菌脂多糖( L P s ) 、放线菌素D ( a c t i - n o m y c i nD ，A M D ) 为美国S i 鲫公司产品；其它试剂 均为国产分析纯。B A L B c 小鼠4 8 只，雌雄各半，体 质量( 2 0 2 ) g ，由四川大学华西实验动物中心提供。 1 2方法 1 2 1 引物设计根据G e n b a n k 人抗菌肽 F A L L - 3 9c D N A 序列( 登录号：X 9 6 7 3 5 ) 设计特异引 物，正义

18、：5 一A A C G G A r C C r 丌G C C C T G C T G - 3 ；反义： 5 C C A G G A T C C G G C A C A C A C T A G - 3 。根据 G e n - B a n k 人i N O Sc D N A 序列设计特异引物( 基因登录 号：D 2 6 5 2 5 ) ，正义：5 - C T G G A l G T C G I 姒C m T A G A T T 3 ：反义：5 - A T G T A C C C T C G G ，I - I T G C G - 3 。 内参照B a c t i n 特异引物序列分别为，正义：5 一

19、A G G T - G A G A G G G A A A T C G T G C G - 3 ；反义： 57 - G 1 、G C A C - c A G A c A G C A c T C 爪X - 3 。引物均由G i b c o 公司合成。 1 2 2细胞F A L L _ 3 9m R N A 的表达 参照文献 5 的方法做悬浮培养细胞的刺激实验。取1 5 1 0 6 个T H P - 1 细胞接种于6 孔板中，在3 7 ，5 C O ，条件下培养2 4h 。加入不同剂量的L P S ( 2 5 ， 2 5n m L ) ，继续培养8h 后分别提取总R N A ，用 R T P c

20、R 方法检测F A L L - 3 9m R N A 的表达量，同时用 B a c t i n 作为内对照。 1 2 3细胞i N O Sm R N A 的表达 做悬浮培养细 胞的刺激实验。取1 5 1 0 6 个T H P - 1 细胞接种于6 孔板中，在3 7 ，5 C O ：条件下培养2 4h 。加入 2 5n g m L 的L P s ，以及人抗菌肽F A L L 3 9 以及突变 肽F A L L 一3 9 一L y s 2 4 ，F A L L 一3 9 - L y s 3 2 ，F A L L 一3 9 L y s 2 4 3 2 ( 浓度均为2 5 恤g m L ) ，继续培养

21、8h 后分别提取 总R N A 。用R T - P C R 方法检测i N O Sm R N A 的表达 量，计算机进行灰度扫描，同时用B a c t i n 作为内对 照，计算i N o sm R N A 的相对表达量。 1 2 4 细胞培养上清液N O 含量测定取对数 生长期T H P 一1 细胞，以2 1 0 5 L 密度接种于9 6 孔 培养板中，每组设3 个平行孔。分为空白对照细胞 组、L P s ( 2 5n g m L ) 处理细胞组、抗菌肽F A L L - 3 9 以 及突变肽F A L L - 3 9 一L y s 2 4 ，F A L L 一3 9 - L y s 3 2

22、 ，F A L L - 3 9 一 L y s 2 4 3 2 ( 浓度均为2 5 斗g m L ) 处理组。孵育2 4h 后，吸取上述各组细胞上清液，采用硝酸还原酶法测 定各管吸光度值，按照试剂盒说明计算各组N 0 含 量。每组实验均重复3 次。 1 2 5 内毒素血症动物模型血浆N O 含量测定 小鼠腹腔注射2 5 斗g 更生霉素( A M D ) 以及1 0 0n g L P s 建立内毒素血症模型。造模当日分组给药，每 组8 只动物，模型对照组静脉注射生理盐水；F A L L 一 3 9 以及突变肽F A L L 一3 9 - L y s 2 4 ，F A L L 3 9 一L y s

23、 3 2 ， F A L L 3 9 L y s 2 4 3 2 组，分别静脉注射相应的多肽，剂 4 6 2 万方数据 第6 期郝杰，等：抗菌肽F A L L 3 9 及其突变肽对诱生型一氧化氮产生的影响第2 8 卷 量为o 5m g k g 。空白对照组不作任何处理。造模 给药后次日眼球取血，测定血浆N O 含量。 1 2 6 统计学处理用S P s S l l 5 软件进行统 计学分析，数据用均数标准差( i s ) 表示，组间比 较采用方差分析，以P 0 0 5 为差异有统计学意义。 2 结果 2 1 L P s 刺激T H P l 细胞F A L L 一3 9m R N A 表达 以r

24、 I H P - l 细胞r r l R N A 为模板进行F A I I 广3 9 基因R B P C R 扩增，产物为一条约1 4 0b p 的条带，与预计扩增片 段大小相符，测序结果与G e n B a n k 登录的编码成熟 F A I J 棚的c D N A 序列相符。鹏可以刺激F A I I ，3 9 基因在r n 口一1 细胞中表达增强，在低剂量( 2 5n n l L ) 下即可诱导F A I J r 3 9l I l I 州A 大量表达，与大剂量( 2 5 n g I l L ) 引起的刺激表达没有明显区别( 图1 ) 。 2 2 对L P s 介导的i N O Sm R N

25、 A 表达的影响以 T H P 一1 细胞m R N A 为模板进行i N O S 基因R T - P C R 扩增，产物为一条约3 5 8b p 的条带，与预计扩增片 段大小相符，测序结果与G e n B a n k 登录的编码成熟 i N O s 的c D N A 序列相符。L P S 可以刺激单核吞噬细 胞T H P 一1i N O Sm R N A 表达。F A L L - 3 9 及其突变蛋 白均可以抑制L P s 引起单核巨噬细胞i N O Sm R N A 表达，计算机进行灰度扫描后，在相同剂量情况下， F A L L - 3 9 一L y s 2 4 3 2 的抑制作用最强(

26、图2 ) 。 2 。3 细胞培养上清液以及内毒素血症模型动物血 浆N O 含量测定 L P S 可以刺激单核吞噬细胞 T H P l 产生N o ，人抗菌肽F A L 9 及其突变肽 F A I 工- 3 9 L y s 2 4 ，F A L L - 3 9 一L y s 3 2 ，F A L L 一3 9 - L y s 2 4 3 2 可以明显抑制L P S 诱导的N O 的产生；其中F A L L 3 9 一L y s 2 4 3 2 的抑制作用最为明显，与F A L L 一3 9 相比 有统计学差异( 尸 o 0 5 ) 。体内内毒素血症模型实 验表明，人抗菌肽F A L L - 3

27、9 及其突变肽F A L L 3 9 - L y s 2 4 ，F A L L - 3 9 一L y s 3 2 ，F A L L 3 9 一L y s 2 4 3 2 可以抑制 L 胯诱导的N O 的产生，结果与体外研究相似( 表1 ) 。 图1L P S 刺激单核吞噬细胞T H P - lF A L L 3 91 1 1 卧认的 表达 n g 1 L P Ss t i m I l l a t e dF A L L 3 9m 砌呵Ae x p 麟i 帆i n T H P 1c d l s ， 鋈羹霄寓 图2F A L L 3 9 及其突变肽对L P S 介导的T H P - 1i N o S

28、m 砌崎A 表达的影响 n g 2I n h i b i t o r ye f f & to fF A L L 3 9 卸di t sm u t a n tp e p 廿d 鹤o nL P S m e d i a t e di N o Sm R N A 麟p 嗍i 蚰i nT H P l 表1F A L L - 3 9 及其突变肽对L P S 介导的N o 产生的抑制作用( i s ，I I I l L L l T a b 1I n h i b i t o r ye m 蜕o fF A L L - 3 9a n di t sm u t a n tp e p t i d 豁蚰L P S m e

29、d i a t e dN op r o d u d i o n ( 孑墨。n o L L ) 与对照组比较，P 0 O l ；与模型组比较， P O O l ；与F A L L - 3 9 组比较，# 尸 0 0 5 4 6 3 万方数据 第6 期 国际病理科学与临床杂志 第2 8 卷 3 讨论 。m ，G 朋儿芝柚：i ：。：曲机。面。训m ；一 L P S 是内毒素的主要成分，血中脂多糖结合蛋 白( L P s - b i n d i n gp m t e i n ，L B P ) 与L P s 作用，可介导 L P S 与c D l 4 的结合形成L P s c D l 4 复合物，该复

30、合 物可通过细胞膜的T o U 样受体( T o U l i k er e c e p t o 犸 T L R s ) 信号系统，激活转录因子N F K B 和胞内信号 调节激酶，从而诱导炎症细胞因子的产生，如N O 的 大量产生，致血管过度扩张，血压持续降低以及心肌 抑制，从而加重内毒素休克的病理过程。N o 的产 生是通过N O S ，其中i N O s 基因的启动子上存在众 多细胞因子及L P s 等的结合位点，i N o s 的活性只 有在内毒素和细胞因子等物质的刺激下才产生。 i N O S 可催化所生成的N O 可在几小时、几天，甚至 更长的时间持续生成，在全身感染和败血症的病理

31、生理过程中起重要的作用。抑制过量N 0 的产生， 对防治休克和改善心功能，有重要的临床意义帕剖。 F A L L - 3 9 基因分布广泛，在受到微生物和其它 因素侵袭时，表达增强，并有效地抵抗微生物侵入。 体外实验表明F A L L - 3 9 可以直接中和L P s ，但所需 的剂量大J 。体内研究表明F A L L - 3 9 抗内毒素作 用所需剂量远远小于体外所需，因而其作用并非直 接中和内毒素而是起清除或其他作用0 | 。F A L L 一3 9 可以显著抑制L P s 和L B P 的结合，从而抑制L P s 与 c D l 4 的结合；此外，F A L L - 3 9 也能结合到

32、C D l 4 分 子上而抑制L P S 与c D l 4 的结合一J 。 在实验中，笔者用L P S 刺激人单核细胞系T H P - l ，使用c D N A 模板量仅为2 斗L 即可获得F A L L 3 9 大量表达，而i N O sm R N A 应用模板量为6p L ；说明 F A L L 3 9 在内毒素休克过程中可能更早地起作用。 反过来，F A L L - 3 9 及其突变肽可以抑制鹏诱导的 N O 的产生。初步的研究表明机体对外来侵害如 L P S 刺激的反应是多方面的，可能形成一个巨大的、 复杂的网络系统，抗菌肽、细胞因子和炎症介质等均 是这个网络系统的结点，而抗菌肽包括F

33、 A L L - 3 9 在 这个网络系统中不仅是抗菌作用，而且在免疫调节 与炎症反应中亦起作用。 在相同剂量下，F 址工广3 9 - L y s - 2 4 ，F A I J ，3 9 L y s 3 2 以及F A I 玉r 3 9 一L y s 2 4 3 2 抑制u ) s 介导的i N O Sm R N A 表达以及N O 的产生作用强于F A IJr 3 9 ，说明增加碱性 氨基酸增加了抗内毒素作用，其中F A I I ，3 9 L ，s 2 4 3 2 碱陛氨基酸的比例最大，抗内毒素作用也最强。 4 6 4 c m b i a lp e p t i d J c u r r O p

34、 i n H e n I a t o l ，2 0 0 2 ，9 ( 1 ) ：1 8 - 2 9 2 D n r ru H ，s u d h 唧d mu s ，R 脚蝴r t h yA u 一- 3 7 ，t l l eo I l I yh u 眦nm e m b e ro ft l l ec a t h e l i c i d i n i l y0 f 种t i m i c T o b i a lp e p t i d 铭 J B i o c h i mB i o p h y sA c 忸，2 0 0 6 ，1 7 5 8 ( 9 ) ：1 4 0 8 一1 4 2 5 【3 Y m gY

35、 x ，F e r I g Y ，w 锄g B Y ，e ta 1 P c R b a 8 e ds i t e s p e c m c I 眦。 t a g e 啷i s0 fp e p l i d e 柚t i b i o t i c sF A L L 3 9a n d 妇b i o l o g i c t i “t i J A c t aP h ls i n ，2 0 0 4 ，2 5 ( 2 ) ：2 3 9 2 4 5 4 杨云霞，朱玲，王伯瑶。等人抗菌肽F A u 一9 突变分子的特 性和抗菌功能的比较 J 华西药学杂志。2 0 0 6 ，2 l ( 5 ) ： 4 2 2 4 2

36、 4 Y A N GY 岫一】【i a ，Z H U “n g 。W A N GB o - y C o m p a r i n gt l l ep r o - t e i nc h a r a c t e r i 鲥c s 锄d 锄t i b a e t e r i a la c t i v i t yo f 舳t i k l c t e r i a lp e p t i d e F A L L 3 9 m d i t 8 t a n tp e p I i d e s J _ W e s t c h i n aJ o u m a l0 fP l l 小 m a c e u t i c a ls

37、 c i c 镪，2 0 0 6 。2 l ( 5 ) ：4 2 2 4 2 4 5 唐琼卡介苗胞壁蛋白增强人单核巨噬细胞l L - 1 2 和i N o S m R N A 表达 D 成都：四川大学华西基础医学与法医学院， 2 0 0 3 T A N GQ i g E n h a 眦e m 咖to fI L l 2m R N A 唧燃s i 蚰i n7 m P - 1 c e l l 8i n d u c e db yB c Gc e l lw a l lp r o t e i n D c h e n g d u ：w e s t c h i m s c h 0 0 lo fP r e c

38、l i n i c a l 鲫dF 0 m n 8 i cM e d i c i n eo fS i c h u 锄U I I i v e 玛毋， 2 0 0 3 6 s c h i n d l e rH ，B o g d a nc N i t r i c 佩i d e 鹕as i n 印a l i n gn m l e c u l e ： 龇B k i n a 【J hI m n 叩h m a c o l ，2 0 0 l ，l ( 8 ) ： 1 4 4 3 1 4 4 5 7 刘阳云，赵素萍诱导型一氧化氮合酶与环氧合酶2 2 在肿瘤 组织中的共表达 J 国际病理科学与临床杂志，2 0 0

39、 7 ，2 7 ( 1 ) ：1 9 韶 U UY a I I g y l l n ，Z H A OS u - p i I l g C o 啦p r e 鲒i o no fi n d u c i b l en i t r i c 喇d es y n t h a 柚dc y c l 0 0 x y g e n a 眈2i nc a r c i n 哪t i s s u e J JI l l t P a I h o lC I i nM e d ，2 0 0 7 ，2 7 ( 1 ) ：1 9 埘 8 王丽，周源，姜德建，等一氧化氮合酶抑制物在胃黏膜损伤中 的作用与机制【J 国际病理科学与临床杂志，

40、2 0 0 6 ，2 6 ( 1 ) ： 1 _ 6 W A N G “，Z H O UY u 柚，J I A N G D e j i 舳。e ta 1 R o l e0 f n i t r i co x - i d e8 ”t l l a i n h i b i t o ri ng 鹋t r i cm u c 啷i n j u r ya n di t sn 屺c l I a I I i 哪 J JI n tP a t h o lc l i nM e d ，2 0 0 6 ，2 6 ( 1 ) ：1 6 9 d e nH e n o gA L ，v 帅M a d eJ ，V 鲫姗E c ，e

41、ta 1 eh u r r 蛐 c a t h e l i c i d i np e p t i d eL L - 3 7 锄dt n m c 舢e dV a r i 粕t si n d u c e 眈g r 8 9 a - t i o n0 fl i p i d 8 肌dp m t e i n si nt h ep l 鹊mn 圮m b 娜1 eo fc a n d i d aa l - b i c s J B i o lC h ，2 0 0 6 ，3 8 7 ( 1 0 1 1 ) ：1 4 9 5 1 5 0 2 1 0 冯新富，黄玉兰，张忠民，等L L - 3 7 抗菌肽重组及其治疗实

42、 验性内毒素血症的研究 J 山东医药，2 0 0 5 ，4 5 ( 2 9 ) ：l - 3 F E N GX i n f u ，H U A N GY u l a I I ，Z H A N GZ h o n g m i n ，e ta 1 R e - c o m b i n a l i o no fL L - 3 7p e p l i d e 锄d 沁胡t 亭鲫呦t i n ge x p e r i m 一 t a le n d o t o x i 瑚 J s h a I l d o n gM e d i c a lJ o u m a l ，2 0 0 5 ，4 5 ( 2 9 ) ： 1 3 万方数据