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1、第 25 春第 10 期 2 0 0 7 率 1 0月 中华中医口 岁学刊 A R C H I V E SO F T 印山厅IO N A L C H IN E S E M E 侧C IN E V o 】 。 25 h o . 1 0 峨 丸. 。 2 D0 7 湿热证动物模型的研究概况 杨巧芳 ， ， 孟庆刚 ， 常辉东 2 ， 许 珊， ， 王 乐 ( 1 . 北京中医药大学， 北京 1 ( 以理 9 ; 2 . 内蒙古乌海市蒙中医院， 内蒙古 乌海01仅 拟) ) 摘要: 通过分析中医注热证( 包括滋病注热， 脾胃注热， 大肠汲热， 肝胆注热， 膀脱注热) 的造模方法， 并联 系中医的发病
2、学原理， 对不同的遗模方法进行横向和纵向比校评价， 为不同浪热证实脸研究蹄选恰当的动物模型 其定基础。 关健词: 注热证; 动物模型; 蛛迷 中圈分类号: R一3 3文献标识码: A文章编号:16 7 3一 77l 7(2 仪刀) 10 一 2 仍7 一 仍 C 卜 e rvie WS on theA n i m a l M以 拍l of D a mP 一h e a 1 S y n d ro me Y A N cQ i阶血 叩 1 ， 袱N G切 呀， Jl g l ， c H A N Gn 刁 叨扩， x u ， 阳 11 1 ， w人 刊 G压， ( 1 。翻11 飞创 1 印成叭 二 M
3、 ， 形 吨 1仪 刀 四， C 肠 .; 工Wld 诬H 翔 杯 目过T . 山 口 词肠 网州1曰M 函d 此， 切公 ol6 ) 刀. 】 . . 甘” 翻 创纽， 舀j ”) 川书t re d: S IJ砷 . 1 1 赵 泪血 口 d 勘山 J协吐场 吕别 心 . 目功 闭日过 扣 .山旧p 一 卜 曰 鱿甲记门皿 玩此 T 即 日1五 。 . 目C 场 仪， 旧 M施砂( 代M) ， 1 卿】 u 山 ng ds 口P 一卜 侧 目in血 feb 川e 山。 ds” ，p一 】 忱 目inlha 喇 朋d sto.c h ， 加山e 月 2 ，岭 te 而鹅， 玩血 U v 口山
4、司p】上 肠 d 丸r . 11 in此 颐朋口b 卜 闭 d er .M ， 能 司 即伪“ 耳 ， 毗d a J日.目y 之 曰阮 嵌山 侧 如证 d i 氏民. t 日. 司山 k 叼b w a ”山 日七 别 川 口 e m all， ， 毗 “ 山n gtothe th加d .Je ti dO gy in兀M， 扮cb， 。 u 】 dp 田 们 de 一玩m 石 以 址l pfor 脱 】 忱t ing .1加 山 le倒 旧 m 目. 策 司 e 】 i n futU 花e 口 p 二 ri 司 . 加山 .d 阅 川山 口P 一 b 已 吐叮司佣. e . K e 洲帕r 由:
5、 山 皿p一 时 叮1司 朋犯; 画 . . 1 .记 e l ; 中华中医药 湿热既是常见的致病因素， 又是疾病过程中机体的特 殊病理状态， 常使疾病缠绵难愈。因此， 关于湿热证的机理 研究也是中医病因病机学研究的热点之一。随着中医证本 质研究的逐步深人， 需要大最可重复的实验研究， 动物模型 的不完善已成为制约的瓶颈之一。关于湿热证的动物模型 的复制 研究者已做了大盆的工作， 且渐趋成熟。笔者就各 种湿热证动物模型( 沮病湿热、 脾胃湿热、 大肠湿热、 肝胆 湿热、 磅脱湿热) 的复制方法评述如下。 1 盆病湿热证 1988年郭金龙根 据中 医病因学原理， 一方面模拟长夏 季节气候， 提高
6、动物生活环境中的温度和湿度， 制造“ 外 湿卜另一方面， 采用饮食不节， 过食肥甘的方法损伤脾胃， 阻碍运化， 制造“ 内湿“ ， 成功复制了湿阻证的动物模垒， 为 温病湿热模型的制 造提供了借鉴川。 1 9 明 年王新华则 在此基础上. 借鉴温病卫气营血动物 模型的方法， 除制造内、 外湿外， 增加了 生物感染因 素， 初步 复制了沮病湿热证的 动物模型2j。 1 99 8 一1 卿 年杨 运 高 川、 吴 仕九 一 ， 等对 运 用 饮食 、 环境加不同的生物因 子( 大肠杆菌和伤寒沙门氏菌) 的造 模方法进行比 较， 认为以饮食因素加气候环境因素加伤寒 沙门氏菌感染的综合因素的实验方法所
7、复制的模型较为理 收稿日期:2 以 刀一 仍一12 甚金项目: 国家自 然科学基金资助( 鱿 拓 7 2 642) 大连市科技局社会 发 展 资助 项目 ( 2 以 ” 84s F 1 2 1 、 2 加S E l l 泪1 5 ) ; 科技部 基础专 项资助项目 ( 2 加I D 乙 U 即1 0) 作者简介: 杨巧芳(l9 ? 5 一 ， 女， 内蒙古呼和浩特人， 讲师， 博士研 究生，研究方向 墓于系统复杂性中医药信息研 究。 通讯作者: 孟庆刚(l驯 闷一 . 男，辽宁海城人， 毅授. 博士研究生导 师， 双博士后， 研究方向: 基于系统复杂性的中医药信息 研 究。 想， 近似于中医的
8、湿热证型， 且具有操作简单， 重复性好的 特 点。两种造模 方法分别为: 模型l(饮食加气候加鼠伤寒 沙门氏菌) 先以高糖高脂饲料喂养10夭， 然后将大鼠置于高 温仓( 温度35， 相对湿度外%) ， %卜后， 灌胃给予鼠伤寒 沙门氏 苗2 创 口 么 刀 9 体重. 1 为h 再加强感染1 次( l d/ 么 刃 9 体 重) ， 然后移出置自 然环境。模型2 : 饮食加气候加大肠 杆菌) 饲以高糖高脂饲料 10 天后， 入造模箱( 渴度湿度同 上)7 h 后， 鼠 尾静脉注 射大肠杆菌( 1 血 L ， 阳 9 体重) 。 同年， 伶丽6J亦对多因素温病湿热模型 进行研究， 并 探讨高温
9、高湿环垅， 同时给予高 脂高糖饲料， 并感染不同病 原微生物( 大肠杆菌和沙门氏菌) 等因素对大鼠红细胞功 能的影响， 结果发现， 在多因素作用下， 模型大鼠外周血中 红细胞C ， 受体花环数显著降低， 而红细胞免疫猫合物升 高。除去病源微生物作用， 大鼠在高糖高脂， 高温高湿环 境， 外周血中 红细 胞q受体花环数显著降低. 而红细胞免 疫钻 合物降低。将大鼠给予普通饲料， t于高温高湿环垅， 红细 胞C 3 受体花环数显著降低， 而红细 胞免疫钻合物水平 无显著变化。由此可以认为. 多因素复合造模更为成功。 但遗憾的 是， 研究者 仅观测了红细 胞功能的变化， 仅发现在 多因 素作用下红细
10、胞功能变化较为显著， 对大鼠 的一般症 状及病理变化并未进行观察比较。此后， 在以吴仕九为主 的团 队在湿热证的研究方面均主要采 用以 上两种多因家复 合 模 型L， 一 工 。 王瑾等9J对高塘高脂加造模箱( 温度35， 相对湿度 95%) 加鼠伤寒沙门氏菌、 高搪高脂加造摸箱加大肠杆菌、 高糖高 脂加造模箱、 高糖高脂加高温仓( 温度39逐渐上 升至42. 5 ， 相对湿度70%)4种不同造摸方 式进行比较， 发现单纯改变饮食 环境条件， 大鼠soD 活性改变， M D A 水 平无显著变化，3 种因索同时作用下， 大鼠 红细胞免疫功能 显著变化. 所以也提倡多因家造模。 2巧 7 学刊
11、万方数据 第 25 基第 10翔 2 0 0 7 年 1 0月 中华中医药学刊 AR CH I V E SOFT RA DrT I 心 1动 ALCHI NE S E V 。 】 . 乃 刊 认1 0 C 比 L 20 0 7 在 运 用多 因 家 复 合 造模方 面 ， 陈爽 白 等 IOJ还 参 照 广 州 tll 陕 西 1 12) 等 地 对 大鼠 湿 热模 型 的 复制 方 式 ， 与以 往 不 同， 利用饥饿结合饲梢脂加蜂蜜的方法损伤脾胃， 阻碍运 化， 制造内 湿环境。 具体方法为: 实 验前禁食24小时， 造 模 期间每日 上午以 乳状猪脂5 口 U只灌胃 ， 分2 次， 每次
12、间隔 1 . sk， 晚上以蜂蜜3 二 ul oog 体重滋胃， 于实验 第4日 晨， 开 始感 染鼠 伤寒杆菌，按l m Ul oog 体重灌胃， 第5日 将动 物 拿出造 模箱， 1于正常环境， 即温度( 25土 2 ) ， 相对湿度 50%一 印%， 正常条件下喂养， 于第10日处死。 发现模型 大鼠除症状改变外， 镜下观察到舌上皮过度角化， 形成球样 角质突起;，J、 肠私膜水肿， 部分脱落， 猫膜下血管充血和炎 细胞浸润; 肝细胞肿浊， 空泡变性， 脂肪变性. 肝窦充血， 门 静脉寮血， 脾窦充血扩张。 温 病湿热有湿热偏重的不同， 在临床治疗方面也 有差 异。为有利于湿热证的进一步
13、深人研究. 月翔、 郭明阳对沮 病湿热 偏重的动物模型进行了初步的 理论探讨 川， 认为如 果在病因模拟中将“ 中气实， 中气虚” 与“ 内湿， 外湿， 三因 家有机的结合， 就可能建立符合湿热偏重临床分型的两种 温病湿热证的动物模型。具体的方法分3步， 首先把实验 动物复 制成中气实， 中气虚模型; 然后将中气实、 中气虚模 型皿于 高温高湿环境， 再选择适当的生物感染因 子注 射或 灌胃。且在其理论的指导下， 对湿重于热型的动物模型进 行复制 lJ。实脸中主要分为湿重于 热组. 湿热组， 脾虚组 进行比较， 湿重于热组以高脂高糖饲料喂养， 同时每日 给予 2 甲L 大黄煎剂15. L 护
14、吨灌胃， 10天后t人模型复制环 境， 96h 后以鼠伤寒沙门氏菌10m ukg灌胃， 1 20h 后再加 强1 次s m口掩， 移出置入自然环境饲养1天。湿热组大鼠 除不用大黄灌胃外， 其余同湿重于热组。脾虚组， 于实验第 6 天以Z k 以L 生大黄煎剂15 口 口k 名 灌胃， 持续10天。 观察 各组大鼠 大部分体温升高， 便软， 有猫 液， 饮水少， 肛门红 肿 等， 在症状方面并无显著不同。虽湿重于热组用芳香化浊 法反证 后症状减轻， 在红细胞钠钾A 钾酶含量 上亦低于 湿 热组， 但由于未设湿热组的治疗对照， 思路虽然很好， 但结 果似乎并不能充分证明湿重于热模型的成功复制。此后
15、， 其对 摸型 的舌象组织病理学观察t 山即 弥补了上述实验的 不足， 发现在湿热组和湿重于热组的舌象之间存在明显差 异。舌象是中医诊断疾病证型的一个很重要的方面， 并且 在方法上也突破了以往动物实验不得不舍弃舌象的说法， 使中医证的动物实验模型日 趋成熟。 2 脾胃湿热证 脾胃 湿热与温病湿热相似， 更强调脾胃 功能的失调。 因此， 在动物棋型的复制方面也与温病湿热模型的复制有 许 多 共 同 点 。 刘 冬 梅 【 川 在 郭 金 龙 川 和 郭 宏敏 阴的 方 法 基 础 上进行改进， 采 用综合法造模， 将大鼠 分笼饲养于环 瑰潮 湿的房间内， 单日 饮食不予限量， 双日禁食(自由饮水
16、) ， 自 第5 天起每日 每只 大鼠 给予20%蜂蜜饮料50. L，不再 给其 他 饮水。第5 、 7 、 9 天， 每只大鼠 给予猪脂20 造模10天。 此 研究 在致病因素中综合模拟了饥饱失常、 过食肥甘及居 住 环境潮湿等病因联合造模， 并在光镜下观察大鼠胃 猫膜 病理组织变化，模型 组均可见胃猫膜炎性改变， 病变较重， 范围较广。 吕 冠华 lt根据温 病湿 热模型的 复制方法进行改造， 分 为外因湿热组、 内因湿热组、 内外因湿热组进行比较观察。 外因湿热组前10天普通喂养， 后5天放人温度( 32 土 2)， 相对湿度为95%的人工气候箱; 内外因湿热组将大鼠饲以 高脂高糖饮食，
17、 即在普通饲料喂养的基础上， 加用2 加 L 蜂蜜， 自 由水饮用， 且隔日 灌服油脂1 0/纯体重， 并与油脂 隔日 灌服10 m 口kg白酒， 共10天， 然后放人人工气候箱5 天。内因湿热组饲以高 脂高糖饮食加白酒， 其中油脂和白 酒隔日 交替， 方法同内外因湿热组， 共1 5 天。观察结果发 现， 内外因湿热组出 现与 临床脾胃 湿热证相类似的症状， 体 征和病理改变， 由此确立以湿热环境加高 糖高脂饮食加白 酒的综合造模方式， 与 上述刘氏 所复制模型相比， 增加了白 酒作为损伤脾胃的因素， 但忽略了 饥饱失常的发病原因。 文小敏【 19)则完全依据温 病湿热证的 造模方 式， 以高
18、 糖 高脂饮食( 在普通饲料中 混人20%猪油， 8 %蜂蜜) 加湿热 环境加伤寒沙门氏菌制造脾胃 湿热模型， 且在此基础上灌 服白酒作为湿偏重组， 观察各组大鼠出现大便塘泄或枯滞 症状， 且血液中的M 几 含量升高， C S 含量降低。 但研究 者对如何确定脾胃湿 热和湿偏重未给出充分的理由， 也未 能和沮病湿热模型做出适当的区分。 吕文亮 划在温 病湿热模型的基础上加苦寒药灌胃 复 制白兔脾胃湿热模型， 使湿热的病位主要确定在脾胃， 且用 燥湿运脾汤进行 复健。具体方法用纯种 新西 兰白兔灌服 油 脂加大黄末10 天后， 放人人工造棋箱 3 天( 温度36， 相 对湿度9 5 %) 后，
19、免耳静脉注射大肠杆茵l m UO . 5 吨体重。 3 大肠湿热证 延自 强2l研 究菌痢称猴模型在针灸治痢免疫功能研 究中的作用， 复制了称猴的菌痢模型， 由于其发病特征与大 肠湿热相似. 故郑 小伟翔将其归为腑病证动物模型中的大 肠湿热证模型。具体造模方法如下: 动物于上午空腹状态 下， 从笼中抓出， 以铁链将头部、 四肢捆缚于一端有半圆缺 口的固定板上， 使头部充分后仰， 仰卧位， 在唯镜监护下， 用 小儿导尿管鼻饲， 先以10 gNa H c o ， 溶液， 按每千克体重4 耐 灌胃5 面n 后， 再将培养24h的F 皿痢疾杆菌制成的生理盐 水混悬液， 按每千克体重450一 7 50亿
20、灌胃。可以看出这种 造模方式所用的动物价格昂贵. 且不易进行操作， 不宜在一 般实验研究中推广使用。 与 上 法 不同 ， 慕 澜 等 【 剑 参 考 杨 运 高 关 于 退 病 湿 热 证动 物模型， 采用饮食加气候环境加致病生物因子的方法造成 大鼠湿热动物模型。先以高糖高脂词料喂养 10天， 然后将 大鼠置于高温仓( 温度35， 相对湿度85%) ， 每天持续8 小时， 连续3 天后以产毒性大肠杆蔺( 1 0 ，/ mL ) 灌胃( Z m 口 只) ， 24b 后再灌注 1次。观察大鼠大部分出现食欲不振， 肛门 周围充血， 仅2 召出现 便薄， 且作者对大鼠 的大肠的病 理改变也未见 描
21、述。因 此， 由温病湿热模型认为是大肠湿 热模型的理由似 乎不太充分。基于此， 李学等1 洲对上述模 型进行了大鼠肠道病理变化的观察， 发现此模型除大部分 出现便塘外， 其舌苔白 腻或黄腻， 而且大 肠有明显的 病理改 变， 由此可以认 为此型大肠湿热模型的复制较为 成功。 4 肝胆湿热证 4 . 1 涅热黄疽 模型 曲长江” 一 刹在采用异硫氢酸苯酷灌 胃诱导大鼠肝 损伤的基础上结合中医高脂高 糖饮食加湿 热 环 境因素建 立了 中医阳黄证动物模型， 大鼠出 现巩膜黄染， 耳背 皮肤略显 黄色， 尾黄， 小便色黄等症状， 并用茵陈禽汤 治疗后症状级减。具体方法是把大鼠放人湿热造模箱内 ( 温
22、度28 一 32， 相对湿度95%) ， 每日 上午喂饲1 : 1 的 50%的葡萄 糖和 猪油脂混合液Z n 1 L 尸 1 009 灌胃 。第22天给 中华中医.一姗-学刊 万方数据 第乃券 第1 0期 2 0 0 7 年 1 0 月 中华中日 里药学刊 C H IN E S E A R C H IV E S O FI 下 叭 D rT ION A L C H IN E S E V o 1. 25 N a . 1 0 O d .2 00 7 中华中医药学刊 0 . 5 %的人 R叮灌胃1次( 将A 只口溶于色拉油中) 。 4 . 2胆 炭 湿 热 结 石 模 型 张 熙等 毛 27 洲借
23、鉴文 献 【剑胆 固 醉饲料 模型， 采用过食 辛辣油腻饲料饲养动物来复制胆囊 结石模型， 与结石形成的中医病机基本相符。共观察4组 模型， 给予不同的饲料配方， 普通饲料: 胆固醇: 辣椒: 动物 脂肪分别为1 00: 0 . 5 : 0 . 5 : 0 、 1 00: 0 . 5 : 0 . 5 : 0 ， 5 、 1 00: 0 . 5 : 0 5 : I J oo; 。 . 5 刃 . 5 : 1 . 5 ， 饲养4 周后， 处死家兔， 取材检测 各项指标。发现以1 00: 0 一 5 : 0 . 5 : 1 比例配制饮食的家兔形 成结石 较多， 死亡率低， 并观察有类似湿热证的症状表
24、现， 是较好的模型比例。 5 膀肤湿热证 孙建 实侧以 手 术加大 肠杆 菌感 染的方 式均或 小鼠 实验 性 肾盂肾炎模型，并用中药进行治疗后缓解。因其症状类似于中 医 的膀 胧湿 热证 型， 郑 小伟冈将其归人膀 胧湿 热证 模型。 具 体方法为: 以C 刃/ B L 系小鼠为实验对象， 术前禁水2 4 h ， 常规 消毒， 于下腹部正中切口1 二 ， 暴露右侧输尿管， 用缝合线将其 拉向右侧， 并固定于腹壁外， 挤出膀胧内残尿， 向膀肤内注人大 肠杆菌悬液约0.2 礼 ， 缝合腹部切口，创h 拆去右侧腹壁外输 尿管的固定线，正常清洁饲养。 6总结 分 析 综上所述，关于湿热的模型较多，
25、有20 余种， 并根据湿 热证型的不同造模方法有所差异。主要分为温病湿热模 型， 脾胃湿热模型， 大肠湿热模型， 肝胆湿热模型和膀肤湿 热模型。温病湿热模型的制作主要以高糖高脂饮食加湿热 气候环境加生物因子的方法运用为多， 生物因子又有鼠伤 寒沙门氏菌和大肠杆菌的不同; 还有人在此基础上加饥饱 失调的病因造模， 是一种新的尝试。脾胃湿热模型主要是 借鉴温病湿热模型的方法， 用高糖高脂饮食加湿热气候环 境加损伤脾胃的白酒或大黄来制作。大肠湿热模型则有两 种完全不同的造模方法， 一种是用称猴通过手术造成菌痢 病 另一种则运用温病湿热模型的饮食加气候加大肠杆菌 的模型。其中运用称猴的犯法较为复杂，
26、不易操作。肝胆 湿热模型一种是黄疽模型， 是用湿热环境加高糖高脂饮食 加 A T P P 灌胃， 另一种是胆结石模型是用胆固醉加辣椒加 脂肪配人饲料食用而复制。膀胧湿热模型的制作较少， 用 手术加大肠杆苗感染的方法。 关于造模选择的动物有大鼠， 小鼠， 家兔， 和称猴。比 较而言， 运用大鼠的 模型较多， 这可 能与大鼠易于 操作和代 表性较强有关。大多的造摸方法都是根据中医学关于湿热 的成因来模拟的， 用肥甘厚味、 饥饱失常、 嗜酒过度、 辛辣食 物或苦寒药物损伤脾胃作为内湿的病因， 用湿热环境形成 外湿， 加生物致病因子则符合现代关于湿热成因的研究， 使 模型的制造周期更短， 便于操作，
27、所以与中医学的理论较为 符合， 可以 作为湿 热证机理研究的基础。 但不足的 是， 有关 各型湿热模型复制的方法多为各家之言， 较少有经严格的 论证、 且重复性强、 公认的动物模型。 参考文献 【 1 郭金龙， 颜正华. 湿阻证病理造型的实脸研究【 J. 中医杂志. 1 兜8 ， ( 8 ) :犯 【 2 王新华. 沮病湿热证病理造型及实脸 研究【 J. 广州中医学院 学报， 1 ， 洲 J . ( 3 ) : 1 5 2 【 3 杨运商， 吴仕九，扬钦河 等. 沮病漫热证动物模型研制的方 法学比较【 J. 中国中医 基础医学杂志， . 卯8 ， 4 : 1 72 【 4 1 吴仕九， 杨运高
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