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1、实用临床医学2 0 0 ， 年第8 卷第8 期P r a c t i c a l C l i n i c a l M e d i c i n e , 2 0 0 7 , V o l 8 , N o 8 5 . 微动对 V E G F表达与影响骨折愈合的实验研究 雷鸣， 王敏， 肖保卫， 舒敏锐 ( 宜春市人民医陇骨科， 江西 宜春 3 3 6 0 0 0 ) 关扭娜: 徽动声 V E G F 裹达子 .折愈合 中图分类号。 R -3 3 2文橄标识码: B 文t编号:1 0 0 9 -8 1 9 4 ( 2 0 0 7 ) 0 8 -0 0 0 5 -0 1 骨愈合一直是骨科领域的研究重点，
2、近年来的研究发 现， 在骨折端稳定固定的前提下， 骨折端的徽动对血管的再 生及骨折愈合有明显的促进作用田。 创饰惠者血管生成活 性主 要与V E G F ( 血管内皮生长因子) 呈正相关， 而V E G F 的产生则反映了通过骨修复中血管生成和骨生成紧密偶联 的主要机制z 7 。本实验利用外固定架控制骨折端的不同时 间微动， 通过检侧骨折血管内皮生长因子的表达， 探讨徽动 影响骨愈合的机制。 1 材料与方法 11 材科 健康纯种新西兰大耳白兔3 0 只， 雌雄不限， 月龄1 0 个 月， 体重2 - 3 k g ( 上海医学 科学院动物中心提供) ; 微型外固 定架( 上侮交通大学机电设计研究
3、所设计， 宁波广慈医疗器 械厂制造) E F G免疫组化染色试剂盒( 武汉博士德生物试 剂公司) 。 1 . 2 方法 截骨模型的建立: 肌注抓胶酮基础麻醉、 戊巴比妥钠静 脉麻醉下， 白 兔双侧后肢， 在双侧胫骨前侧的两端 用钻头钻 孔， 各拧人螺钉 安放外固定支架。切开胫骨中段外侧皮肤、 皮下组织， 钝性分离肌肉， 攀雄骨干， 环行剥离骨膜后， 用线 锯横行截骨， 形成胫骨的缺损。 1 . 3 分组 3 。 只新西兰大白兔随机分成两组e A组( 固定组) : 胫骨 中段横断胫骨， 单臂外固定架固定， 解剖复位骨折端。B组 ( 徽动组) : 骨析端固定后， 使外固定架 中间杆有轴向移动。 术
4、后动物自由行走， 术后 5d ， 依靠体重使外固定架产生徽 动， 术后2 8 天处死实验动物. 1 . 4 观察方法 1 ) 大体解剖观察 观察骨断端愈合程度与 外骨痴的分 布， 然后沿骨折线垂直骨干长轴方向剖开， 观察骨痈的厚度 与髓内成骨情况。 2 ) X线检查: 术后第 1 4 天以骨折部位为中心照后肢 正侧位X线片。 3 ) 光 镜 将制作为光镜切片的标本放人甲醛中固定， 取出后脱钙、 常规制作病理切片. 4 ) V E G F的免疫组化: 标本常规固 定、 脱钙、 包埋完毕 后， 石蜡切片机将骨组织切成 5 厚切片， 裱片后常规烤 片、 脱蛤至水， 进行检沮。 1 . 5 统计处理
5、两组比 较采用t 检验， 所有数据的处理分析采用软件. 2 绪果 21 大体观察结果 术后2 8 d 两组骨廊数蛋均明显增多， B 组增加最为显 奢 骨痴桥接骨折端且质较硬奋 对照组骨痴略有增多， 质地坚 韧。 22 X线表现 术后2 8 d 两组骨痴增多， 密度增高， 边缘规则整齐， 以B 组显著， 且骨ffi d 桥接骨折端 截骨间隙逐渐模糊; 对照A组 骨痴略增多， 骨痴桥接不明显 23 组织学观寮 术后2 8 d ， 徽动组软骨细胞区域急剧减少， 相邻区域出 现少曼类骨质形成， 间质区域逐渐向狭长形过度， 周围多为 成熟的成骨细胞; 固定组以增殖软骨细胞为主， 混有纤维组 织.徽动组骨
6、痴较固定组骨痴明显丰富. 2 . 4 免疫学观察 固定组2 8 d 血管内皮细胞、 成纤维细胞、 成骨细胞阳 性 染色， 血肿中 炎性细胞V E G F 呈阳性染色食 微动组 血管内 皮 细胞、 成纤维细胞、 成骨细胞、 软骨细胞强阳性染色， 血肿中 炎性细胞V E G F 呈强阳性染色。 3 讨论 骨折断端微动刺激， 能加快骨折愈合， 一直是人们十分 感兴趣的课题。 虽然大量基础和临床研究已证实微动对骨 愈合的促进作用， 但微动促进骨愈合的分子生物学机制却很 少被触及。 早在 1 7 8 3 年， 就有学者已认识到血管在骨形成中的重 要性。 有学者指出 血管是骨发育和骨修复过程中骨形成的 贡
7、要成分。 然而在此之后的1 5 0 年中， 骨形成的研究主要局 限于具有骨形成能力的成骨细胞， 而对血管的研究甚少 s 7 近年的研究己 经证明， 影响骨折愈合的因素有很多， 但 目前一般认为血管方面因家可能是影响骨折修复的主要因 素之一， V E G F 在骨修复中的熏要性， 已有许多研究。 研究 表明， V E G F 可以 促进创伤后的血管生成和骨形成 + s 本实验中， 徽动组V E G F 表达在骨折后较固定组有显 若增加。 实施微动可能是通过增加 V E G F 表达， 使毛细血 管再生增加， 促进骨细胞、 软骨细胞生成， 增进骨痴生长。但 是， 总体来讲， 徽动对骨愈合的研究尚处
8、于研究阶段， 微动促 进骨折愈合的细胞学机制与分子生物学机制仍不十分清楚。 随若对其深人研究， 实验结果必将对临床实践具有指导作 用， 必将为骨折愈合的研究奠定坚实的理论基础， 为临床骨 折的治疗开辟新途径。 ( 下转第 9页) 万方数据 实用临珠医学 2 0 0 7年第8 卷第8 期P r a c t i c a l C l i n i c a l Me d i c i n e . 2 0 0 7 , V o l S , N o ll d e r ) 。因此笔者认为， T P可能通过促进细胞凋亡而 发挥抑制人冠状动脉平滑肌细胞增殖的作用。同 时， 有学者用大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞研究也 表
9、明， 雷公藤内醋醇能够剂量依赖性地抑制V S MC 增殖C r- t t ， 与本研究结果一致。雷帕霉素涂层支架 是一种在临床前瞻性研究中已经证实能显著减少冠 状动脉内支架术后再狭窄 t t a 的涂层支架， T a k e s h i 等 U s 用猪冠状动脉研究证明， 雷帕霉素涂 层支架也是通过抑制 V S MC s 增生， 减低血管内膜 厚度从而减少再狭窄的发生。 另外， 本实验通过We s t e r n - b l o t 检测7 T P作 用后细胞P 5 3 蛋白的表达， 结果显示: T P作用后， P 5 3 蛋白表达明显上调， 且随着 T P剂量增大， P 5 3 蛋白表达呈剂
10、量依赖性上升。这表明T P可能通过 P 5 3 表达上调诱导细胞凋亡的发生.王翔飞等(i s 研究也表明， 中药大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖 也是通过P 5 3 途径。另一方面， 唐蔚青等b 6 研究表 明将野生型P 5 3 基因导人兔主动脉平滑肌细胞后 也可以诱导其凋亡。但是细胞凋亡信号的传递途径 及调控机制十分复杂， 主要有死亡受体信号通路和 线粒体信号通路的参与。T P究竟是通过什么途径 诱导人冠状动脉平滑肌细胞凋亡， 有待进一步研究。 综上所述， 作者认为雷公藤甲素能够促进人冠 状动脉平滑肌细胞凋亡， 抑制其增殖， 可能具有预防 P T C A术后再狭窄的潜在价值。 但是体内外实验必
11、将存在一定的差异， 本实验仅仅研究了T P对体外 人冠状动脉平滑肌细胞的影响， 是否具有预防术后 再狭窄的作用有待进一步研究。 参考文献 1 2 N o b u y o s h i M, K i m u r s T , N o s a k a H , e t a l . R e s t e n o s i s a f t e r S u c c e s s f u l P e r c u t a n e o u s T r a n s l u m i n a l C o ron a r y A n g i o p l a s t y : S e r ia l A n g i o g r a p
12、 h ic F o l l o w - u p o f 2 2 9 P a t i e n t s 1 . J A m C o l l C a r d i o l , 1 9 8 8 . 1 2 ( 3 ) , 6 1 6 - 6 2 3 . S e r r u y s P W, D e J a e g e r e P . K i e m e n e ij F , e t a l . A C o m p a r i s o n o f B a l l o o n - e x p a n d a b l e - s t e n t I mp l a n ta t i o n w i t h B
13、a l l o o n A n g i o - p l a s t y i n P a t i e n t s w it h C o r o n a ry A rt e r y D i s e a s e . B e n e s t e n t S tu d y G ro u p J . N E n g l J M e d , 1 9 9 4 , 3 3 1 ( 8 ) , 4 8 9 - 4 9 5 . 习 岗艳云. 张正行. 留公蕊及其单体的药理作用研究进展 1 . 中 国药科大学学报. 1 9 9 5 , 2 6 ( 4 ) ; 2 5 2 - 2 5 6 . 4 L e f k o v
14、 i t 1 , T o p o l E j . P h a r m a c o l o g ic a l A p p ro a c h e s f o r t h e P r e - v e n t i o n o f R e s t e n o s i s a f t e r P e r c u t a n e o u s C o r o n a r y I n t e r v e n - t ic n J . P ro g C a r d i o v a s c D i s . 1 9 9 7 , 4 0 ( 2 ) , 1 4 1 - 1 5 8 . 5 R o s s RT h e
15、P a t h o g e n e s i s o f A t h e ro s c l e ro s i s : a P e r s p e c t i v e f o r 恤1 9 9 0 蚝 . N a t u r e , 1 9 9 3 , 3 6 2 ( 6 4 2 3 ) : 8 0 1 - 8 0 9 . 6 G l a g o y S . I n t i m a l H y p e r p l a s i a . V a s c u l a r M o d e l i n g , a n d t h e R e s t e n o s i s P r o b l e m 1 .
16、 C i r c u la t io n , 1 9 9 4 , 9 ( 6 ) 1 2 8 8 8 - 2 8 9 1 . 7 王人彭， 朱国王英， 王丽蕊. 雷公膝多成、 藻酸双醋钠对大鼠受 报动脉内膜增生的形响U . 中国介人心脏病学杂志, 1 9 9 6 , 4 ( 4 ) , 1 8 6 - 1 8 8 . 8 陈星. 汪洛. 丰美福， 等， 雷公膝红棠对大鼠血管平清肌细胞。 m y c 和血小板薄性生长因子的. R N A的影响J1 . 中国中西医 结合杂志, 1 9 9 8 , 1 8 ( 3 ) , 1 5 6 - 1 5 8 . 9 陆东风， 刘威， 李昭软. 雷公蕊内西醉对
17、大鼠血管平滑肌细胞增 殖及 D N A合成的影响 j . 岭南心血管病杂志, 2 0 0 2 , 8 ( 6 ) , 4 1 8 - 4 2 0 . 1 0 陶蓉， 陆林， 沈卫峰， 等. 雷公肺内醋醉对大鼠血管平滑肌细 胞增殖的 影响 j . 上海第二医科大学学报， 2 0 0 5 , 2 5 ( 8 ) , 7 8 0 - 7 8 3 . 1 1 刘威， 李昭吸， 陆东风 雷公膝内醋醉对血管平清肌细胞增殖 的影响 1 . 现代中西医结合杂志, 2 0 0 3 , 1 2 ( 1 4 ) , 1 4 7 0 - 1 4 7 2 . 1 2 S e r r u y s P W, D e g e
18、 r r e k i n M. T a n a b e K . I n t r a v a s c u l a r U l t r a - s o u n d F in d i n g s i n t h e Mu l t l c e n y e r , R a n d o miz e d . D o u b l e - b l in d R A V E L ( R a n d o m i z e d S t u d y w i t h t h e S i rol imu s - e l u t in g V e l o c - i t y B a l l o o n - e x p a n
19、d a b l e S e n t i n t h e T r e a t m e n t o f P a t i e n t s w i t h D e N o v o N a t i v e C o ro n a r y A rt e ry L e s i o n s ) T r ia l 1 . C i r c u l a - t i o n , 2 0 0 2 , 1 0 6 ( 7 ) , 7 9 8 - 8 0 3 . 1 3 M o u s s a I . L e o n M B , B a i m D S , e t a l . I m p a c t o f S i ro G
20、 m u s - e l u - t i n g S t e n t s o n O u t c o me i n D i a b e t ic P a t i e n t s , a S I R I US( S I R o t I m U S - c o a t e d B x V e lo c it y B a l l o o n - e x p a n d a b l e S t e n t in t h e T r e a t me n t o f P a t i e n t s w i t h D e N o v o C o r o n a ry A rt e ry L o- s o
21、 n s ) S u b s t u d y J . C i r c u l a t i o m2 0 0 4 . 1 0 9 ( 1 9 ) , 2 2 7 3 - 2 2 7 8 1 4 S u a u k i T , K o p i e G , H a y a s h i S . e t a l . S t e n t b a s e d D s l i v e ry o f S i rol i - mu s R e d u c e N e o i n t i t n a l F o r ma t i o n i n a P o r c i n e C o r o - n a r y M
22、o d e l J . C i r c u l a t i o n , 2 0 0 1 . 1 0 4 ( 1 0 ) , 1 1 8 8 - 1 1 9 3 . 1 5 王翔飞， 葛均波 孙爱军， 等. 大黄东通过P 5 3 途径抑制血管 平清肌细胞增殖的实验研究【 1 . 中华心血管病杂志, 2 0 0 6 . 3 4 ( 1 ) , 4 4 - 4 9 . 1 6 唐蔚青. 王抒， 黎健. 野生型P 5 3 基因导人诱导血管平清肌细 跑阅tUl . 中国 动脉硬化杂志, 1 9 9 7 . 5 ( 3 ) , 1 9 4 - 1 9 8 . ( 贵任编择: 钟荣梅) ( 上接第5页) 参
23、考文献: 1 喻盆M 张先龙， 曾炳芳. 低绷可控性徽动影晌长骨骨折愈合的 实脸研究 1 ， 中华创伤骨科杂志, 2 0 0 5 , 7 ( 8 ) , 7 4 5 - 7 5 6 . 幻 M id y V , P l o w T . P v e i D , e t a l. V a s c u la r E n d o t h e li a l G r o w t h F a c t o r I n d u c e D i f f e re n t i a t i o n i n C u l t u r e d O s t e o B l a s t s J . B it , t h e m B i o p h y s R e s C o m mu n . 2 0 0 1 . 1 9 9 ( 2 ) , 3 8 0 - 3 8 3 3 1 4 1 武永刚. 陈君长， 王坤正 等. 不同固定方式对骨痴中血管内皮 细生长因子表达的形响E l l . 中国矫形外科杂志, 2 0 0 1 , 8 ( 6 ) : 5 8 3 - 5 8 5 . 刘杰， 孙正义， ，曹， 等. 血管内皮生长因子对生物衍生骨复合 骨盆基质胞体内， 成骨的影响E l l . 中国临床康复 2 0 0 3 , 7 ( 1 1 ) : 1 6 2 2 - 1 6 2 4 . ( 责任编排: 刘大仁) 万方数据