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1、第2 9 卷第2 期河北医科大学学报V o l . 2 9 N o . 2 2 0 0 8 年3 月J O UR N A L O F HE B E I ME D I C AL UN I V E R S I T Y Ma r . 2 0 0 8 2 7 1 研究快报 河北汉族人群m i n i S T R D 1 7 S 9 7 4 , D 1 1 S 4 4 6 3 基因座复合扩增及遗传多态性研究 白雪， 丛斌 ， 李淑瑾， 谷建立， 侯志平， 刘宁 ( 河北医科大学基础医学院法医学系， 河北 石家庄 。 5 0 0 1 7 ) 【 关键词】 河北; 多态现象， 遗传; 聚合酶链反应 I 中图
2、分类号 R 3 9 4 . 5 1 文献标识码7 B 在法医 D N A检验中， 短串联重复序列( s h o r t t a n d e m r e p e a t , S T R ) 技术已 经广泛用于 个人识别和 亲子鉴定。但对于法医检验中一些微量以及降解的 检材， 因S T R技术扩增片段较长( 约 3 0 0 - 4 0 0 b p ) 不能成功得出结论， 会出现“ 优势扩增” 或者“ 无效扩 增” ; 而m i n i S T R分析技术是将引物设计得尽可能 靠近核心序列来缩短扩增片段长度( G1 2 5 b p ) ， 因 此将其用于高度降解D N A样本检测可提高个人识 别和亲
3、子鉴定的检测成功率。我们利用荧光 P C R 和毛细管电泳分析技术， 对河北汉族 1 1 8例无关个 体进行了两个mi n i S T R基因座的调查， 首次获得了 D 1 7 S 9 7 4 和D l I S 4 4 6 3 两个基因座群体遗传学数 据， 结果报告如下。 文章编号1 1 0 0 7 - 3 2 0 5 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 2 7 1 - 0 2 数为 9 5 * C 3 0 s , 5 5 0C 3 0 s , 7 2 C 4 5 s . 3 0 个循环 后， 6 0 C 4 5 m i n a 1 . 2 . 3 P C R产 物的 检测: 将扩增产物1
4、 p L 、 甲 酞 胺 1 2 p L 和内 标L I Z 5 0 0 0 . 5 p L ( 美国P r o m e g a 公司) 混合变性后， 应用A B I 3 1 0 0 全自 动遗传分析仪( 美 国A B I 公司) 进行自动检测， 确定样本的长度及基 因型。 1 . 2 . 4统 计 学 方 法: 用丫检 验 检 测男 女人 群等 位 基因频率差异， 用G e n e A L E X 6 统计学软件计算检 测基因座的各种法医学参数并判断调查结果是否符 一 合H a r d y - We i n b e r g 平衡定律。 2结果 1 材 料 与 方 法 1 . 1 材料: 1
5、1 8 份河北汉族健康无关个体构椽酸钠 抗凝血液样本由河北省中心血站提供。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 D N A提取: 采用天根生化公司血液基因组 D N A提取试剂盒提取。 1 . 2 . 2 复合扩增: D 1 7 S 9 7 4 , D 1 1 S 4 4 6 3基因座特 异性寡核昔酸引物由上海生工合成， P C R复合扩增 体系( 总体 积 为1 0 p L ) 含D 1 7 S 9 7 4 和D 1 1 S 4 4 6 3 5 0 p m o l 扭L 引物各1 p .L ， 模板1 n g , T a g D N A聚合酶 0 . 5 U， 1 0 X b u f f
6、e r 1 . 0 II L , 2 5 m m o l / L M g C 1 2 0 . 6 p .L , 1 0 m m o l / L d N T P 0 . 2 p L ; 在A B I 9 7 0 0 P C R 扩增仪中进行扩增， 9 5 0C 4 m i n预变性， 热循环参 对河北汉族人群 1 1 8份无关个体血样进行 D 1 7 S 9 7 4 和D 1 1 S 4 4 6 3 两个基因座的遗传多态性调 查， 均发现了 6 个等位基因， 两个基因座的杂合度 ( h e t e r o z y g o s i t y ) 分别为0 . 6 2 2 和 0 . 7 5 4 ;
7、个人识别率 ( d i s c r i m i - n a t i o n p o w e r ) 分别为0 . 8 7 8 和0 . 9 1 5 ; 非 父排除率( p o w e r o f e x c l u s i o n ) 分别为0 . 3 1 8 和 0 . 5 1 7 ; 多态信息含量( p o l y m o r p h i s m i n f o r m a t i o n c o n t e n t ) 分别为0 . 6 8 0 和0 . 7 4 0 , 3 讨论 收稿日 期 2 0 0 7 - 1 1 - 2 1 ; 修回日 期 2 0 0 7 - 1 2 - 0 5
8、基金项目河北省科技厅科学研究与发展计划资助项目 ( 0 3 2 7 6 1 9 6 D- 1 2 ) 作者简介白雪( 1 9 8 0 -) ， 女， 蒙古族， 河北承德人， 河北医科 大学基础医学院医学博士研究生， 从事法医血液遗传学研究。 ! 通讯作者。E - m a i l , b i n c o n g 2 6 3 . n e t S T R遗传标记已经成为法医D N A分型的一个 非常有价值的工具， 运用 P C R技术对 S T R基因座 进行复合扩增可以得到微量D N A样品的基因分 型。但是法医检案工作中， 很多情况下 D N A样品 已经高度降解， 由于 m i n i S T
9、 R扩增片段更小， 从而 明显提高了降解 D N A样品分型的成功率。美国、 日 本、 西班牙等国家相继报道T m i n i S T R D 2 S 4 4 1 , D 4 S 2 3 6 4 和D I O S 1 2 4 8 等基因座的群体遗传学数据 及其法医学应用价值。国内对 m i n i S T R位点的研 究较少， 且多是对联合D N A索引( c o m b i n e d D N A i n d e x s y s t e m , C O D I S ) 系统内的m i n i S T R位点进行 万方数据 Vo l . 2 9 2 7 2 第 2 9 卷第2 期河北医科大学学
10、报 2 0 0 8 年 3 月J O UR N AL O F HE B E I ME D I C A L UNI VE R S I T Y Ma r . No . 2 2 0 0 8 调查研究。但由于C O D I S系统内一些位点侧翼序 列不适合设计新的引物， 或者等位基因范围太大， 使 这些位点扩增片段长度无法变得更小， 或者核心重 复次数限制难以使这些位点的扩增片段长度缩短到 理想长度( 1 3 . 9 mm o l / L ， 作为糖尿病组， 另一组作为正常对照组。 收稿日 期 2 0 0 7 - 1 1 - 2 1 ; 修回日 期 2 0 0 7 - 1 2 - 2 6 基金项目 河
11、北省科学技术研究与发展计划项目( 课题编号 0 2 2 7 6 1 0 4 d -1 ) 作者简介 张志勇( 1 9 6 7 -) ， 男， 河北阜城人， 河北医科大学第 二医院副主任医师， 副教授， 医学博士， 从事口腔内科疾病诊治研究. ， 通讯作者 文章编号 1 0 0 7 - 3 2 0 5 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 2 7 2 - 0 2 1 . 2 组织学技术和标本制备: 糖尿病动物模型建立 后 1 , 3 , 6 个月三个不同时期处死动物， 从双侧裸颈 部切断， 取出下领骨， 并从正中联合分开， 将一侧下 领骨立即放人1 0 %福尔马林液中固定， 然后在乙二 胺四乙
12、酸液中脱钙2 周， 常规固定脱水， 石蜡包埋切 片( 厚5 l .m ) ， 分别进行H E 染色和免疫组织化学染 色， 光镜观察。 免疫组织化学染色使用兔抗人溶菌酶抗体， 羊 抗兔 I g G, A B C试剂盒( 均为美国 Z Y ME D公司生 产) ， 光镜观察。以细胞核或细胞浆出现棕黄色为阳 性， 以正常血清代替一抗为阴性对照。 2 结果 糖尿病大鼠除血糖升高外， 还表现为多饮、 多 食、 多尿、 尿糖阳性以及体质量增长缓慢。口 腔检查 未发现有明显的牙眼红肿糜烂和牙周袋形成。 正常对照组大鼠牙周膜排列整齐， 骨皮质与骨 小梁结构清晰， 骨小梁排列成网状， 未见破骨细胞出 现 。 糖尿病大鼠1 个月时即有牙槽骨的吸收破坏， 位于牙槽峙顶部， 范围较局限。破骨细胞数目 增多， 万方数据