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1、CJCM 中医临床研究 2009 年 Vol.(1) -5- 百令胶囊对肾小管间质纤维化 大鼠模型肾小管损伤的保护作用 李 暖 杨达胜 毕凌云 （新乡医学院一附院，河南 卫辉，453100） 中图分类号：中图分类号：R-33 文献标识码：文献标识码：A 文章编号：文章编号：1674-7860（2009）12-0005-02 【摘 要摘 要】 目的：观察百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠模型肾小管损伤的保护作用。方法：雄性 3 月龄 SD 大鼠 90 只， 随机分为： 对照组 （30 只） ， 模型组 （30 只） ， 预防组 （30 只） 。 以 2%腺嘌呤淀粉混悬液 150mg kg -1 d-
2、1 灌胃，连续 17 周，制作大鼠肾小管间质纤维化模型；预防组加以 1.5gkg -1d-1百令胶囊溶于生理盐水灌胃以 预防肾小管间质纤维化；对照组以等体积的 2%淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第 7 周、12 周、17 周时 随机处死 10 只大鼠，进行血肌酐 Cr、尿素氮 BUN，24 小时尿蛋白定量和尿 NAG 酶检测，光镜下观察肾组织的 病理变化，计算肾小管间质纤维化指数。结果：功能学变化：与对照组比较，各时相点模型组、预防组大鼠 尿蛋白、尿 NAG 酶、血 Cr 及血 BUN 均升高（P0.01） ，但预防组低于模型组（P0.01） ；模型组、预防组自身对 照各指标均较前一时相点
3、升高（P0.01） 。病理学变化：7 周时模型组、预防组即有肾小管间质损害；模型组、 预防组自身对照肾小管间质损害均较前一时相点加重（P0.01） ，但 7 周、12 周时预防组肾小管间质损害均较 模型组为轻（P0.01） ，17 周时两组间无显著差异（P=0.670） 。 【关键词关键词】冬虫夏草；肾小管间质纤维化；肾小管损伤；保护作用 以肾小管损伤、肾间质炎细胞浸润和纤维化为特 点的肾小管间质纤维化是多种慢性肾病进行性发展， 终致慢性肾功能衰竭的主要病理基础。慢性肾病的肾 功能损害及长期预后和肾小管间质损伤程度密切相 关。因而，对其发生、发展机制及其防治的研究越来 越受到研究者的重视。本文
4、旨在观察百令胶囊对肾小 管间质纤维化大鼠模型肾小管损伤的保护作用。现报 道如下。 1 材料与方法材料与方法 1.1 动物模型 选用雄性 3 月龄 SD 大鼠 90 只， 体重 160210g， 购自郑州大学医学部动物试验中心。大鼠适应环境 1 周后，随机分为：对照组（30 只） ，模型组（30 只） ， 预防组（30 只） 。参考文献1，将腺嘌呤以 2%淀粉溶 液溶解，制成混悬液，以 150mgkg-1d-1灌胃，连续 17 周，制作大鼠肾小管间质纤维化模型；预防组以 150mgkg-1d-1灌胃，同时以 1.5gkg-1d-1百令胶囊溶 于生理盐水灌胃，对照组以腺嘌呤相同体积淀粉和百 令胶囊
5、相同体积生理盐水灌胃，分别于实验第 7 周、 12 周、 17 周时各组随机处死 10 只大鼠。 取肾脏， 10% 多聚甲醛固定，光镜下观察肾组织的病理变化。处死 前取血， 并于各时相点前一天分别将各组 10 只大鼠放 入代谢笼中留取 24 小时尿液，进行生化指标检测。 1.2 生化指标检测 血清肌酐 （Cr） 和尿素氮 （BUN） 采用 BECKMAN CX-7 全自动生化分析仪测定； 24h 尿蛋白定量采用考 马斯亮蓝法；尿 NAG 酶采用比色法。 1.3 肾脏组织病理 肾组织 HE 染色和 Masson 特染，光镜观察。在 IDA-2000 高清晰度数码显微图像分析系统下计算肾 小管间质
6、纤维化指数。高倍镜（200）下随机选取 10 个不重叠视野测定小管间质纤维化面积与同视野小管 间质总面积的百分比，进行半定量评分2。评分标准： 0 分：无病变；1 分：25%；2 分：26%50%；3 分：50%。每张切片取 10 个视野的平均积分，再在 各组取平均值。 1.4 统计学处理 各组数据均采用均数标准差（）表示，组 间比较采用两组独立样本的 t 检验（双侧） ，指标间的 关系采用二元变量的非参数 Spearman 等级相关性检 验，由 SPSS10.0 统计软件进行统计学处理。 2 结结 果果 2.1 生化指标检测 与对照组比较，各时相点模型组、预防组大鼠尿 蛋白、 尿 NAG 酶
7、、 血 Cr 及血 BUN 均升高 （P0.01） ， 但预防组低于模型组（P0.01） ；模型组、预防组自身 -6- Clinical Journal of Chinese Medicine2009 年 Vol.(1) 对照各指标均较前一时相点升高（P0.01） 。见表 1 表表 1 各时相点两组大鼠尿蛋白、尿各时相点两组大鼠尿蛋白、尿 NAG 酶、血酶、血 BUN、Cr 值的变化（值的变化（） 组别 例数 时间 尿蛋白（mg/24h） 尿 NAG 酶（U/L） 血 BUN（mmol/L） 血 Cr（mol/L） 10 7 周 3.160.12 1.540.43 7.820.11 84.90
8、6.90 12 周 3.300.71 1.820.27 7.850.11 81.750.82 17 周 2.980.38 2.190.92 8.310.45 87.140.04 模型组 10 7 周 4.810.74a 6.550.55a 7.930.77 90.530.72 12 周 8.790.66a 16.600.69ab 10.480.48ac 101.271.01ac 17 周 11.850.40ab 30.140.70ab 24.130.82b 233.666.14ab 预防组 10 7 周 3.790.25 2.870.64ab 6.850.58 85.644.11 12 周 6
9、.810.44ab 10.040.48abc 8.020.18ac 90.800.69ac 17 周 10.900.94ac 26.782.06abc 23.383.51abc 228.907.93abc 注：a：与同时相点对照组相比 P0.01，b：与同时相点模型组相比 P0.01，c：与同组前一时相点相比 P0.01，d：与同组前一时相点相比 P0.05 2.2 肾脏组织病理改变 各时期对照组大鼠肾脏无病理改变。模型组和预 防组大鼠肾脏病理改变均呈加重趋势。实验 7 周时， 模型组和预防组大鼠肾脏肾小管扩张，间质单核细胞 浸润、水肿，可见间质纤维组织灶性增生。12 周时， 模型组和预防组肾
10、小管扩张明显，肾小管上皮空泡或 颗粒性变性，基底膜断裂，小管间质区域增宽，纤维 化明显。17 周时，模型组和预防组两组大鼠肾脏病理 检查均可见肾小管明显萎缩及消失， 间质广泛纤维化。 7 周、12 周时，预防组大鼠肾脏病理改变均较模型组 轻。17 周时，模型组和预防组大鼠肾脏病理改变无显 著差异（P=0.670） 。模型组和预防组大鼠肾脏病理改 变自身对照均较前一时相点加重。见表 2。 表表 2 各时相点模型组和预防组大鼠肾间质损害半定量分析（各时相点模型组和预防组大鼠肾间质损害半定量分析（） 组别 例数 7 周 12 周 17 周 模型组 10 1.100.23 1.830.39b 2.94
11、0.00b 预防组 10 0.730.73a 1.050.13ab 2.900.10b 注：a：与同时相点模型组相比 P0.01，b：与同组前一时相点相比 P0.01 3 讨讨 论论 本文采用腺嘌呤诱导大鼠肾小管间质纤维化模 型，7 周时即已出现肾功能改变，随着病程进展肾功 能持续恶化，17 周时肾功能明显减退，病理出现小管 萎缩，间质纤维大量增生，具有典型的肾脏病理学损 害和功能学改变，和楚非1报道相似。 来自肾实质本身的尿酶是帮助定位诊断肾脏（尤 其肾小管）损害的良好标记性物质。如 N-乙酰-D- 氨基葡萄糖苷酶（NAG）主要位于近端肾小管上皮细 胞溶酶体内，线粒体内也有少量存在，对小管间
12、质局 部炎症性损害尤其是自身免疫性损害时增高明显。在 以肾小管间质损伤的肾脏病中，尿 NAG 酶直接反映 肾小管间质的形态学改变2-3。本实验显示，模型组大 鼠尿中 NAG 酶 7 周时已有升高，至实验结束 17 周时 达最高水平。 百令胶囊是人工培养的冬虫夏草菌丝，经生物工 程方法制成的中药制剂，它与天然虫草的化学组成与 功效基本一致。有文献4报道百令胶囊可保护肾小管 Na+-K+-ATP 酶，减少尿 N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶， 促进肾小管上皮细胞产生并分泌表皮因子，增加其免 疫活性，从而促进肾小管上皮细胞的再生修复，可有 效改善损伤的肾小管功能，从而抑制肾小管萎缩和肾 间质纤维化，对延缓肾
13、功能进展有一定的作用。本实 验研究百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠模型肾小管 损伤的保护作用。预防组血 Cr、血 BUN、尿 NAG 及 24h 尿蛋白值在第 7 周时与模型组比较无明显差异， 第 12 周时均低于模型组， 并且可见细胞浸润、 小管细 胞空泡变性及细胞坏死减少。提示百令胶囊治疗对肾 小管上皮细胞有保护作用，能有效地改善大鼠的肾损 害，减轻肾小管间质纤维化。病程的末期（第 17 周） 预防组和模型组肾功能均减低，肾脏病理检查均可见 肾小管明显萎缩及消失，间质广泛纤维化，两者之间 无差异，提示百令胶囊可能在肾小管间质纤维化的早 期对肾脏有保护作用，但随着肾脏病变的加重，百令 胶囊亦不
14、能发挥其作用。 参考文献：参考文献： 1楚非,邹万忠,孙锁柱,等.大鼠肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转 化的研究J. 中华肾脏病杂志, 2003,19(1):10-14 2Bazzi C, Petrini C, Rizza V,et al. Urinary N-acetyl-glucosaminidase excretion is a marker of tubular cell dysfunction and a predictor of outcome in primary glomerulonephritis. Nephrol Dial Transplant, 2002, 17:1890-1896 3王瑞石,刘志红, 尹茹,等. 肾小管损伤标记物检测的临床意义及其影响因 素J. 肾脏病与透析肾移植杂志,2005, 14(2):110-116 4沈水娟.百令胶囊对肾病综合征患者肾小管损伤的保护作用J.浙江医学, 2002,24(8):497-498 编号：EA-9112441（修回：2009-11-25）