神经生长因子药效学研究.pdf

《神经生长因子药效学研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《神经生长因子药效学研究.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、第 1 6 卷 年 4月 第 2 期 中国实验动物学报 A C T A L A B O R A T O R I U M A N I M A L I S S C I E N T I A S I N I C A A p r i l , 2 0 0 8 V o l . 1 6 N o . 2 SS 3F #t戳 妈.， ， ， 边 神经生长因子药效学研究 李冬梅， 孙慧萍， 阎赋琴 ( 武警总医院药剂科， 北京1 0 0 0 3 9 ) 【 摘要】 目的 考察神经生长因子对视神经损害的疗效。方法腹腔注射二硫化碳致视神经损害的大鼠模 型， 给药组球后注射或肌内注射神经生长因子， 每天一次， 每周6 d

2、 ， 共计3 周， 空白对照组球后注射等量生理盐水， 于治疗前后测定大鼠 模式翻转 ( F R E P ) 和闪光视觉诱发电位。结果球后注射高剂量组大鼠在治疗 1 0 d 和2 0 d 时各波潜伏时比对照组有显著缩短， 而球后注射低剂量组和肌内注射高剂量组大鼠于治疗1 0 d 时F V E P 各波潜伏 时也显著缩短， 肌内注射低剂量组大鼠于治疗2 0 d 时F E P 的P 1 和P 2 波潜伏时也显著或非常显著缩短。结论神 经生长因子对大鼠视神经损害有明显的治疗作用。. 【 关健词】 神经生长因子; 视神经损害; 药效学; 疗效 中图分类号1 11 3 9 2 . 1 1 4 文献标识码

3、A 文章编号1 1 0 0 5 - 4 8 4 7 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 1 5 0 - 0 3 P h a r m a c o d y n a m i c S t u d y o n t h e T h e r a p e u t i c E f f e c t o f . N e r v e G r o w t h F a c t o r o n O p t i c N e r v e I n j u r y i n R a t s L l D o n g - m e i , S U N H u i - p i n g , Y A N F u - q i n ( D e

4、p a r t m e n t o f p h a r m a c y , G e n e r a l H o s p i t a l o f C h i n e s e P e o p l e s A r m e d P o l ic e F o r c e s , B e ij i n g 1 0 0 0 3 9 , C h i n a ) ( A b s t r a c t ) O b j e c t i v e T o i n v e s t ig a te t h e t h e r a p e u t ic e ff e c t o f n e r v e g ro w t h f

5、 a c t o r o n o p t ic n e r v e i n j u ry . M e t h o d s T h e m o d e l o f o p t i c n e r v e i n j u ry i n r a t w a s c re a t e d场 i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f c a r b o n d i s u l f i d e . T h e n e r v e g r o w t h f a c t o r w a s a d m i n i s t r a t e d t

6、o t h e r a t s o f e x p e r i m e n t a l g ro u p s 场 re t r o b u l b a r o r i n t r a m u s c u l a r i n j e c t i o n , re s p e c t i v e l y , o n c e d a i l y f o r 6 d a y s a w e e k , a n d k e p t o n f o r t h r e e w e e k s . T h e r a t s i n c o n t ro l g r o u p re c e i v e d

7、 s a li n e i n s t e a d o f N G F f o l l o w i n g t h e s a m e p ro t o c o l . T h e t u rn o v e r a n d f l a s h v i s u a l e v o l k e d p o t e n t i a l i n t h e r a t m o d e ls w e r e d e t e r m i n e d b e f o r e a n d a f t e r d r u g a d m i n i s t r a t i o n . R e s u l t s

8、 S i gn if ic a n t d iff e r e n c e w a s n o te d o n th e 1 0 “ a n d 2 0 “ d a y s in t h e g ro u p s t re a t e d w it h h ig h d o s e o f n e r v e g ro w th f a c t o r b y r e tr o b u lb a r i n j e c t i o n v s . t h e c o n t ro l g ro u p . T h e F V E P a n d w a v e i n c u b a t i

9、 o n t i m e o f l o w - d o s e g r o u p 场r e t r o b u l b a r i n j e c t i o n a n d t h e h i g h d o s e g ro u p b y in t r a m u s c u l a r i n j e c t io n w e re s ig n ifi c a n tl y s h o r te r a t 1 0 “ d a y o f N G F tr e a tm e n t . T h e F V E P a n d P I , P 2 w a v e s i n c u

10、 b a t io n t i m e w a s s h o r te n e d s i gn if i c a n t l y o r h ig h ly s i gn ifi c a n tl y a t 2 0 “ d a y o f N G F t r e a tm e n t . C o n c lu s io n s N e r v e g ro w t h f a c to r h a s s i gni fi c a n t t h e r a p e u t i c e ff e c t o n o p t i c n e r v e i n j u ry i n r a

11、 t s . K e y w o r d s N e r v e g ro w t h f a c t o r ; O p t ic n e r v e , i n j u ry ; P h a r m a c o d y n a m ic s ; T h e r a p e u ti c e ff e c t 神经生长因子( n e r v e g r o w th f a c t o r , N G F ) 是最早 发现的神经细胞生长因子。7 0年代确定了它的氨 基酸组成及顺序， 成为目前唯一被阐明结构的神经 细胞生长因子， 它兼有神经元营养和促突起生长的 双重效应， 对神经元的生长、 发

12、育、 分化及再生和功 能性表达均具有重要的调控作用 1 - 3 3 。 本试验主要 观察神经生长因子对视神经损害的疗效， 限于目前 国内外的药理实验技术水平， 尚无经典的视神经萎 缩模型可以直接应用于视神经的药理实验， 本药效 学研究主要在二硫化碳所致视神经损害的大鼠模型 进行实验 ， ， 观察治疗前后视觉诱发电 位的变化， 视 觉诱发电位是反映从视网膜至皮层整个视系统的完 整功能。可作为观察神经生长因子对受损视神经 的疗效的指标。 作者简介l 李冬梅， 女. 从事神经生长因子研究。 1 材料与方法 1 . 1 主要试剂 注射用鼠 神经生长因子 ( N G F ) 冻干粉针剂， 规 格: 每

13、支1 0 f ig ， 比 活 性) 1 x 1 护 A U / m g ， 由 北京昭 衍 新药研究中民、 武警总医院制剂室提供。二硫化碳 万方数据 中国 实 验动 物 学报2 0 0 8 年4 月 第1 6 卷 第2 期 A c t a L a b A n i m S c i S i n , O c to b e r , 2 0 0 8 , V o l . 1 6 . N o . 2 1 5 1 ( 分析纯) ， 戊巴比妥钠 ( 注射用) 。 1 . 2 动物分组 S p r a g u e - D a w l e y ( S D ) 大鼠5 0 只， 体重2 5 0 一 3 0 0 9

14、， 由 北京医科大学实验动物中心提供( 合格证号: S C X K 京2 0 0 2 0 0 0 5 ) 。将大鼠随机分成5组: 分别为 球后注射高剂量组、 球后注射低剂量组、 肌内注射高 剂量组、 肌内注射低剂量组及空白对照组， 每组 1 0 只， 雌雄各半。 1 . 3 方法 1 . 3 . 1 视神经损害模型: 将各组大鼠在戊巴比妥 钠( 3 0 m g / k g 2 %溶液) 麻醉后， 暴露颅骨， 按下述部 位埋人自 制不锈螺纹电极 ( 直径 I m m ) ， 引导电极位 于前自后6 m m ， 矢状缝右侧旁开3 . 5 m m处; 参电极 位于前自2 m m处， 矢状缝右侧旁开2

15、 m m处， 埋人 电极后， 用自凝牙托粉固定在颅骨上。大鼠手术后 2 周描记两种视觉诱发电位， 然后按3 0 0 m g / k g 剂量 腹腔注射二硫化碳油溶液 3 周， 直到出现视觉诱发 电 位 潜 伏 时明 显 延 长 2 ) 0 1 . 3 . 2 给药: 将视神经受损大鼠随机分为5 组。球 后高剂量组: 球后注射N G F 1 0回k g ; 球后低剂量 组: 球后注射N G F 4 y g / k g ; 肌内 注射高剂量组: 肌内 注 射N G F 1 0 p g / k g ; 肌内注射低剂量组: N G F 4 p tg / k g ; 空白对照组， 球后注射等量生理盐水，

16、 每天1 次， 每周6 次， 共治疗3 周， 于治疗 1 0 d 和2 0 d 分别描 记视觉诱发电位， 判断治疗效果。 1 . 3 . 3闪光视觉诱发电位 ( fl a s h v i s u a l e v o k e d p o t e n t i a l , F V E P ) 测定: 将清醒已埋好电极的大鼠进 行固定， 置于视觉信号发生器荧光屏前2 0 c m处， 给 以闪光频率每秒 1 次， 刺激过程为 1 0 m s ， 分析时间 5 0 0 m s ， 平均叠加5 0 一 1 0 0 次， 滤波2 一 1 0 0 H z . 1 . 3 . 4 模式翻转诱发电信 ( P R E

17、 P ) 测定: 其视刺激 信号为宽9 c m的垂直条栅， 黑白转换每秒2 次， 其 他条件同F E P . 1 . 3 . 5 统计学分析: F E P和 P R E P 潜伏时系指刺激 信号起始至出现N 1 , P 1 , N 2 或P 2 峰 ( 波) 所需的时 间 ( m s ) ， 来表示各波的潜伏时。对所测结果做 F 分析和: 检验， 对各组间两两对比， 观察神经生长因 子对受损神经的治疗作用。 2 结果 2 . 1 闪光视觉诱发电位 ( F V E P ) 测定 治疗前后大鼠 体重和一般状况无明 显变化。 球 后或肌内注射神经生长因子对大鼠闪光视觉诱发电 位测定结果 ( 表 1

18、) 表明: 球后注射高剂量组 ( N G F 1 0 4k g ) 在治疗后1 0 d 时， 各波潜伏时均比 对照组 时显缩短 ( P 0 . 0 5 ) ， 于治疗2 0 d 时 P 2 和N 2 波潜 伏时缩短非常显著 ( P 0 . 0 1 ) ; 球后注射低剂量组 ( N G F 4 Wk g ) 于治疗1 0 d 时P l , N 1 和P 2 潜伏时均 有显著缩短 ( P 0 . 0 5 ) ， 而肌内注射低剂量组各波 潜伏时较各波潜伏时未见显著差别， 治疗2 0 d 时， 球后低剂量组和肌内高剂量组与对照组比较各波潜 伏时未见显著差别; 但是肌内注射低剂量组于治疗 2 0 d 时

19、 P 1 潜伏比对照组有明显缩短 ( P 0 . 0 5 ) , P 2 潜伏时有非常显著缩短( P 0 . 0 1 ) . 2 . 2 模式翻转诱发电信 P R E P ) 测定 从神经生长因子对视神经受损大鼠模式翻转诱 发电位( p a t t e rn r e v e r s a l e v o k e d p o t e n t ia l , P R E P ) 的测 定结果 ( 表2 ) 表时， 球后注射神经生长因子的高剂 量组( 1 0 回k g ) 大鼠 于治 疗1 0 d 时N 1 , P 1 和N 2 各 波潜伏时比对照组有显著的缩短 ( P 0 . 0 5 ) ， 而治 疗

20、2 0 d 时， P 1 和N 2 波潜伏时有非常显著的缩短( P 0 . 0 1 ) ， 而 N 1 潜伏时仍为显著差别 ( P 0 . 0 5 ) 0 肌内注射高剂量组大鼠仅见N 1 潜伏时比对照组有 显著差别 ( P 0 . 0 5 ) ; 而球后低剂量和肌内注射低 剂量组各波潜伏时与对照组比较未见显著差别。 3 讨论 二硫化碳可致视神经损害， 二硫化碳染毒大 鼠的视经束肿大， 充满结构破坏的微丝， 微丝和肌动 蛋白运转加速等病理变化， 视觉诱发电位可以反映 视神经传导径路完整性和受损状况， 因而采用P R E P 和F V E P 两种视觉诱发电位各波潜伏时反映视觉神 经的功能变化。

21、从神经生长因子注射的治疗中可以见到球后注 射的高剂量组( N G F 1 0 jA g / k g ) 两种视觉电位各波潜 伏时有显著或非常显著缩短， 显示受损视神经功能 的恢复， 而且随注射时间延长而愈明显。而球后注 射低剂量组 ( N G F 4 回k g ) 和肌内注射高剂量组 ( N G F 1 0 闻k g ) 在治疗2 0 d 时闪光视觉电位的Pi, N 1 和P 2 波潜伏时也有显著和非常显著缩短。由此 表明， 球后注射的高剂量神经生长因子可明显改善 视 神 经功能; 但低剂量( N G F 4 P g / k g ) 和 肌内 注 射 高 剂 量( N G F 1 0 闻k g

22、 ) 和 肌内 注射低剂 量( N G F 4 ji g / k g ) 仅显示一定的治疗作用。 万方数据 1 5 2中国实验动物学报2 0 0 8 年4 月 第1 6 卷第2 期 A c ta L a b A n i m S c i S i n , O c t o b e r , 2 0 0 8 , V o l . 1 6 . N o . 2 表 1 T a b . I 组别G ro u p 各波潜伏时神经生长因子对受损视神经大鼠闪光诱发电位 ( F E P ) 的影响 ( m a , x t s , n 二 1 0 ) T h e E ff e c t s o f n e r v e g

23、r o w t h f a c t o r o n fl a s h v i s u a l e v o k e d p o te n t ia l a n d w a v e s in c u b a ti o n t i m e ( 1n 4 ， 妥 t ， ， n = 1 0 ) i n t h e r a t s P1NI P 2N2 基础值B a s e l i n e 对照 C o n t ro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . 瓜 肌注高剂量 H i 户d o s e , i . m . 球后低剂量L o w d o s e , r e t r o b u l

24、 b a r i n j . 球后高剂量H ig h d o s e , r e t ro b u lb a r i n j . 对照C o n t ro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . m . 肌注高剂量H i g h d o s e , i . m . 球后低剂量L o w d o s , r e t ro b u l b a r i n j . 球后高剂量H ig h d o s e , r e t ro b u lb a r in j 对照C o n tro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . m . 肌注高剂量H i g h d o s e ,

25、 i 二 球后低剂量L o w d o s e , r e tro b u l b a r i n j . 球后高剂量H i g h d o s e , r e tro b u l b a r in j 2 7 . 21 3 . 93 3 . 4 t 4. 04 2 . 5 t 3 . 65 7 . 6 t 3 . 5 3 4 . 4:5 . 3 3 6 . 6 t 4 . 8 3 4 . 2 t 4 . 0 3 2 . 9 t 6 . 6 3 5 . 8 t 5 . 5 4 0 . 6 t 4 . 4 4 1 . 3* 5 . 0 4 0 . 2 :3 . 0 3 7 . 5 t 6 . 3

26、 4 1 . 7t 4 . 6 5 1 . 5 t 5 . 7 5 1 . 5 t 3 . 6 4 9 . 3:t 2 . 9 4 7 . 4 t 6. 4 5 1 . 4 t 3 . 0 6 5 . 6 t 4 . 4 6 6 . 1 t 2 . 2 6 3 . 4 t 4 . 2 酬 . 9 t 9 . 9 肠 . 8 t 4 . 7 1 0 d a y s 4 3 . 3 t 6 . 9 3 8 . 9 t 4 . 8 3 8 . 0:t 4 . 6 3 7 . 8 t 3 . 4 3 8 . 01 3 . 5 “ 5 2 . 8 t 8 . 0 4 8 . 3 t 3 . 0 4 7

27、. 8 t 2 . 1 4 8 . 3 t 1 . 9 4 7 . 2 14 . 0 6 5 . 4 t 8 . 夕 印 . 2 t 3 . 3 印 . 8 t 3 . 2 印 8士1 . 8 5 9 . 0 t 4 . 8 治疗 2 0 d T r e a t me n t f o r 2 0 d a y s 3 7 . 0 t 7 . 0 3 3 . 6:t 4 . 7 3 2 . 2 t 5 . 0 3 2 . 6 1 4 . 0 3 1 . 5 士 5 . 4 3 3 . 714 . 3 2 9 . 2 t 3 . 5 3 0 . 7 t 3 . 1 . 3 3 . 4 t 5 . 6

28、 3 0 . 4土4. 9 3 8 . 8 t 5 . 3 3 5 . 6 t 3 . 1 3 7 . 0 t 4 . 1 3 7 . 8 t 6. 6 3 4 . 6 t 3 . 9 4 9 . 015 . 2 6 0 . 715 . 4 4 5 . 8 1 2 . 6 “5 7 . 2 13 . 3 4 7 . 212 . 0 5 9 . 412 . 6 4 6 . 714. 8 5 8 . 316 . 4 4 3 . 2 1 4 . 3 5 4 . 2 1 5 . 6 二 . P 0 . 0 5 . P 0 . 0 1 . N o t e : c o m p a r e d w it h

29、 t h e c o n t ro l g r o u p 表2 各波潜伏时神经生长因子对视神经大鼠受损大鼠 模式翻转诱发电位 ( P R E P ) 的影响( m s , x 1 a , n 二 1 0 ) T a b . 2 T h e E ff e c t s o f n e r v e g r o w t h f a c t o r o n t u rn o v e r a n d p a t t e r n re v e r s a l e v o k e d p o t e n t i a l a n d w a v e s i n c u b a t i o n t i m e

30、( rrt a , x t : ， n 二 1 0 ) in t h e r a t m o d e ls 组别 G ro u pN1P1N2 基础值 B a s e l i n e3 0. 2 1 5 . 0 3 7 . 7 1 5 . 3。4 2 . 5 1 3 . 6 对照 C o n t ro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . m . 肌注高剂量H i g h d o s e , i . m . 球后低剂量L o w d o s e , r e t ro b u l b a r i n j e c t io n 球后高剂量H i g h d o s e , re t

31、 ro b u l b a r in j e c t i o n 对照 C o n t ro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . 二 肌注高剂量H ig h d o s e , i . 二 . 球后低剂量L o w d o s e , m tm b u l b a r i n j e c t io n 球后高剂量H ig h d o s e , re tro b u lb a r in j e c t io n 对照 C o n t ro l 肌注低剂量L o w d o s e , i . m . 肌注高剂量H i g h d o s e , i . m . 球后低剂里L

32、o w d o s e , r e t m b u l b o r i n j e c t io n 球后高剂量H ig h d o s e , re t ro b u lb a r i n j e c t i o n 治疗前 B e f o re 廿p 润 二， 、 户 叮 龟 4 2 . 8 1 5 . 0 4 7 . 2:t 9 . 2 4 2 . 9 1 6 . 9 4 4 . 3:t 6 . 6 4 3 . 6 1 6 . 5 5 1 . 7 1 5 . 1 5 3 . 3 1 8 . 8 5 0 . 5 t 7 . 5 5 1 . 8士6 . 7 5 0 . 3 t 5 . 4 5

33、 8 . 5 t 9 . 2 6 2 . 9: t 1 0. 4 5 8 t 5 . 4 6 0 . 3 t 7 . 9 5 8. 6 t 5. 4 治疗 1 0d T r e a t me n t f o r 1 0 d a y s 4 1 . 4 t 7 . 9 4 1 . 3土8 . 0 4 0. 2 t 5 . 7 3 8 . 2* 4 . 5 3 4 . 9 t 4 . 9 4 9 . 7: t 6 . 9 4 8 . 9 t 7 . 5 4 8 . 8 t 4 . 7 4 7 . 7 t 3 . 7 4 3 . 2 t 4 . 7 “ 5 5 . 9 t 6 . 0 5 4 . 9

34、 t 7 . 5 5 6 . 6: t 6. 5 5 5. 0 t 2 . 7 5 1 . 3土6 . 3 治疗 2 0 d T r e a t me n t for 2 0 d a y s 3 8 . 4 t 4 . 3 3 5 . 5 t 5 . 1 3 6 . 5 t 3 . 5 3 6 . 5 t 4 . 0 3 4 . 3 士 4 . 2 4 6 . 3 t 3 . 8 4 4 . 5 t 5 . 5 4 5 . 0* 2 . 2 4 4 . 8 t 3 . 7 4 1 . 0 t 4 . 5 . 5 3 . 7 t 3 . 7 5 3 . 5: t 6 . 0 5 3 . 0 t

35、2 . 2 5 1 . 3 t 4 . 5 4 7 . 3 t 4 . 4 二 注: . P 0 . 0 5 . “ P 0 . 0 1 . N o t e : c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p 参考文献 黄才国， 魏善建， 姜 华， 等. 神经生长因子对大鼠 视神经损伤 的保护作用 J l . 中国 临床康复， 2 0 0 4 , 8 ( 2 5 ) : 5 4 0 9 一 5 4 1 1 . 李文生， 姜德咏. 神经生长因子对叫噪美辛诱导人胚胎视网 膜色素上皮细胞凋亡的保护作用 J J . 中华眼底病杂志， 2 0

36、0 3 , 1 9 ( 1 ) : 3 8 一 4 1 . 徐清. 赵冬梅. 黄飞， 神经生长因子神经保护作用的研究进 展f J J . 滨州医学院学报， 2 0 0 7 , 3 0 ( 1 ) : 4 3 - 4 5 . 4 F a x D A . E l e c tr o p h y s i c a l t e e s y s te m T o x i e o l gy ( C L . M i t c h e l l i n n e u ro t o x i c o l o gy, N e r v o u s E d . ) M J R a v e n P r e s s , N e w y o r k , J例 一3 0 6 . 5 环境卫生基准1 0 . 二硫化碳I S . 北京: 中国环境科学 自JJesesJ ，二， r.Lr.L 出版社， 1 9 8 9 , 3 7 一 4 0 . 3 3 收稿日期】 2 0 0 7 - 1 1 - 2 3 万方数据