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1、粉防己碱上调 !“#$ % 表达抑制大鼠肝星状细胞活化 陈源文，李定国，吴建新，陈颖伟，陆汉明 （上海第二医科大学附属新华医院消化内科， 上海! “#$“） 收稿日期： “#% :8? 0A； 李定国 （($%. 0R5A9S :A0115A0 S011，GHI） 活化并 转化成为肌成纤维母细胞 (。活化的 GHI 是转化 生长因子2!(（AE5:T+E89M ME+UA; T5SA+E2!(，/J42!(） 的主要来源， /J42!(通过自分泌和旁分泌作用， 又 成为加速 GHI 活化、 促进 GHI 大量合成细胞外基 质 （06AE5S011。此外， /J42! ( 异常的 表达及其受体后
2、信号转导的异常， 还参与维持 GHI 持续活化和高功能状态 “ Q%。H85F: 蛋白是 GHI 内 /J42! 受体后信号转导的主要信号分子， 其中 H85F ) 是唯一的负反馈调节因子。有研究显示， GHI 活 化后 H85F ) 表达下降， 负反馈作用减弱 “。上调 H85F) 的表达有助于减少 /J42!(分泌、 恢复正常的 /J42! 信号调控、 抑制 GHI 活化并阻断其高功能状 态 3， .。 动物实验和临床研究证实， 粉防己碱 （/0AE52 FE90，/0A） 能显著改善肝组织炎症， 减少 7IL 沉 积， 抑制肝纤维化 )， 这一作用可能与 /0A 对 GHI 的直接抑制作
3、用有关 。如前所述， /J42! 及其 H85F: 信号通路是调节 GHI 正常功能的关键因子 之一。目前国内外的研究仅仅发现较高浓度的 /0A （ “8+1K 8 多克隆抗体均购自 H5A5 IE.3中国药理学通报! !“#$%.1?A，BC5）的 DE(E 调整细胞浓度为 F!G% ） 。其中 5A90 M 采用 Q.-K0.Z2 程式， 即退火温度 #) 始， 每个循环退火温度降低 !“ #， 共 ! 个循环； 再退火温度为 #L H! 个循 环。磷酸甘油醛脱氢酶 （$:,-1?9:01K,01 K.K981 01K,0?.$1291，UTYD4） 基因作为内参照， 扩增条件 与各待检测
4、目的基因相同。产物经质量分数H *琼 脂糖凝胶电泳， 5A9?8 X=1ZI Y6 图像分析系统 （复日 科技， 上海） 进行密度定量。以各目的基因与 UTY/ D4 吸光度 （!） 比值表示 AV+T 水平。 !O “O :.8 检测 “/5ET、 5A90 L 和 5A90 M 的 表达P取培养于R孔板细胞， 分组及处理同上。 () !% *+,-+./+0 12 31456+7(0+ /8(9. 7+(/:91. 3796+70 (.; (634929/(:91. /1.;9:91.0 U121Y?=A1?T2219:=2$6,-:1Y?.0-8I ; QUB/# $9-8-8-9-8$
5、-99$9- -9$9998-98-$9$9- #L， L! L!L! Q#V$ 89$-9$-9$9-99-999$9-9 -9$99$9-899$-988 #L， L! L#JJ Q#V% -88-$-$9$8-89-99 -8$98$9-$8$-89$8$9$ #J， J! L!HRM 5A90 L $-888$9$-8$8-89-9 -$9$-8889-8-9$8 #R， J! L#HHR 5A90 M -8$8$88$-8$8$998-889- $-8$89$-8888-989$8 #)$#LL!R! UTYD4 -98$8-89-9-$88-9$8 $-899$-9$88$8$8$
6、- IILJG VWYT 蛋白裂解液 （主要成份为体积分数 * Q?=/ 8.2/!、 质量分数 * +.=018 Y/J!、 !“ # * 脱氧胆 酸钠、 AA.:% 98;9 =,9,# !;9#,C#=9;# !892,S ; %“ )$*+! ,L%! “)“1 S ; %“ J;） 组的#S 88 U和#S 7= 倍 （$ R;S ;） ； 而 )!-“、 )!- #、 ./01 # /-VM 表达无明显变化。给予 $L W X, )$*+!,作用后， )!-“./01 # 及 ./01 2 /-VM 表达均明显上调 （$ R ;S ;） ， 而 )!-#/-VM 表达 无变化。)?
7、5 对 )$*+!,这一作用的影响是： )$*+!, /-VM 下降82S :=U （$ R;S ;） ， ./01 2 /-VM 上升 近# 倍 （$ R;S ;） ， 但不影响 )!-“、 )!-#及 ./01 # 转录水平 （)0H 8） 。 $C D% !+ 作用下 !=;E、 -“5 F 和 -“5 G 蛋白 表达的变化% Y?F5?%4 H6; 0Z； $9 （） ! “#， 而更高浓度的 $% “345! “#以下的 $%/( ， #$ （?） ： ?9 :5 97A“ BC，D%# 4E，B.# FC5 G“$-%#0-)#“ (-“H“#$/ $)/1“ )#),)$.- .
8、+ !“$%5 9?B$.(% T，“#“/ ，K#/.-3“ Z ,- #(5 X“#.!)* ，9a 8 %#0 Sa 6 “!.:,4= G“$-%#0-)#“ 7a :Sa 6 “!.417/=G“$-%#0-)#“ %$ &.U“- *.#*“#$-%$).#/ %/ % /)3#)+)*%#$ )#),)$)#3 “+“*$ .# *1&$1-“I%*$)H%$).# %#0 GXYI!9I/$)!1&%$“0 %*$)H%$).# .+ -%$ CBW/5 G)/ “+“*$ .+ $“$-%#0-)#“ !%2 ,“ %/.*)%$“0 U)$ $“ 1(I-“3I 1&%$).# B!%0 ? U)* )# $1-# ,&.*Q/ GXYI!9“L(-“/).# %#0 )$/ 0.U#/$-“%! /)3#%&)#35 D+E F7-04： $“$-%#0-)#“；“(%$)* /$“&%$“ *“&；$-%#/+.-I !)#3 3-.U$ +%*$.-I!9；B!%0/；B!%0 ?；/)3#%& $-%#/I 01*$).# ?8中国药理学通报= 5“+6,0, !“#$%#&(3+&#( CA(,-+6= 677 T%2； #& （）