糖尿病小鼠胚胎早期发育的差异表达基因.pdf

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1、2 0 0 9 年1 2 月 中国比较医学杂志December2009 第1 9 卷第1 2 期C H I N E S EJ O U R N A LO FC O M P A R A T I V EM E D I C I N EV 0 1 1 9N o 1 2 “镕盼8 啕 g 研究报告$ 岛、：镕、口 ；i 、出 糖尿病小鼠胚胎早期发育的差异表达基因 陶凌云1 2 ，倪丽菊1 2 ，胡建华1 2 ，高 诚1 2 ( 1 上海实验动物研究中心；2 上海市计划生育科学研究所，上海2 0 0 0 3 2 ) 【摘要】目的利用小鼠糖尿病模型，探讨母体糖尿病环境对早期胚胎基因表达的影响。方法I C R

2、雌性小 鼠腹腔注射1 5 0m g k g 剂量S T Z 诱发糖尿病，与正常雄鼠交配受孕，取1 4d 胎龄的胚胎，提取胚胎的总R N A 。将C y 3 和c v 52 种荧光分别标记到实验组和对照组的R N A 上，制成R N A 探针，并与包含2 48 5 9 个基因的表达谱芯片进行 杂交及扫描，重复3 次实验，采用A g i l e n t 扫描仪进行扫描软件读取数据。结果筛选出差异表达基因3 9 7 个，其中 有3 2 8 个基因在实验组表达量比对照组大2 倍，6 9 个基因在实验组表达量比对照组小2 倍。结论母体糖尿病环 境能影响早期胎儿的基因表达，通过上调代谢相关基因和下调发育相

3、关基因影响小鼠胚胎的早期发育。为深入探 讨糖尿病胚胎病理和代谢疾病的分子机理提供了基本数据和研究的方向。 I 关键词】小鼠糖尿病胚胎；基因芯片；差异表达 【中图分类号】R 一3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 1 7 8 5 6 ( 2 0 0 9 ) 1 2 0 0 1 4 0 5 D i f f e r e n t i a lG e n eE x p r e s s i o ni nE a r l yD e v e l o p m e n t o fF e t u s e so fD i a b e t i cM i c e T A OL i n g y u n l ”，N IL

4、 i j u l ”，H UJ i a n - h u a l ”，G A OC h e n 9 1 2 ( I S h a n s h a iL a b o r a t o r yA n i m a lR e s e a r c hC e n t e r ；2 S h a n g h a iI n s t i t u t eo fP l a n n e dP a r e n t h o o dR e s e a r c h ，s h a n g I l a j2 0 0 0 3 2 ，C h i n a ) 【A b s t r a c t 】 O b j e c t i v e T h e

5、a i mo ft h ep r e s e n ts t u d yw a st ou n d e r s t a n dt h eg e n ee x p r e s s i o np r o f i l e sa n dt or e v e a lt h e a l t e r a t i o n so fg e n ee x p r e s s i o ni nE 1 4f e t u s e so fs t r e p t o z o t o c i n ( S T Z ) 一i n d u c e dd i a b e t i cm i c e M e t h o d F e m

6、a l eI C Rm i c ew e r e d i v i d e di n t oc o n t r o la n d1 5 0m g k gS T Z - t r e a t e dg r o u p s A f t e rt h ed i a b e t i cs t a t u sW a Sv e r i f i e d ，d i a b e t i ca n dc o n t r o lm i c ew e r em a t e d w i t hn o r m a lm a l em i c e T 0 t a lR N Ao fE 1 4f e t u s e sW a s

7、e x t r a c t e d R N Ap r o b e sw e r es y n t h e s i z e d 1 a b e l e dw i t hC y 3a n dC y 5 f l u o r e s c e n td y e s ，a n du s e dt ob eh y b r i d i z e dt om o u s eo l i g o a r r a yc o n t a i n i n g2 4 ，8 5 9g e n e s D a t aw e r ea n a l y z e du s i n gam i c r o a r r a y s c a

8、 n n e rs y s t e m R e s u l t sAt o t a lo f3 9 7g e n e sw e r ef o u n dt ob ed i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e db e t w e e nt h ef e t u s e so fd i a b e t i ca n dc o n t r o l m i c e 3 2 8g e n e ss h o w e dam o r ef l q a n2 - f o l di n c r e a s ei nt h ee x p r e s s i o nc o

9、 m p a r e dw i t ht h o s eo ft h ec o n t r o l ，w h i l e6 9g e n e ss h o w e d am o r et h a n2 - f o l dl o w e re x p r e s s i o n C o n c l u s i o n T h er e s u l t si n d i c a t et h a tf e t a ld e v e l o p m e n tc a nb ea f f e c t e db ym a t e r n a ld i a b e t e s d u et Oa l t

10、e r a t i o n si ng e n ee x p r e s s i o n O u rs t u d yh a si d e n t i f i e dd i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dg e n e si n v o l v e di nt h ed e v e l o p m e n ta n d m e t a b o l i s mi nf e t u s e so fd i a b e t i cm i c e ，a n dp r o v i d eb a s i cd a t aa n dd i r e c t i

11、 o nf o rf u r t h e rr e f i e a l c ho fm o l e c u l a rm e c h a n i s mo ff e t a l p a t h o l o g yo fd i a b e t e sa n dm e t a b o l i cd i s e a s e s 【K e yw o r d s 】F e t u s ；D i a b e t i cm i c e ；G e n ee x p r e s s i o np r o f i l e ；M i c r o a r r a y 人类成年期的代谢疾病如肥胖症、糖尿病、心血 管疾病

12、等起源于胎儿，胚胎能对母体子宫内环境的 轻微变化作出反应，并通过改变基因表达和蛋白合 成而改变机体代谢通路，最终影响胎儿后期发育及 基金项目】上海市科学技术发展基金项目( 编号：0 5 4 9 0 9 0 0 1 ) 。 作者简介】陶凌云( 1 9 8 1 一) ，女，研究实习员，从事实验动物胚胎研究和遗传检测方面的工作。E - m a i l ：s h i f l y t a o S l l 8 h o t m a i l C O I n 。 通讯作者】高诚( 1 9 6 1 一) ，男，研究员。E - m a i l ：g a o c h e n g d g b 1 2 6 e o m 。

13、 万方数据 中国比较医学杂志2 0 0 9 年1 2 月第1 9 卷第1 2 期C h i nJC o m pM e d ，D e c e m b e r2 0 0 9 ，V 0 1 1 9 N o 1 2 1 5 代谢疾病的易感性H 3 1 。 大、小鼠糖尿病模型已证实，糖尿病母鼠会影响 早期胚胎的发育及胎儿宫内发育受阻，从而使母鼠 怀孕后流产和子代先天畸形比率升高。4 j 1 。 流行病学调查显示：糖尿病母体对新生几发育 影响可以延伸到成年时期，并通过母系遗传至下一 代口6 。大量研究认为糖尿病胎儿发育异常与基因 表达改变有关，如P h e l a nS A 等认为糖尿病引起的神 经管缺失

14、与神经管表面的细胞凋亡有关，他们发现 糖尿病小鼠胚胎中脑和后脑的神经管中P a x 3 m R N A 表达明显下降 7 1 ；R e e c eE A 等制作了S T Z 大 鼠糖尿病模型，研究E 1 2 胚胎的卵黄囊细胞膜的损 伤与细胞凋亡信号调节通路的破坏有关。他们分析 了A k t 磷酸化率和B a x 蛋白，发现卵黄囊细胞凋亡 相关基因B a x 蛋白表达上升，而细胞生存因子A k t 酶活力下降旧1 。 胚胎发育至1 4d ( E 1 4 ) 内胚细胞开始分化行成 三个胚层，此时胚胎对环境条件十分敏感旧1 。因此， 本实验利用S T Z 诱导的糖尿病母鼠，检测糖尿病和 对照E 1

15、4 胚胎的基因表达谱，以了解糖尿病胚胎病 理的分子机理。 1 材料和方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物：6 8 周龄S P F 级I C R 小鼠，体重 约2 8 3 0g ；饲养于清洁级环境，密度5 只盒，温 度( 2 0 2 4 ) ，相对湿度4 0 一6 0 ，喂以配方饲 料，自由采食和饮水，自动光控( 1 2h 明1 2h 暗) 。 动物购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号： S C X K ( 沪) 2 0 0 7 0 0 0 5 。以1 5 0m g k g 体重的剂量，雌 性小鼠一次腹腔注射新鲜配制链脲菌素溶液，同时 设枸橼酸钠对照组。4 8h 后，选取血糖浓度达到 1

16、 8m m o l L 以上者为实验对象。 1 1 2 主要试剂：血糖试纸( 罗氏公司) ；胰岛素测 定用放射免疫试剂盒( L i n c oR e s e a r c h 公司) ；链脲菌 素s t r e p t o z o c i n ( S i g m a 公司) ；枸橼酸钠为国产分析 纯；R N A 提取试剂盒( R N e a s yM i n iK i t ) ，分别为 Q i a g e nN o 7 4 1 0 4 ，N o 6 9 5 0 4 ；小鼠表达谱芯片为S B C 小鼠高密度芯片( 上海生物芯片有限公司，生物芯片 上海国家工程研究中心) 1 1 3主要仪器：罗氏罗康

17、全活力型血糖检测仪 ( 罗氏公司) ；S N 一6 9 5 A 智能放免7 测量仪；A 2 6 0 A 2 8 0 测定仪，S p e c t r o p h o t o m e t e rN D - 1 0 0 0 ( N a n o D r o p ) ；A g i l e n t 扫描仪。 1 2 实验方法 1 2 1 构建糖尿病母体模型：2 0 只I C R 雌鼠腹腔一 次注射0 0 5m o l L 枸橼酸钠新鲜配制的链脲菌素 S T Z ，注射剂量为1 5 0m g k g ，同时设2 0 只枸橼酸钠 对照组。4 8h 后，小鼠尾部采血用血糖检测仪和相 应血糖试纸进行测定；摘眼球采

18、血，离心得血清，用 L i n c oR e s e a r c h 公司放射免疫试剂盒，送复旦大学药 学院放射药学教研室进行胰岛素测定。 1 2 。2 糖尿病小鼠交配：取健康成年的I C R 雄性小 鼠与糖尿病模型小鼠1 ：1 合笼，次1 3 早晨9 ：0 0 检查 阴栓，见阴栓者定为怀孕0 5d ，糖尿病母鼠怀孕第 1 3 5d 剖腹取1 4d 全胚。 1 2 31 4d 胚胎总R N A 提取及R N A 质量控制：分 别提取8 个实验组和8 个对照组胚胎总R N A ，操作 按试剂盒进行。紫外分光光度计测定总R N A D N A 浓度( 2 6 0n m ) ，经紫外波谱扫描分析R

19、N A D N A 纯 度，A 2 6 0 A 2 8 0 值在2 0 左右，A 2 6 0 A 2 3 0 大于A 2 6 0 A 2 8 0 值，说明核酸纯度较高。实验组和对照组样品 分别等量混合，用全自动电泳分析R N A 质量，条带 清晰，无杂带，且2 8 S 与1 8 S 条带亮度之比为2 0 ，表 明R N A 无降解，质量可靠( 图1 ) 。 f F U 】 4 0 2 0 O 【F u 】 】0 0 5 0 0 2 03 04 05 0 6 0l s l 2 03 0 4 0 5 06 0l s 】 图11 4d 胚胎部分样品总R N A 电泳图( 示例) 左：实验 组，右：对

20、照组 F i g 1 R e s e t so fR e p r e s e n t a t i v ee h c t r o p h o r e g r a m so f t o t a l R N Ae x t r a c t e df r o mE 1 4f e t u s e s 1 2 4 探针制备及杂交：实验标记方法采用线性放 大后标记法，其中实验组R N A 采用C y 3 荧光标记，对 照组R N A 采用C y 5 荧光标记。R N A 进行标记后利用 等量的探针进行4 2 。C ，1 6h 杂交，并在4 2 。C 洗片。 1 2 5 检测与分析：芯片结果采用A g i l

21、e n t 扫描仪进 行扫描，软件读取数据，分辨率S c a nr e s o l u t i o n 为1 0 弘m ，P M T1 0 0 ，采用G e n e s p r i n g 进行N o r m a l i z e 处理 分析，表达差异值r a t i o 为C y 3 C y 5 ，即实验组对照 组。差异基因的筛选标准为r a t i o 2 为上调基因， r a t i o 。 2i n d i c a t e s 蛐u p r e g u l a f i o n ；r a t i o 鼋 0 5i n d i c a t e sa d o w n r e g u l a f

22、 i o n 表2 印迹基因和甲基化转移酶表达差异 T a b 2 D i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e di m p r i n t e dg e n e sa n dm e t h y l t r a n s f e r a s eg e n e si nt h ef e t u s e so fd i a b e t i c ( D M ) a n dc o n t r o l ( c ) m i c e 一一 登录号G e n b a a k命名S y m b o l描述D e s c r i p t i o n 比值D M ：Cr a

23、t i o N M 一0 1 0 2 5 5 G a m t 胍基乙酸转甲基酶g u a n J d i n o a c e t a t em e t h y l t r a n a f e r a a e 1 6 0 N M 一0 1 9 4 4 8 D n m t 3 LD N A 转甲基酶3 LD N A ( c y t o s i n e 5 ) m e t h y l t m n s f e r a s c3 - l i k e 1 2 1 N M 一0 2 2 8 8 4 B h m t 2甜菜碱高半胱氨酸转甲基酶2b e t a i n e - h o m o c y s t e

24、 i n em e t h y l t r a n 西e r a s e2 2 4 6 N M 一0 2 6 4 4 0 R n m t R N A 转甲基酶R N A ( g u a n l n e - 7 - ) m e t h y l t r a n s f e r s s e 0 6 8 N M 一0 1 0 5 1 4 I f ；f 2 胰岛素样生长因子2i n s u f i n - h k eg r o w t h f a c t o r2 O 8 1 H 1 9H 1 9 胚胎肝脏m R N A H 1 9f e t a lf i v e rm R N A 0 8 1 N M0

25、 0 8 3 8 7 I r a 2胰岛紊i n s u l i n1 1 1 3 1 3 讨论 基因芯片结果发现：糖尿病小鼠1 4d 胚胎中表 达上调基因有3 2 8 个，主要与代谢有关，如糖尿病相 关基因R r a d ( R a s r e l a t e da s s o c i a t e dw i t hd i a b e t e s ) 和 万方数据 1 8 中国比较医学杂志2 0 0 9 年1 2 月第1 9 卷第1 2 期C h i nJC o m pM e d ，D e e e r a b e r2 0 0 9 V 0 1 1 9 N o 1 2 R a s l l 2 ，

26、该基因与型糖尿病胰岛素抵抗有关n 0 1 ， 这是否与糖尿病子代成年后对型糖尿病易感及产 生胰岛素抵抗有关，还有待进一步研究。 糖尿病小鼠胚胎中下调基因有6 9 个，主要与发 育有关，如o t 】【2a n dR o b 0 3 基因，其主要调节脑和神 经系统发育及脑细胞分化等。研究表明：糖尿病母 体对胎儿神经发育的影响较普遍，母孕早期高血糖 和酮症可致神经管畸形，前脑分化异常等2 | 。另有 报道：认为妊娠晚期糖尿病母亲的代谢紊乱也不容 忽视，其可能是导致新生儿以后神经精神发育异常 的因素。糖尿病母亲婴儿脑结构常有别于正常新生 儿，存在不同程度的发育不成熟现象3 | 。基因表达 失调可能与糖

27、尿病母体引起胎儿脑畸形有关，也有 待进一步证实。 芯片结果还发现G s t m l 、G s t m 3 、B h m t 2 、M a t l a 、 G s t a 3 和D n m t l 的表达均上调，这些转移酶与半胱氨 酸硫基转移或甲硫氨酸的甲基转移有关。本研究室 以前的研究已经证实，糖尿病胎儿印迹基因甲基化 水平相对高于对照组，而甲基化转移酶与D N A 甲基 化有关“。在胚胎甲基化、去甲基化和重新甲基化 的动态变化过程中，D n m t l 和D n m t 3 分别在维持特 定位点印迹基因的甲基化水平和建立组织特异性甲 基化模式方面发挥关键作用。目前认为正常甲基化 模式的建立需

28、要D n m t 3 和D n m t l 的共同作用。 D n m t l 是D n m t 3 启动的C p G 核苷酸重新甲基化的保 证，而D n m t 3 使甲基化水平提高到正常需要水 平1 5 卅1 。 糖尿病胚胎发育是一个复杂的过程，包括葡萄 糖和脂类代谢的失衡，细胞信号传导的紊乱以及基 因表达的改变，W e n t z e le ta 1 等认为糖尿病胚胎病理 与发育控制、代谢和信号传导与基因表达失常有 关引；R e e c e 等证明高血糖诱导基因表达改变，导致 胚胎形成异常n 引。本实验对糖尿病和正常小鼠1 4 d 胚胎进行了全面的基因表达扫描，为深入探讨糖 尿病胚胎病理和

29、代谢疾病的分子机理提供了基本数 据和研究的方向。 参考文献： 2 3 R a y e l l iA C v a nd e rM e u l e nJ H ，M i c h e l 8R P ，e ta t G l u c o s e “e r a n c e i na d u l t sa f t e rp r e n a t a le x p o s u r et of a m i n e J h m e e t ，1 9 9 8 ，3 5 1 ： 1 7 3 1 7 7 A e r t sL ，l l o l e m a n sK V a nA s e c h eF A M a i e r

30、 n a ld i a b e t e sd u r i n g p r e g n a n c y ：c o n s e q u e n c e sf o rt h eo f f s p r i n g J D i a b e t e sM e t a bR e v ， 1 9 9 0 ，6 ( 3 ) ：1 4 7 1 6 7 M a r t y nC N ，H a l e sC N ，B a r k e rD J e t a I F e t a lg r o w t ha n d h y p e r i n s u l i t m e m i ai na d 山1 & J D i a b

31、 e tM e d ，1 9 9 8 ，1 5 ( 8 ) ：6 8 8 6 9 4 4 I oM ，K o n d oY ，N a k a t a n iA ，e ta 1 C h a r a e l e r i z a t i o no fl o wd o s e s t r e p t o z o t o c i n - i n d u e e dp r o g r e s s i v ed i a b e t e si nm i c e J E n v i r o n T o x i e 0 1P h a m a c o l ，2 0 0 1 ，9 ( 3 ) ：7 1 7 8 。 5

32、 P i n t e rE ，R e e e eE A ，L e r a n t hC Z ，e la 1 Y o I k f a i l u r ei n e m b r y o p a t h yd u et oh y p e r g l y e e m i a ：u l t r a s t r u e t u r a la n a l y s i so fy o l k d i f f e r e n t i a t i o na s s o c i a t e dw i t he m b r y o p a t h yi nr a tc o n c e p t u s e su n d

33、 e r h y p e r g l y c e m i cc o n d i t i o n s J T e r a t o l o g y 。1 9 8 6 ，3 3 ( 1 ) ：7 3 8 4 6 O z a n n eS E ，F e m a n d e z - T w i n nD ，H a l e sC N F e t a lg r o w t ha n da d u l t d i s e a s e s J 】S e m i nP e r i n a t o l ，2 0 0 4 ，2 8 ( 1 ) ：8 1 8 7 【7 P h e l a nS A ，I t oM ，k

34、 k e nM R N e n r a lt u b ed e f e c t si ne m b r y e so f d i a b e t i cn i c e ：r o l eo ft h eP a x - 3g e n ea n da p o p t o s i s J D i a b e t e s ， 1 9 9 7 4 6 ( 7 ) ：1 1 8 9 一1 1 9 7 8 S u nF Y ，K a w a s a k i aE ，A k a z a w a cS A p o p t o s i sa n di t sp a t h w a yi n e a r l yp o

35、 s t i m p l a n t a t i o ne m b r y o so fd i a b e t i cr a t s J D i a b e t e sR e s C l i nP r a c 。2 0 0 5 ，6 7 ( 2 ) ：1 1 0 一1 1 8 9 A n & a sN a g yM G ，e ta 1 ，M a n i p u l a t i n g t h eM o u s eE m b r y o ：a L a b o r a t o r yM a n u a l M 1 1 l i r l dE d i t i o n ，C o l dS p r i n

36、 gH a r b o r L a b o r a t o r yP r e s s ，2 0 0 3 1 0 l l a n yJ ，B i l a nP J ，K a p u rS ，e ta 1 O v e r e x p r e s s i o no fR a di nm u s c l e w o r s e n sd i e t - i n d u c e di n s u l i nr e s i s t a n c ea n dS l u c o i n t o l e r a n c ea n d l o w e r sp l a s m at r i g l y c e r

37、 i d el e v e l J P r o cN a tA c a dS c iusA 2 0 0 6 。 1 0 3 ( 1 2 ) ：4 4 8 1 4 4 8 6 1 1 R e y n e tC ，K a h nC R R a d ：am e m b e ro ft h eB a sf a m i l yo v e r e x p r e s e e d i nm u s c l eo ft y p eI Id i a b e t i ch u m a n s J S c i e n c e ，1 9 9 3 ，2 6 2 ( 5 1 3 8 ) ：1 , 1 4 l 一1 4 4

38、 4 1 2 N o l dJ L 。G e o r g i e f f ，M K I n f a n t so f d i a b e t i cm 讪 J P e d i a t r C l i nN o a hA m ，2 0 0 4 ，5 1 ( 3 ) ：6 1 9 6 3 7 1 3 N e l s o nC A ，W e w e r k aS ，T h o m a sK M ，e ta 1 N e u r o c o g n i f i v es e q u e l a e o f i o f a n t so f d i a b c t i c m o t h e r s J

39、B e h a v N e u r e s c i ，2 0 0 0 ，1 1 4 ( 5 ) ：9 5 0 一9 5 6 1 4 S h a oW J ，T a oL Y ，C h e n gG a oC ，e ta t A l t e r a t i o n si nm e t h y l a t i o na n d e x p r e s s i o nl e v e l so fi m p r i n t e dg e n e sH 1 9a n dl 簖i nt h ef e t u s e so f d i a b e t i cm i c e J C o m p M e d ，

40、2 0 0 8 ，5 8 ( 4 ) ：1 6 1 5 l - l a t aK ，O k a n oM ，L e iH ，e ta t D n m t 3 Lc o o p e r a t e sw i t h t h eD n m d f a m i l yo fd en o v oD N Am e t h y l t r a n s f e r a s e st oe s t a b l i s hm a t e r n a l i m p r i n t si nm i c e J D e v e l o p m e n t ，2 0 0 2 ，1 2 9 ( 8 ) ：1 9 8 3

41、 1 9 9 3 1 6 O k a n oM ，B e l lD W ，H a b e rD A ，e ta 1 D N Am e t h y l t r a n s f e r a s e s D m r I t 3 aa n dD n m t 3 ba ne m n t i a lf o rd en o v o m e t h y l a t i o na n d m a m m a l i a nd e v e l o p m e n t J C e l l ，1 9 9 9 ，9 9 ( 3 ) ：2 4 7 2 5 7 【1 7 C h e r t T P ，U e d aY D

42、o d g e J E ，e t a l E s t a b l i s h m e n t a n d m a i n t e n a n c e o f g e n o m i em e t h y l a t i o np a t t e r n s i nm o L m ee m b r y o n i cs t e mc e l l sb y D n m t 3 aa n d D n m t 3 b JJ M o l C e l lB i o l ，2 0 0 3 ，2 3 ( 1 6 ) ：5 5 9 4 5 6 0 5 。 1 1 8 W e n t z e lP ，W e n

43、t z e lC R ，G a r e s k o gM B 。e ta l ，I n d u c t i o no fe m b r y o n i c d y s m o r p h o g e n e s i sb yh i g hS t u c o c o n c e n t r a t i o n ，d i s t u r b e di n o s i t o l m e t a b o h s m ，a n di n h i b i t e dp r o t e i nk i n a s eCa c t i v i t y j T e r a t o l o g y ， 2 0 0

44、 l 。6 3 ( 5 ) ：1 9 3 2 0 1 1 9 R e e c eE A ，l l w o o nJ I ，W uY K ，e ta 1 C h a r a c t e r i z a t i o no fd i f f e r e n t i a l g e n ee x p r e s s i o np r o f i l e s i nd i a b e t i c e m b r y o p a t h y u s i n gD N A m i c r o a r r a ya n a l y s i s J A mJO b s tG y n e c 0 1 2 0 0

45、6 ，1 9 5 ( 4 ) ：1 0 7 5 1 0 8 0 修回日期 2 0 0 9 - 0 8 2 4 万方数据 贺月袱等不同缺氧时间制作新生大鼠脑室周围白质软化动物模型的比较( 正文见第1 0 页l H E Y u c q i u ，e ta l E f f e c to f D i f f e r e n tH y p o x i aD u r a t i o n so nE s t a b l i s h m e n to f N e o n a L a lR a t M o d e l so f P e r i v e n t r i c u l a rL e u k o m a

46、 l a c i a( F u l lt e x to Ip a g e1 0 ) 然麟l 嚣黎蕤 陶凌云等糖尿病小鼠胚胎早期发育的差异表达基因C 正文见第1 4 页 T A OL i n g - 州nHa lD i f f e r e n l i a lO e n eE x p r e s s i o ni nE a r yD e v e l o p m e n to f F e t u s e so f D i a b e l l cM i c e 目2 # 日扫描戡K R 【 F i g 2 Ac u tp i c t u r co fh 如r i d i z a t i o ns c a n n i n gi m a g e F 幢3T h e m t l o o f C y j C y 5万方数据