紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL6 小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究.pdf

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1、文章编号 1 0 0 5 - 6 6 6 1 ( 2 0 0 6 ) 0 3 - 0 1 6 5 - 0 4论著 紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导 C5 7B L / 6 小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究 郭彩琴1,张美娟1,胡姝颖1,单昊1,张素华1,王荣芝2, 倪忠耘2,季旻王 君1,吴海玮1 *,吴观陵1 * 摘要 目的观察紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴经耳廓免疫C 5 7B L / 6小鼠后,小鼠皮肤组织 早期免疫应答的动态变化。方法 9 8只小鼠测定双侧耳廓厚度后, 1 4只作为0d组不感染/免疫,其 余平均分为2组。一组经双侧耳廓分别感染正常尾蚴1 5 0条/耳,另一组经双侧耳廓分

2、别免疫紫外 线辐照致弱尾蚴1 5 0条/耳。感染/免疫后第1 、 2 、 4 、 7 、 1 4 、 2 1天分别剖杀2组小鼠各7只,测定耳廓 厚度。取感染处的耳廓组织,左侧进行培养,收集上清检测相应细胞因子。右侧纵切为二,一半进行 HE染色观察炎症反应; 另一半应用免疫组化技术观察皮肤组织中I L - 1 2和C D 1 1 c分子的表达。结 果正常尾蚴感染的小鼠皮肤炎症反应在第7天达到高峰后逐渐下降,第2 1天基本恢复;而辐照尾 蚴免疫小鼠耳廓皮肤在第1 4天炎症反应才达高峰,第2 1天反应仍然十分强烈。尾蚴穿皮后第4天, 组织中有较高水平的C D 1 1 c及I L - 1 2分子表达。

3、皮片培养细胞因子定量检测也显示:与T h 1细胞应 答相关的I L - 1 2 、 I F N- 及T h 2型因子I L - 1 0早期在正常、辐照尾蚴差异无显著性。结论和正常尾 蚴相比,辐照致弱尾蚴诱导的皮肤免疫应答持续时间长、强度高,但两者诱导T h细胞向不同方向极 化并不发生于免疫应答启动阶段。 关键词 日本血吸虫;致弱尾蚴;耳廓皮肤;免疫应答 中图分类号 R 3 8 3 . 2 4文献标识码 A D y n a mi cc h a n g e so fe a r l yi mmu n er e s p o n s ei nC5 7B L / 6mi c e v a c c i n a

4、 t e d w i t h U V - a t t e n u a t e d S c h i s t o s o maj a p o n i c u mG u o C a i q i n 1, Z h a n g Me i j u a n1, Hu S h u y i n g1, S h a n Ha o1, Z h a n g S u h u a1, Wa n g R o n g z h i2, Ni Z h o n g y u n 2,J iMi n j u n1,WuHa i we i1,WuG u a n l i n g1 ( 1De p a r t me n to f P a t

5、 h o g e nB i o l o g y , Na n j i n gMe d i c a lUn i v e r s i t y ,Na n j i n g2 1 0 0 2 9 ,C h i n a;2L a bo fMo r p h o l o g y ,Na n j i n gMe d i c a l Un i v e r s i t y ,C h i n a ) A b s t r a c t O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ed y n a mi cc h a n g e so fe a r l ys t a g ei mmu n

6、er e s p o n s e si nt h e s k i n o fC5 7B L / 6mi c ev a c c i n a t e d wi t h UV- a t t e n u a t e d S c h i s t o s o ma j a p o n i c u m.Me t h o d sT h e t h i c k n e s so f d o u b l ep i n n a ewa s me a s u r e dr e s p e c t i v e l yi nt o t a l 9 8mi c e ,t h e nt h emi c ewe r ed i

7、v i d e d i n t ot wog r o u p si na v e r a g ee x c e p t 1 4a c t e da st h eg r o u po f d a y0( n a i v e ) .E a c hmo u s ewa si n f e c t e d wi t h1 5 0n o r ma l c e r c a r i a ep e rp i n n ai nG r o u pOn ewh i l ee a c hwa sv a c c i n a t e dwi t h1 5 0a t t e n u a t e d c e r c a r i

8、 a ei nG r o u pT wo .Al l mi c ewe r ei n f e c t e do r v a c c i n a t e dt h r o u g hd o u b l ep i n n a e .Ond a y s1 ,2 , 4 ,7 ,1 4 ,2 1a f t e rt h ee x p o s u r e ,s e v e nmi c e we r es a c r i f i c e dr e s p e c t i v e l yi ne a c hg r o u pa n dt h e t h i c k n e s so f p i n n a

9、ewa sme a s u r e d .T h e n ,t h ee x p o s e dp i n n a ewe r er e mo v e da n dd e a l ta sf o l l o ws . T h el e f ts i d e swe r ec u l t u r e da n dt h es u p e r n a t a n t swe r ec o l l e c t e dt od e t e c tc o r r e s p o n d i n gc y t o k i n e wh i l et h er i g h t o n e swe r ec

10、u t o p e na l o n gl o n g i t u d i n a l s e c t i o n .On eh a l v e swe r es t a i n e dwi t hHEt o o b s e r v e d y n a mi c c h a n g e s o f i n f l a mma t i o na n dt h e o t h e r h a l v e s we r e d e a l t wi t h i mmu n o h i s t o c h e mi s t r yt oo b s e r v et h ee x p r e s s i

11、 o no f I L - 1 2a n dC D 1 1 c .R e s u l t s I n f l a mma t i o no f t h e 基金项目 国家自然科学基金重点资助项目( 3 0 4 3 0 6 0 0 ) 作者单位 1南京医科大学病原生物系(南京2 1 0 0 2 9 ) ;2南京医科大学形态学实验室 作者简介 郭彩琴( 1 9 8 0 -) ,女,硕士研究生。研究方向:血吸虫感染分子免疫学 *通讯作者 电话: 0 2 5 - 8 6 8 6 3 1 8 7 E - ma i l : g l wu n j mu . e d u . c n 0 2 5 - 8 6 8

12、 6 2 7 9 3 E - ma i l : h a i we i n j mu . e d u . c n 561 中国血吸虫病防治杂志2 0 0 6年第1 8卷第3期 C h i nJS c h i s t oC o n t r o l 2 0 0 6 , Vo l . 1 8 , No . 3 s k i n sd e r i v e df r o m mi c ei n f e c t e dwi t hn o r ma l c e r c a r i a ef e l l o f f g r a d u a l l ya f t e r i t g o t t op e a ko

13、nd a y7 a n dr e v i v e do nt h ewh o l eo nd a y2 1 .Ho we v e r a s t h ea t t e n u a t e dp i n n a ewe r ec o n c e r n e d ,t h ei mmu n e r e s p o n s ed i dn o tg e tt h es t r o n g e s tu n t i ld a y1 4a n ds t i l li n t e n s i v eo nd a y2 1 .T h e r ewe r emo r e e x p r e s s i o n

14、 so f C D 1 1 c a n dI L - 1 2o nd a y4a f t e r t h e s k i n s e x p o s e dt oc e r c a r i a e .Qu a n t i t a t i v e d e t e c t i o n o f c y t o k i n e ss e c r e t e db yc u l t u r e ds k i ne x p l a n t ss h o we dt h a t I L - 1 2a n dI F N- we r eh i g h e ri ng r o u p o f mi c ev a

15、c c i n a t e dwi t ha t t e n u a t e dc e r c a r i a et h a nt h o s ei nmi c ei n f e c t e dwi t hn o r ma l c e r c a r i a ei nt h e e a r l ys t a g ewh i l eI L - 1 0wa so nt h eo t h e rs i d e .C o n c l u s i o n sC o mp a r e dwi t ht h ei n f e c t i o nwi t h n o r ma l c e r c a r i

16、a e ,i mmu n er e s p o n s e si n d u c e db ya t t e n u a t e dc e r c a r i a ea r el o n g e r a n dmo r ei n t e n s i v e . Al t h o u g ht h e yc a ni n d u c eT hp o l a r i z i n gt od i f f e r e n td i r e c t i o n s ,i td o e sn o td e v e l o pa tt h ep r i mi n g s t a g eo f i mmu n

17、 e . Ke yw o r d s S c h i s t o s o maj a p o n i c u m;At t e n u a t e dc e r c a r i a e ;P i n n as k i n ;I mmu n er e s p o n s e 辐照致弱尾蚴因在多种动物模型中均能诱导出 较高保护力而受到广泛重视。皮肤是血吸虫入侵哺 乳动物宿主的首个位点,也是机体对其产生免疫应 答的第一站,因此成为血吸虫病抗感染免疫机理研 究的焦点。树突状细胞( D C )是目前已知的功能最强 的抗原递呈细胞( AP C ) ,在先天性、获得性免疫间起 着较好的桥梁作用。皮肤的朗格汉

18、氏细胞( L C )作为 D C的一种, 和抗原接触后分化成熟,游走至局部引 流淋巴结,活化T细胞启动特异免疫应答。C D 1 1 c 分子是D C成熟重要的表面标记之一,其表达强度 能部分代表局部组织中D C的聚集 1 。I L - 1 2作为决 定T h 0向T h 1极化的必要前炎症因子,其表达对免 疫应答方向有重要影响 2 。而C 5 7B L / 6小鼠因能对 曼氏血吸虫产生较高应答,常被作为研究与辐照致 弱尾蚴有关的保护力机制的小鼠品系。本研究旨在 观察比较日本血吸虫正常、辐照致弱尾蚴感染/免疫 C5 7B L / 6小鼠后, 皮肤组织中早期免疫应答动态变 化的差别,以及两者细胞因

19、子表达的差异,为深入探 讨辐照致弱尾蚴的免疫机制奠定基础。 材料与方法 1 紫外线辐照致弱尾蚴的制备 阳性钉螺购自湖南省血吸虫病防治研究所,按 常规方法 逸 出 尾 蚴,收 集 于 盖 玻 片 后,置 紫 外 灯 ( Ha n o v a )下 以2 5 4n m、 4 0 0 W/ c m 2强 度 照 射 1 mi n , 制成紫外线辐照致弱尾蚴。 2 实验动物分组及处理 清洁级1 0 1 2周C 5 7B L / 6雌性小鼠9 8只, 购 自南京大学实验动物中心,除1 4只作为0d组不加 感染/免疫外,其余平均分为2组,分别用辐照致弱 尾蚴免疫和正常尾蚴感染。 所有小鼠用4 0mg /

20、k g戊巴比妥( S i g ma ,美国) 麻醉后,采用盲法由本室同一人用螺旋测微器(分辨 率0 . 0 1mm)测定双侧耳缘内约1c m区域的厚度。 次日,感染和免疫组小鼠用相同剂量的戊巴比妥麻 醉后,背部朝上置于鼠板。去氯水湿润小鼠双侧耳 廓,在2片1 2mm1 2mm的盖玻片上收集1 5 0条 尾蚴,直接或辐照后分别贴附小鼠同一耳廓的背、腹 面。每只小鼠均经双侧耳廓感染/免疫3 0 0条尾蚴。 3 耳廓皮肤的收集与处理 第0 、 1 、 2 、 4 、 7 、 1 4 、 2 1天分别剖杀正常尾蚴感 染、辐照尾蚴免疫小鼠各7只,同前法测定耳廓厚度 后,计算厚度增加值( d ) ,取下耳

21、廓组织。左侧从真 皮面用镊子分离后,真皮朝下置于0 . 5ml R P MI 1 6 4 0 (含1 0 % F B S ,购自Hy c l o n e公司, 1 0 0U/ ml青 霉素, 1 0 0 g / ml链霉素)的2 4孔板中, 3 7、 5 % C O2培养1 8h后收集上清 3 。 右侧自纵切面切开后, 一半进行苏木素伊红( HE )染色观察炎症反应变化; 另一半应用免疫组化方法检测感染处皮肤组织中 I L - 1 2和C D 1 1 c分子的表达。 d=剖杀时耳廓厚度-感染/ 免疫前耳廓厚度 4 细胞因子检测 取感染/免疫后2 、 4天小鼠耳廓培养上清各4 份,利用B i o

22、 - p l e x蛋白质芯片系统,对每份细胞培养 上清同时检测I L - 1 0 、 I F N- 、 I L - 1 2 (试剂盒购自B i o - R a d公司) , 上海生物芯片有限公司提供相应检测。 5 病理切片HE染色的制作 耳廓皮片取材后,浸泡于1 0 %甲醛中固定2 4h 以上,依次脱水、透明、浸蜡包埋,连续切成4 m厚 切片,隔1 5片取1片,置于多聚赖氨酸处理的载玻 片上,进行常规HE染色,并再次脱水、透明、封片, 于光学显微镜下观察拍照。 6 免疫组化 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法 ( S P ) ,检测前炎症因子I L - 1 2及C D 1 1 c的表达。

23、耳 廓皮肤OC T包埋后,液氮速冻3 0s ,放置-7 0冰 箱保存。检测时,将冰箱内组织取出做快速冰冻切片 ( 厚度约5 m) ,贴至多聚赖氨酸处理过的玻片上。 室温晾干后,置于纯丙酮中固定1 0mi n后再室温晾 干。切片用P B S( p H7 . 4 , 0 . 0 1mo l / L )浸泡1 0mi n 661 郭彩琴等:紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导C 5 7B L / 6小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究 洗去丙酮后, 0 . 3 % H2O2作用2 0mi n以灭活内源性 过氧化物酶,P B S洗涤后加正常山羊血清封闭2 0 mi n 。滴加仓鼠抗小鼠C D 1 1 c一抗

24、 ( B D公司, 工作浓 度1 :3 0 )或山羊抗小鼠I L - 1 2一抗( S a n t a公司,工 作浓度1 :1 0 0 ) ,4孵育过夜。次日用P B S洗3 次,分别滴加生物素化山羊抗仓鼠( B D公司,工作浓 度1 :4 0 0 )或兔抗山羊I g G(北京中山公司,工作浓 度1 :2 0 0 ) , 3 7孵育2 0mi n 。同上法洗涤后加入辣 根酶标记链霉卵白素液3 7孵育2 0mi n , P B S洗涤 3次后加D AB显色5mi n ,洗涤后苏木素复染,封 片、观察结果并照相。 7 统计学方法 用S t a t a7 . 0统计软件包配对、成组t检验。 结果 1

25、 感染/免疫后不同时间H I值 感染/免疫后1 、 2 、 4 、 7 、 1 4 、 2 1天J K和感染/免 疫前相比,小鼠耳廓厚度均增加。正常尾蚴感染后, J K在第7天达到峰值( L 2 . 5 0M m) , 随后逐步下降, 至第2 1天基本恢复。而辐照尾蚴免疫后, J K在第1 4 天才达到峰值( N 7 . 1 4M m) ,随后缓慢下降,至第2 1 天耳廓仍平均增厚7 3 . 3 3M m(表1 ) 。 表1感染/免疫后不同时间耳廓厚度增加值( H I ) O P Q R S1T U V W S XS U Y Z Y V U S _ _Z U U P S Z _ Y U S V

26、 Y Z UZ W XXa U S 感染/免疫后时间 b i mcd e f d g t i n e c c t i d nd h i mmi n c ( j ) 正常尾蚴感染组 I n e c c t c jki t l n d h ma m c c h c a h i a c ( n o pq , M m) ) 辐照尾蚴免疫组 I mmi n i r c jki t l a t t c n i a t c j c c h c a h i a c ( n o pq , M m) s值 s t a m i c 14 . 7 N p3 . u 2N . 2 N pL . N 4v0 . 0 5

27、21 0 . 3 L pL . 4 01 5 . 7 1 p1 1 . N 3v0 . 0 5 43 3 . 5 7 p1 5 . N 72 L . 4 3 p1 7 . N 0v0 . 0 5 7L 2 . 5 0 p2 7 . 7 L2 4 . 2 N p1 2 . 4 uw0 . 0 1 1 43 7 . 1 4 p2 7 . 3 5N 7 . 1 4 p5 1 . 7 1w0 . 0 1 2 1N . 2 N pu . u 77 3 . 3 3 p4 L . 4 Lw0 . 0 1 x 感染/免疫后耳廓病理变化 观察并比较了尾蚴感染/免疫后不同时间小鼠 耳廓炎症的病理变化(图1 ) 。

28、正常尾蚴感染后1 、 2 天,耳廓皮肤组织内炎症反应较轻,真皮内可见少量 中 性粒细胞( yz )及个别嗜酸粒细胞( z OS )和淋 巴细胞,血管轻度扩张充血。第4天,炎症反应加重, 真皮层yz 、 z OS及淋巴细胞增多,血管扩张程度 增大并可见红细胞渗出浸润组织。第7天,炎症反应 进一步增强。 yz 减少,而z OS及淋巴细胞比例增 加,并可见少量巨噬细胞。第1 4天,免疫反应减轻, 炎症细胞量减少,仍以淋巴细胞和z OS为主,血管 扩张度明显降低,偶见红细胞渗出。第2 1天,仅见少 量炎症细胞,耳廓皮肤基本恢复正常结构。辐照尾蚴 免疫后1 、 2天,皮肤组织炎症反应比正常尾蚴感染 稍重

29、,真皮内炎细胞渗出较多,也以 yz 为主, 伴 个别z OS和淋巴细胞。偶见炎细胞聚集形成微脓肿 (图1 B 2 ) ,血管扩张充血较明显。第4天,真皮内炎 症稍加重,淋巴细胞、 z OS比例上升(图1 B 4 ) 。第7 天,炎症强度与第4天相仿,但细胞成分以z OS和 淋巴细胞为主。第1 4天,炎症反应明显加重,远强于 同期正常尾蚴感染。真皮内大量z OS浸润,淋巴细 胞、单核巨噬细胞增多(图1 B L ) 。至第2 1天,炎细胞 比例成分与第1 4天相近,但强度稍降低。 | 耳廓皮片培养细胞因子检测结果 与第2天相比,感染/免疫后4天,两组耳廓皮 片上清中I y- 均增高, I L -

30、1 2都降低;而I L - 1 0在 感染组升高,免疫组则降低。就这两个时间点作比 较,除感染组I y- 有明显差别( s均w0 . 0 5 )外,其 余正常尾蚴感染和辐照尾蚴免疫小鼠的细胞因子均 无显著性差异( s均v0 . 0 5 ) 。在同一个时间点,相比 于正常尾蚴感染,辐照尾蚴耳廓皮片分泌的 I L - 1 2 均略高, I L - 1 0则正好相反,但差异两者无显著性( s 均v0 . 0 5 ) 。I y- 水平两者则相仿(图2 ) 。 图x感染/免疫后第x 、 4天耳廓皮片细胞因子定量检测结果 F g . xQ a P U Y Y P Y v Sd S Y S V Y Z U

31、UV y Y Z U S _Z U U P SZ Ud P yx , 4P Y S WS x Z _ a W S 7L1 中国血吸虫病防治杂志2 0 0 L年第1 u卷第3期 C l i nJS c l i g t dC d n t h d m 2 0 0 L , Vd m . 1 u , yd . 3 4 感染/免疫后4天耳廓I L - 1 2 、 C D 1 1 c的表达 选择感染/免疫后4天作为观察时间点。和正常 耳廓( 0d )相比,尾蚴感染/免疫后4天,耳廓组织中 I L - 1 2表达量均升高,表现为NE U、巨噬细胞和 D C 中,胞浆内棕黄色颗粒增多。而 代 表 成 熟 D C

32、的 C D 1 1 c在正常/ 辐照尾蚴处理小鼠耳廓也都增多,主 要定位于胞膜(图3 ) 。 讨论 作为血吸虫进入机体的“门户“ ,又是免疫应答 启动和效应位点,皮肤在抗早期血吸虫感染中起重 要作用。对曼氏血吸虫的研究显示在皮肤炎症反应 中,与正常尾蚴感染鼠相比,辐照致弱尾蚴免疫鼠持 续时间长,强度大 3 。本次对日本血吸虫的研究获得 了相似的结果,这进一步证实了辐照尾蚴在皮肤早 期免疫中更利于虫体清除。此外,本室两次实验结果 发现感染组和免疫组炎症高峰分别为第7天和第1 4 天,且免疫组第2 1天炎症仍很强烈。而吕芳丽等 4 对日本血吸虫感染/免疫后1 5天皮肤免疫反应观 察显示感染组炎症均

33、较轻,且渐恢复正常结构;免疫 组前4天炎症反应都不很明显,第5天则较强烈,与 本研究结果有所不同。究其原因,可能是本实验观察 周期长。此时,除天然免疫外,特异性免疫也参与了 免疫应答,加强了免疫反应,它的时间比天然免疫晚 7 1 4d 5 , 6 。因此,要深入探讨正常/辐照尾蚴处理 小鼠皮肤免疫应答的差别,需延长观察时间点。 在曼氏血吸虫,已经发现辐照致弱尾蚴单次免 疫鼠主要诱导T h 1优势应答,而正常尾蚴感染鼠呈 T h 2优势应答 7 。吕芳丽等 8 对日本血吸虫紫外线 辐照致弱尾蚴效应机理进行研究,初步提示与曼氏 血吸虫相似。尾蚴钻皮后前4天,天然免疫已产生, 并启动相应特异性免疫应

34、答。本研究免疫组化结果 显示感染/免疫后4天,反映D C成熟的C D 1 1 c以及 前炎症因子I L - 1 2在2组小鼠皮肤中均增高,表明 正常、辐照尾蚴均能诱导相应AP C成熟并分泌相应 细胞因子。就我们对此阶段皮片细胞因子的检测来 看,代表T h 1应答的I F N- ,代表T h 2优势应答的 I L - 1 0 , 以及诱导T h 1极化的前炎症因子I L - 1 2在正 常尾蚴感染鼠和辐照尾蚴免疫鼠并无显著差异。提 示虽然正常尾蚴与辐照尾蚴分别诱导T h 0细胞向 T h 2和T h 1方向极化,但极化可能并不发生在此特 异免疫应答的启动阶段;应将着眼点置于免疫应答 启动后的调节

35、因素分析。 本实验只是对日本血吸虫辐照致弱尾蚴皮肤早 期免疫应答的一个初步研究。要深入探讨辐照免疫 应答机制,还需延长观察的时间点,检测 T h 1 、 T h 2 类细胞因子I F N- 、 I L - 4 、 I L - 1 0等。此外,对D C等 AP C做相对定量测定以寻找两者的差别。更重要的 是将重点放在特异免疫的下游效应阶段,比较机体 对这两种尾蚴应答的细胞及细胞因子的异同,据此 确定影响辐照尾蚴诱导T h 1极化的关键因素,以探 明辐照尾蚴的免疫机制(本文图1 、 3见封二) 。 参 考 文 献 1 刘文琪,邓江波,吴晓茜,等.致弱日本血吸虫尾蚴感染小鼠皮肤 组 织中C D 1

36、1 c分子的动态表达 J .中国血吸虫病防治杂志, 2 0 0 4 , 1 6 ( 5 ) :3 2 3 - 3 2 5 . 2 An d e r s o nS ,S h i r e sVL ,Wi l s o nR A,e ta l .I nt h ea b s e n c eo f I L - 1 2 ,t h ei n d u c t i o no fT h 1 - me d i a t e dp r o t e c t i v ei mmu n i t yb y t h ea t t e n u a t e ds c h i s t o s o mev a c c i n ei si

37、mp a i r e d ,r e v e a l i n ga n a l t e r n a t i v ep a t h wa ywi t hT h 2 - t y p ec h a r a c t e r i s t i c s J .E u rJ I mmu n o l ,1 9 9 8 ,2 8 ( 9 ) : 2 8 2 7 - 2 8 3 8 . 3 Ka r e nG H,S u p e e c h aK,S o n i aA,e ta l .I n t e r l e u k i n - 1 2p 4 0 s e c r e t i o nb yc u t a n e o

38、u sC D 1 1 c + a n dF 4 / 8 0 + c e l l si sama j o r f e a t u r eo f t h e i n n a t e i mmu n e r e s p o n s e i nmi c e t h a t d e v e l o pT h 1 - me d i a t e d p r o t e c t i v e i mmu n i t y t o S c h i s t o s o ma ma n s o n i J . I n f e c t i o na n dI mmu n i t y ,2 0 0 3 ,7 1 ( 6 )

39、 :3 5 6 3- 3 5 7 1 . 4 吕芳丽,李雍龙,刘国元,等.紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小 鼠 的皮肤组织细胞反应 J .中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1 9 9 7 , 1 5 ( 3 ) : 1 6 1 - 1 6 5 . 5 P e mb e r t o nR M,S my t h i e sL E ,Mo u n t f o r dAP ,e t a l .P a t t e r n s o f c y t o k i n ep r o d u c t i o na n dp r o l i f e r a t i o nb yTl y mp h o c y t e sd

40、 i f f e r i nmi c ev a c c i n a t e do ri n f e c t e dwi t hS c h i s t o s o mama n s o n i J . I mmu n o l o g y ,1 9 9 1 ,7 3 ( 3 ) :3 2 7 - 3 3 3 . 6 Mo u n t f o r dAP ,Wi l s o nR A.S c h i s t o s o mama n s o n i :t h ee f f e c t o f r e g i o n a l l y mp h a d e n e c t o myo nt h el e

41、 v e l o fp r o t e c t i o ni n d u c e di n mi c eb yr a d i a t i o n - a t t e n u a t e dc e r c a r i a e J .E x pP a r a s i t o l ,1 9 9 0 , 7 1 ( 4 ) :4 6 3 - 4 6 9 . 7 Wi l s o nR A,C o u l s o nP S ,Mo u n t f o r dAP .I mmu n er e s p o n s e st o t h er a d i a t i o n - a t t e n u a t

42、 e ds c h i s t o s o mev a c c i n e :wh a t c a nwel e a r n f r o m k n o c k - o u t mi c e ? J .I mmu n o l L e t t ,1 9 9 9 ,6 5 ( 1 - 2 ) :1 1 7 - 1 2 3 . 8 吕芳丽,石佑恩,李雍龙,等.紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小 鼠的细胞免疫应答和细胞因子的动态变化 J .中国寄生虫学与 寄生虫病杂志, 1 9 9 7 , 1 5 ( 4 ) : 2 3 8 - 2 4 2 . 收稿日期2 0 0 6 - 0 4 - 0 5编辑杭盘宇 861 郭彩琴等:紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导C 5 7B L / 6小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究