纳洛酮对铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞凋亡的影响.pdf

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1、1 6 。 史鱼塞旦塑墅壅塑盘查垫! ! 至! 旦笙! ! 鲞箜! ! 塑曼! ! ! ! 塑业! ! ! ! ! ! 呈! ! 盟竺! 堕! ! ! 业! 垡! 塑塑! 垒坚! ! ! ! ! ! ! ! ：! ! 塑! ：! ! 5 周冀英，彭国光，程远，等闪光视觉诱发电位无创监测颅内压 7 周青，徐如祥，刘策。等无创颅内压监测仪在颅脑损伤中的应 的可行性研究 J 中华医学杂志。2 0 0 3 ，1 0 ：1 8 2 9 1 8 3 0 用 J 中华神经医学杂志，2 0 0 7 ，6 ( 6 ) ：6 3 4 6 3 7 6 3 么宪伟，陆兵勋，李艳丽，等闪光视觉诱发电位无创监测颅内 8

2、3 群亮张赛4 0 5 0 例颅脑创伤患者颅内压动态监护的临床报告 压的可行性临床应用 J 中华神经科杂志，2 0 0 4 。3 7 ( 6 ) ：5 5 8 一口 中国急救复苏与灾害医学杂志，2 0 0 8 ，3 ( 2 ) ：7 6 7 8 5 6 0 ( 收稿2 0 1 0 一0 5 一1 3 ) 纳洛酮对铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞凋亡的影响* 孙石磊D陈晨2 郑州大学第一附属医院1 ) 神经内科2 ) 老年病科郑州4 5 0 0 5 2 【摘要】目的观察纳洛酮对铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞凋亡的影响。方法采用慢性氯化铝灌胃方法，制 备学习记忆减退大鼠模型后随机分为模型组和纳洛

3、酮治疗组，另设正常对照组。纳洛酮治疗组大鼠连续7d 腹腔注射纳洛 酮。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷酸一生物素切口末端标记法，原位检测凋亡细胞，流式细胞仪检测凋亡率。结 果纳洛酮组大鼠海马锥体细胞的凋亡率为( 6 4 1 6 ) ，模型组( 9 6 土1 9 ) ，差异有统计学意义( P O 0 5 ) ；纳洛酮组 大鼠凋亡细胞数为( 7 5 士1 9 ) 。模型组( 1 2 8 2 2 ) ，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。结论纳洛酮能减少铝致学习记忆减 退大鼠海马锥体细胞的凋亡。 【关键词】铝；学习记忆；纳洛酮；海马锥体细胞；凋亡 【中图分类号】R - 3 3 2【文献标

4、识码】A【文章编号】1 6 7 3 5 1 1 0 ( 2 0 1 0 ) 1 5 - 0 0 1 6 0 2 E f f e c t so fn a l o x o n eo na p o p t o s i so fh i p p o c a m p a ln e u r o n si nr a t sw i t ha l u m i n u m - i n d u c e dl e a r n i n ga n dm e m o r y i m p a i r m e n t S u nS h i l e i n ，C h e nC h e n 扪1 ) D e p a r t m e

5、n to fN e u r o l o g y2 ) D e p a r t m e n to fG e r o n t o l o g y ，t h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uU n i v e r s i t y ，Z h e n g z h o u4 5 0 0 5 2 ，C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v e T oo b s e r v et h ee f f e c t so fn a l o x o n eo na p o p t

6、o s i so fh i p p o c a m p u sp y r a m i d a ln e u r o n si nr a t sw i t ha l u m i n u m - i n d u c e dl e a r n i n ga n dm e m o r yi m p a i r m e n t M e t h o d sA l u m i n u m i n d u c e dl e a r n i n ga n dm e m o r yi m p a i r m e n tm o d e lw a sa s t a b l i s h e db yg a v a g

7、e so fa l u m i n u mc h l o r i d e ( 6 0 0m g k g ) f o r3m o n t h s R a t sw e r ed i v i d e di n t ot h r e eg r o u p s ，v i z ，N a l o x o n et r e a t e dr a t s ( N A L0 8m g k g ，i pd a i l yf o r7d a y s ) ，n o n t r e a t e dm o d e lr a t sa n dn o r m a lc o n t r o l s T h ea p o p t

8、 o s i si ns i t ui nh i p p o c a m p u sp y r a m i d a ln e u r o n so ft h et h r e eg r o u p so fr a t sw a si n v e s t i g a t e dw i t haT d T m e d i a t e dd U T Pn i c k e dl a b e l i n g ( T U N E L ) m e t h o d T h ea p o p t o t i cr a t eo fn e u r o n sw a sm e a s u r e db yf l o

9、 wc y t o m e t r y R e s u l t sT h ea p o p t o s i sr a t i oo fh i p p o c a m p u sc e l li n t h eN A Lg r o u p ( 6 4 士1 6 ) w a ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e dt on o n t r e a t e dm o d e lr a t s ( 9 6 士1 9 ) ( P O 0 5 ) T h e n u m b e ro fa p o p t o t i ep y r

10、 a m i d a ln e u r o n si nt h eC A lr e g i o no fh i p p o c a m p u si nt h eN A Lg r o u p ( 7 5 土1 9 ) w a ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e dt on o n t r e a t e dm o d e lr a t s ( 1 2 8 士2 2 ) ( P 0 0 5 ) C o n c l u s i o nN a l o x o n ec o u l dd e c r e a s et h e

11、a p o p t o s i so fP Y r a m i d a ln e u r o n si nr a t sw i t ha l u m i n u m - i n d u c e d1 e a r n i n ga n dm e m o r yi m p a i r m e n t K e yw o r d s A l u m i n u m ；L e a r n i n ga n dm e m o r y ；N a l o x o n e ；P y r a m i dn e u r o n ；A p o p t o s i s 铝的神经毒性与许多神经退行性病变有关。铝的过量 接

12、触和体内蓄积是导致A l z h e i m e r s 病( A D ) 的病因之一。 明显的、进行性的学习记忆能力减退是痴呆患者的重要临床 表现之一。神经细胞的凋亡参与了A l z h e i m e r S 病等一系列 与学习记忆有关的疾病的发生，发展。我们在已观察到纳洛 酮能够改善铝致学习记忆减退大鼠空间学习记忆能力的基 础上“，进一步检测纳洛酮对铝致学习记忆减退大鼠海马锥 体细胞凋亡的影响。 l 材料与方法 1 1 动物分组及模型的建立S D 大鼠，雌雄不拘。随机分 * 基金项目：广东省自然科学基金资助项目( 编号0 0 0 8 2 5 ) 通讯作者：陈晨，郏州大学第一附属医院老年病

13、科，E m a i l ：e e 6 1 5 4 1 2 6 c o m 为3 个组：纳洛酮治疗组( ，l 一9 ) ，模型组( ，l = 9 ) ，正常对照组 ( 以一9 ) 。每天给予治疗组和模型组大鼠6 0m g 1 0 0 9 体质量 的氯化铝溶液灌胃，连续3 个月，建立铝诱导学习记忆减退 大鼠模型，对照组同时给予等量蒸馏水灌胃。纳洛酮治疗组 大鼠腹腔注射纳洛酮0 8m g k g 一，连续7d ，模型组和正 常组动物注射等剂量生理盐水。 1 2 药品与仪器 用F A C S - 4 2 0 流式细胞仪检测海马匀 浆，采用M o d f i t 分析软件对亚单倍体细胞数占被检细胞总 量

14、的百分率进行统计。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的 脱氧尿苷酸一生物素切口末端标记法，原位检测凋亡细胞，按 试剂盒( 德国宝灵曼公司) 程序进行。采用C M I A 病理图像 分析系统( 4 o ) 凋亡分析模块，量化凋亡细胞。 1 3 统计学分析 所有数据运用S P S S l l 0 软件包进行处 理。统计学方法采用单因素方差分析( o n e - w a yA N ( ) V A ) ， 万方数据 生垦塞旦盐丝送丛盘查! ! ! ! 笙! 旦箜! ；堂箜! ! 塑曼坐! ! 塑! ! ! ! ! ! 垡呈! ! 垡生! ! 塑! ! ! 业! 旦堡! 竺塑垒坚! ! ! ! ! Y ! !

15、 ：! ! 塑! ：! ! 1 7 如果组间因素有显著意义再采用再采用1 ) u n n e t t st e s t 和 T u k e y st e s t 。P o 0 5 表示差异有统计学意义。 2 结果 纳洛酮组大鼠海马锥体细胞的凋亡率为( 6 4 I 6 ) ， 模型组( 9 6 1 9 ) ，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ；纳洛 酮组大鼠凋亡细胞数为( 7 5 1 9 ) ，模型组( 1 2 8 土2 2 ) ，差 异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。说明纳洛酮能够明显减少铝 致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞的凋亡。见表1 。 表13 组大鼠海马锥体细胞凋亡比较( M

16、 e a n S D 。”= 9 ) 注：与正常组比，P 0 0 5 ；与纳洛酮组比，8 P 0 0 5 3 讨论 海马是大脑一个重要结构，极易受损并极具可甥性。海 马C A l 区锥体细胞与学习记忆密切相关，神经细胞的凋亡 参与了A l z h e i m e r s 病等一系列与学习记忆有关的疾病的发 生、发展。铝中毒可导致神经细胞的凋亡和退变 2 。 内源性阿片系统，包括阿片及阿片受体在动物的学习记 忆及调节神经细胞的发育、成熟方面起了重要作用。B a r r i t i 发现阿片受体拮抗剂纳络酮明显改善小鼠的记忆 3 ，但其具 体机制尚不清楚。为此我们用T U N E L 及流式细胞仪

17、等方 法，观察纳洛酮对铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞凋亡 的影响。 本实验结果显示，纳洛酮治疗组大鼠的海马C A l 区锥 体细胞凋亡率及凋亡细胞数较模型组明显减少，说明纳洛酮 能减少铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞的凋亡。 阿片肽和神经细胞的凋亡有密切联系，阿片肽神经毒性 之一就是促进神经细胞的凋亡 4 。吗啡可促进培养的胎儿 神经元细胞的凋亡，而该作用可被纳洛酮阻断 5 。 纳洛酮是阿片受体拮抗剂，对“型受体的拮抗作用最 强，剂量增大时也作用于* 、8 受体。纳洛酮的阿片受体拮抗 作用是其改善铝致学习记忆减退大鼠海马锥体凋亡的机制 之一。 另外，纳洛酮本身还具有广谱的药理作用，及明确的神

18、 经保护作用，减少病理状态下神经细胞凋亡 6 。纳洛酮可能 通过以下途径减少铝致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞的 凋亡：纳洛酮可改善脑代谢；具有抗氧化酶活性而减少自由 基的产生 7 ；降低小胶质细胞产生的超氧化物，稳定细胞膜， 减少细胞内钙超载。 我们的其它研究发现纳洛酮可明显减少铝致学习记忆 减退大鼠海马C A l 区锥体神经元细胞的丢失并改善其超微 结构，提高锥体细胞的D N A 含量。纳洛酮可能通过减少铝 致学习记忆减退大鼠海马锥体细胞凋亡改善学习记忆。 本实验为解释纳洛酮提高铝致学习记忆减退大鼠的学 习记忆能力的生物学机制提供了重要线索。 参考文献 1 - 1 3 S u nS h i

19、l e i ，M aG u a n g y u 。L iH u a ，e ta 1 E f f e c to fN a l o x o n eo n a l u m i n u m i n d u c e dl e a r n i n ga n dm e m o r yi m p a i r m e n ti nr a t s J N e u r oI n d i a ，2 0 0 5 5 3 ：7 9 2 S h a wC A ，P e t r i kM S , A l u m i n u mh y d r o x i d ei n j e c t i o n sl e a dt O m o

20、 t o rd e f i c i t sa n dm o t o rn e u r o nd e g e n e r a t i o n J JI n o r gB i o c h e m ，2 0 0 9 。1 0 3 ( 1 1 ) ：15 5 5 15 6 2 3 B a r a t t iC M I n t r o i n iI B ，H u y g e n sP P o s s i b l ei n t e r a c t i o nb e t w e e nc e n t r a lc h o l i n e r g i em u s c a r i n i ca n do p

21、i o i dp e p t i d e r g i cs y s - t e r n sd u r i n gm e m o r yc o n s o l i d a t i o ni nm i e e E l B e h a v i o rN e u r a l B i o l ，1 9 8 4 ，4 0 ：1 5 5 4 L iY ，L iH ，Z h a n gY ，e ta 1 T o l l l i k er e c e p t o r2 i sr e q u i r e df o r o p i o i d s - i n d u c e dn e u r o n a la p

22、o p t o s i s J B i o c h e mB i o p h y sR e s C o m m u n ，2 0 1 0 ，3 9 1 ( 1 ) ：4 2 6 4 3 0 5 H uS 。S h e n gW S ，L o k e n s g a r dJ R ，e ta 1 M o r p h i n ei n d u c e sa p o p t o s i so fh u m a nm i c r o g l i aa n dn e u r o n s J N e u r o p h a r m a c o l o g Y ，2 0 0 2 ，4 2z8 2 9 8 3

23、 6 6 S o n gY ，S h e nH 。D i n gA S ，e ta 1 E f f e c t so fn a l o x o n e0 1 “ 1r a t c o r t i c a ln e u r o na p o p t o s i si n d u c e db ya n o x i a 3 Z h o n g g u oW e i Z h o n gB i n gj iJ i uY iX u e ，2 0 0 3 ，1 5 ( 9 ) ：5 5 3 5 5 6 7 L i uB ，D uL ，H o n gJ & N a l o x o n ep r o t e

24、c t sr a td o p a m i n e r g i c n e u r o n sa g a i n s ti n f l a m m a t o r yd a m a g et h r o u g hi n h i b i t i o no fm i c r o g l i aa c t i v a t i o na n ds u p e r o x i d eg e n e r a t i o n J JP h a r m a e o l E x pT h e r ，2 0 0 0 ，2 9 3 ( 2 ) ：6 0 7 6 1 7 ( 收稿2 0 1 0 - 0 5 2 1 ) 丁苯酞对血管性痴呆大鼠认知功能、海马神经元结构及n N O S 的影响 孙玉华n卢宏2 1 ) 河南大学淮河医院神经内科开封4 7 5 0 0 02 ) 郑州大学第一附属医院神经内科郑州4 5 0 0 5 2 【摘要】 目的研究丁苯酞对血管性痴呆( V D ) 大鼠认知功能、海马神经元结构、及神经元型一氧化氮合酶( n N O S ) 的影 响。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型，1 0 0 只老龄大鼠随机分5 组，应用水迷宫、透射电镜及免 疫组化方法对各组大鼠学习记忆、神经元结构、n N O S 表达进行观察。结果与假手术组比较，大鼠学习记忆能力在造模后差 万方数据