结核菌-L型培养基的改进.pdf

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1、四川医学 2 0 0 4 年7 月第 2 5 卷( 第 7 期) S i c h u a n M e d i c a l J o u r n a l , 2 0 0 4 , V o l . 2 5 , N o . 7 7 3 5 结核菌一L型培养基的改进关 卢润生， 蒋绍双， 李定越， 郑德福， 邓大志， 陈秋， 扬均 ( 四川省疾病控制中心结核病预防控制所 ， 四川 成都 6 1 0 0 3 6 ) 【 摘要】 目 的对庄氏的改良T S A - L 培养基进行改进， 探索新的结核菌一 L 型培养基配方。方法配制改良T S A 一 L 培养基和羊血阳 一 L 培养基。用相同的前处理方法对临床疾

2、标本进行处理， 两种培养基针面上接种同量的标本前 处理液， 里3 7 9 C 孵箱培养。结果羊血T B -L 培养基的检出率显著高于改良T S A - L培养基， 且培养基上的菌落大， 易 观察。结论羊血T B - L 培养基制作容易， 成本低廉， 检出率明显高于改良T S A - L 培养基， 有推广应用的价值。 【 关键词】 结核菌一 L 型; 培养基; 改进 【 中图分类号】 R - 3 3【 文献标识码】 A【 文章编号】 1 0 0 4 - 0 5 0 1 ( 2 0 0 4 ) 0 7 - 0 7 3 5 - 0 2 I m p r o v e m e n t f o r c u

3、l t u r e b a s e o f m y c o b a c t e r i u m L - f o r m s . L u R u n s h e n g , J ia n g S h a o s h u a n g ， L i D i n g y u e ， e t a l . A n t i t u b e r c u l o u s i n s t i t u te o f S ic h u a n C D C ， C e n t e r F o r T u b e r c u l o s is P r e v e n t io n A n d C o nt r o l I

4、n s t i t u t e ， S ic h u a n C D C , C h e n g d u , 6 1 0 0 3 6 , C h i n a A b s t r a c t I O b j e c t iv e T o i m p r o v e z h u a n g s im p r o v e d T S A - L c u l tu r e B a s e , a n d e x p l o r e n e w c u l t u r e b a s e fo r tu b e r c u lo s is o f L - f o r m. Me t h o d s P

5、re p a r e I m p r o v e d T S A - L C u l t u r e B a s e a n d S h e e p B l o o d T B - L C u l t u r e b a s e . T h e c l i n i c a l p h l e g m s p e c i m e n w a s c o n d u c t - e d w i t h i d e n t i c a l p r e - tr e a t m e n t m e t h o d . O n t w o c u l t u r e b a s e s l o p e

6、s , t h e p r e - t re a t m e n t l i q u i d f o r s p e c i m e n t w i t h i d e n t ic a l q u a n ti t y w a s i n - o c u l a t e d , t h e n t h e p r e - t re a t m e n t li q u i d w a s p u t i n i n c u b a t o r o f 3 7C . R e s u l t s I t i s e a s i e r t o d e t e c t g e r m o u t

7、b y u s i n g s h e e p b l o o d T B - L c u l t u r e b a s e t h a n I m p r o v e d T S A - L C u l t u re B a s e , a n d t h e b a c t e r i u m c o l o n i e s c u l t u r e d o n i t h a v e l a r g e r s i z e t h a n o n g e n e r a l b a s e s I a n d t h e c o l o n i e s w e r e o b s e

8、 r v e d e a s y i l y . C o n c l u s i o n E a s i e r t o b e p ro d u c e d , l o w e r c o s t s a n d e a s i e r t o d e t e c t g e r m o u t , a l l t h e s e v i rt u e s m a d e S h e e p B l o o d T B - L C u l t u r e B a s e h a v e m o r e v a l u e t o b e p o p u l a r i z e d a n d

9、 a p p l i e d . K e y w o r d s m y c o b a c te r iu m I n f o r m s ; c u l t u r e b a s e ; i m p r o v e 1 9 6 0 年由M a tt m a n 等 t 首 次报道检出 分支杆菌- L 型以来， 经过几十年的发展， 无论是结核菌 一 L型的 检查方法， 还是检查用的培养基都有很大的改进。由 于庄氏 2 l 的改良T S A - L 培养基中的抓化血红素不易 溶解， 我们用羊血消化液代替氯化血红素， 观察两种培 养基对结核菌 一 L 型的检查效果。 1 材料和方法 1 . 1

10、 材料改良T S A一 L 培养基: 按庄氏配方制备成 试管斜面备用。羊血T B 一 L 培养基: 在庄氏配方的 基础上， 用羊血消化液代替抓化血红素， 由本室制备成 试管斜面备用。标本来源; 采集复、 难治肺结核患者 ( 经一个或一个以上标准化疗未治愈的结核病患者) 的 晨痰。 1 . 2 方法: 每份晨痰用酸碱中和离心法处理( 即一份 痰液， 加2 倍量的 l m o l , N a O H , 置3 7 消化 1 5 一 2 0 分 钟， 再用1 m o l 的H C l 中和至p H 6 . 8 一 7 . 2 , 3 0 0 0 r / m i n 离 心3 0 分钟) ， 取沉淀

11、2 滴接种于试管培养基斜面。放 3 7 c C 孵箱培养， 2 周开始观察结果， 培养到6 周结束。 1 . 3 结果 1 . 3 . 1 检出率: 用改良T S A一L培养基和羊血 T B一L 培养基共培养 1 3 7 例结核病患者的痰标本， 其中， 改良 T S A - L培养基的检出率 3 0 . 6 %; 羊血 T B一L培养基 的检出率 4 4 . 3 %。经统计学处理， 羊血 T S A一L培养 基的结核菌一 L型检出率显著高于改良T S A一L培养 基( P 0 . 0 1 ) 。 1 . 3 . 2 污染率: 改良 T S L一L培养基的污染率为 4 . 6 %， 羊血T B

12、一L 培养基的污染率为3 . 8 %， 二者之 间无显著性差异。 1 . 3 . 3 生长时间与菌落大小; 两种培养基上生长肉眼 可见的菌落需两周时间以上， 到3 周以后菌落不继续 生长， 二者的生长时间无明显差异。两种培养基上的 菌落以羊血 T B - L培养基容易观察， 菌落比改良T S A 一L 培养基上的菌落大。 2 讨论 改良T S A一L 培养基的检出率低， 很可能与培养 基中的氯化血红素有关。氯化血红素不但价格昂贵， 且在配制培养基时不易溶解， 分散不均， 直接影响到培 养基的制作质量。而羊血消化液价格便宜， 原料容易 获得， 培养基质量较为稳定。在改良T S A一L培养基 上生

13、长的菌落极为细小， 且与培养基的颜色相似， 在结 果观察时容易漏记。而在羊血 T B一L 培养基上生长 的菌落极易辨认。 两种培养基都有一个共同的缺点， 即菌落仅用 Z 一 N染色不能确定是结核菌 一L型， 还得经特殊鉴定 ( 培养基回复法或实验动物回复法等) 才能确诊。作为 研究还可行， 作为临床检查则显得费时， 费力， 这也可 能是难以在临床普遍开展的原因之一。 近年来， 国内外就结核菌 一L型的检出时有报道， 四川省卫生厅科研基金项目( 编号 0 0 0 1 7 2 ) 万方数据 7 3 6 四川医学 2 0 0 4 年 7 月第 2 5 卷( 第 7 期) S i c h u a n

14、M e d i c a l J o u r n a l , 2 0 0 4 , V o l . 2 5 , N o . 7 参考文献 : M a tt m a n L H , e t a l . L v a r i a t io n i n m y c o b a c t e r i a J l . A m R e v R e s p i r D i s , 1 9 6 0, 8 2 : 2 0 2 庄玉辉， 李国利， 韩元华， 等 . 抗酸菌一 L型培养基的改进【 J l . 微 生物学通报， 1 9 8 6 , 1 3 ( 2 ) : 9 4 一 9 5 金关普， 庄玉辉， 刘金伟， 等

15、. 痰结核分支杆菌阴性 L 型结核菌阳 性肺结核的临床观察 J . 中国防疹杂志， 1 9 9 1 , 1 3 : 1 1 4 D o ro z h k o v a I R , Z e m s k o v a Z S , K r u d u V N , e t a l . L t r a n s f o r m a t i o n o f m y - c o b a c t e r i a i n t h e l i g h t o f o u r r e n t e p i d e m i o l o g i c a l s i t u a t i o n o f t u b e r c u

16、 l o s i s i n t h e Wo r l d j . V e s t n R o s s A k a d N a u k , 1 9 9 5 , 7 : 3 0 一 3 3 汪万英， 何杰， 张世馥， 等 . 结核菌 一 L型与恶性淋巴瘤的关系 J . 中国微生态杂志， 1 9 9 5 , 3 : 4 7 汪万英， 姚敏， 郭彬 . 结核菌一 L 型感染与肺癌的关系 J l . 中国人 兽共患病杂志， 1 9 9 7 , 1 3 : 7 9 ( 收稿日 期: 2 0 0 3 - 1 2 - 3 0 ) ，JFesesJ ，12 resL广卫L 1仁J，.J 几J4 r.ILFes

17、L ，.J，esJ 气6 厂Lr.L 其检出率均不低。金关普 3 等在肺结核痰菌阴性的患 者中检出 2 9 . 4 %的结核菌 L型感染者。D o r o z h k o v a 等 4 1 在结核分支杆菌阳性患者中亦检出9 %的L 型结 核菌阳性。不管是结核分支杆菌阳性， 还是阴性的肺 结核患者， 事实上存在着结核菌 一L型感染。结核菌 一 L型不但可以导致结核病复发， 亦是不能准确了解 结核病疫情的一个因素。据最新的研究结果显示， 结 核菌一 L 型还与多种恶性肿瘤密切相关 5 , 6 1 。因此， 在 临床门诊中开展结核菌一 L型检查很有必要。但另外 一个问题又困扰着临床检验人员， 用现

18、行的检验方法 能否保证检验质量， 若每一个病例的培养物都进行了 特殊鉴定后再出报告， 患者和医院又能否接受。研究 新的检验方法和检测试剂， 才能从根本上解决结核菌 一 L 型不能在临床检验中普及的难题。 I V T过敏原体外检测在哮喘诊断中的应用 张利 ， 张宗玲 ( 成都市第一人民医院， 四川 成都 6 1 0 0 1 6 ) 【 关键词】 哮喘; 诊断; I V T 过敏原体外检浏 【 中图分类号】 R 3 9 2 . 8【 文献标识码】 B 美国A S I 公司提供的过敏反应体外检测试剂盒 O V T ) 是一种体外定性/ 半定量的酶免疫分析法， 可同时 独立检测各种常见的过敏反应， 并

19、可估计人血清或血浆 中I g E 的总水平。为了提高过敏性哮喘的诊断水平， 探 讨I V T 过敏反应体外检测与特异性皮肤试验的关系， 我 们对 3 0 例过敏性哮喘患者同一天进行了 I V T 过敏反应 体外检测和特异性皮肤试验。现将结果报告如下。 【 文章编号】 1 0 0 4 - 0 5 0 1 ( 2 0 0 4 ) 0 7 - 0 7 3 6 - 0 1 特异性皮肤试验结果比较， 见表 t o 表 1 3 0 例哮喘) V T与皮试结果分析 变应原 I V T 体外检测特异性皮肤试验 阳性人数阳性率( %) 阳性人数阳性率( %) 室尘 花粉 霉菌 1 2 1 7 1 4 11159

20、 节1 0 3 3 1 2 4 0 1 临床资料 1 . 1 检查对象: 根据病史选择了3 0 例过敏性哮喘病 人， 其中男 1 2 例， 女 1 8 例， 年龄9 一 7 7 岁， 平均年龄4 3 岁。同一天进行了I V T过敏反应体外检测和特异性皮 肤试验。 1 . 2 I V T 过敏原体外检测: 采用 I V T过敏反应检测试 剂盒吸人组( I V T 7 0 1 ) 0 3 0 例过敏性哮喘患者分别取 静脉血清4 0 川， 患者血清中的免疫球蛋白或抗体在反 应管中 反应， 与反应带结合的I g E 又与结合液反应， 再 与底物反应， 可以看见阳性标本出现由黄到紫的颜色 变化。颜色的深

21、浅和变化速度都和患者的I g E 抗体或 免疫球蛋白的滴度成正比。 1 . 3 特异性皮肤试验: 哮喘患者皮试前 1 2 小时禁用 抗组胺药物， 将我科 自制变应原 : 室尘、 花粉、 蜡、 霉菌 等浸液， 浓度( W/ V ) : 花粉为 1 : 1 0 0 0 ， 其余为 1 : 1 0 0 ， 分 别吸取0 . 0 1 一 0 . 0 2 m 1 ， 注人上臂外侧皮内产生大约 3 m m大小的风团， 伴有红晕者为阳性。 1 . 4 结果: 3 0 例哮喘患者的 I V T 过敏反应体外检测与 2 讨论 结果表明: IVT过敏原体外检测与特异性皮肤试 验结果， 两种方法符合率较高。IVT过

22、敏原体外检测 简便、 安全， 对临床诊断有一定的价值。我们用 I V T 过 敏原体外检测的目的， 不是取代现有的特异性皮肤试 验， 而是作为一种补充， 使病人有更多的选择。询问病 史中有高度过敏素质者可用I V T体外检测替代皮肤试 验， 可减少致敏性和增加病人敏感性的危险， 也可用于 极少数有皮肤疾患， 而不能进行皮肤试验的病人。另 外， 适用于没有开展变态反应特异性皮肤试验或没有 变应原的基层单位， 也可结合皮肤试验以提高诊断的 准确性。特异性皮肤试验并非绝对准确， 影响皮肤试 验的假阳性、 假阴性的因素很多， 最重要的一点是对病 人绝对安全。用 I V T过敏原体外检测代替皮肤试验， 可避免过敏反应的发生。 I V T 过敏原体外检测临床应用较为方便， 有较好 的敏感性和可靠性， 可作为临床检测的一项指标， 因它 能较好地反映体内的过敏状态。 万方数据