《维A酸诱导人类恶性黑色素瘤细胞株A375凋亡的受体机制研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维A酸诱导人类恶性黑色素瘤细胞株A375凋亡的受体机制研究.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、维A酸诱导人类恶性黑色素瘤细胞株A 3 7 5 凋亡的受体机制研究* 牛新武,冯捷,彭振辉,马惠群,刘超,袁景奕 西安交通大学第二医院 皮肤科(西安7 1 0 0 0 4 ) 【摘要】 目的研究维A酸诱导人类恶性黑素瘤细胞株A3 7 5凋亡的受体机制。方法通过B a x / B c l - 2免疫细 胞化学染色、 T UNE L法、 An n e x i nV/ P I染色以及活性C a s p a s e - 3检测3种维A酸( 9 - c i s - R A、 a t - R A a n d1 3 - c i s - R A) 、维A酸A受体( R AR )激动剂T T NP B和维A酸X
2、受体( R X R )激动剂Ma对A3 7 5细胞凋亡的影响。结果 维 A酸和T T NP B均不同程度的上调B a x表达并下调B c l - 2表达。 An n e x i nV/ P I和T UNE L检测结果均显示维A酸和 T T NP B可诱导A3 7 5细胞凋亡, 同对照相比均差异有统计学意义( P0 . 0 5 ) 。活性C a s p a s e - 3分析显示,除了Ma外,所有试剂均不同程度的上调C a s p a s e - 3的表达,以T T NP B的 作用最强( P 0 . 0 5 ) .Ac t i v e C a s p a s e - 3a n a l y s
3、i s s h o we dt h a t T T NP Ba n da l l o f r e t i n o i d s c o u l du p - r e g u l a t et h ee x p r e s s i o no f C a s p a s e - 3 ,a n dt h e e f f e c t o fT T NP Bwa ss i g n i f i c a n t l yg r e a t e rt h a nt h a to fo t h e r s( P0 . 0 5 ) ,1 3 - c i s - R A和a t - R A 的作用强于9 - c i s
4、 - R A( P 0 . 0 5 ) , T T NP B的作用强于维A酸( P0 . 0 5 ) , 3种 维A酸相比, 1 3 - c i s - R A和a t - R A的作用强于9 - c i s - R A( P0 . 0 5 ) ,见附表。 3 讨论 维A酸是维生素A的代谢物或衍生物,对于上 皮组织的生长、分化和维持正常状态有着重要的作 用,研究显示,维A酸可诱导恶性黑素瘤细胞株的凋 亡 6 ,但具体机制不明。本实验所用试剂有着不同的 受体结合特点,其中a t - R A是R AR和R X R共同配 体 7 , 1 3 - c i s - R A是R AR的配体 8 ,而9 -
5、 c i s - R A是 R X R的配体 9 。 这3种维A酸是同型异构体,在细胞 内可发生互变异构,能不同程度地同时激活R AR和 R X R ,因此它们并不具备真正意义上的受体选择 性。而T T NP B和Ma是受体选择性激动剂,它们在 细胞内性质稳定,不会发生受体结合特性的改变。 B c l - 2 / B a x基因蛋白同属B c l - 2基因家族, B c l - 2 蛋白可抑制细胞凋亡, B a x基因蛋白的功能与B c l - 2 蛋 白相反,可与B c l - 2蛋白形成异二聚体,从而使 B c l - 2蛋白失活,因此有促进细胞凋亡的作用。本研 究结果显示, 3种维A酸
6、( a t - R A、 1 3 - c i s - R A和9 - c i s - R A) 和T T NP B均可上调B a x表达,下调B c l - 2的表 达,其 中 T T NP B的 作 用 最 强,而Ma无 此 作 用。 045 四川大学学报(医学版)2 0 0 6年第3 7卷第4 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 期 An n e x i nV- F
7、 I T C / P I染色检测结果和T UNE L检测 结果显示,所有维A酸和T T NP B均可诱导A3 7 5细 胞的凋亡,其中T T NP B的作用最强,而Ma无此作 用。C a s p a s e家族是细胞凋亡过程中的主要执行因 子,在死亡受体途径和线粒体途径中均起着重要的 作用。其中, C a s p a s e - 3是最重要的执行C a s p a s e ,它 在细胞凋亡的早期阶段被活化,因此,活性C a s p a s e - 3是细胞凋亡过程中的一种重要标记物。本实验结 果 显 示, 3种 维 A酸 和R AR激 动 剂 均 可 上 调 C a s p a s e - 3
8、表达,其中以R AR激动剂T T NP B的作 用最为显著,而R X R激动剂Ma却无明显作用。这些 实验结果说明,维A酸能够诱导人类恶性黑色素瘤 A3 7 5细胞的凋亡,并且涉及到C a s p a s e - 3途径,该 诱 导凋亡过程可能与R AR的激活有关,而与R X R 的激活无关。 实验中我们发现, 3种维A酸均可诱导A3 7 5细 胞的凋亡,但其作用强度各不相同, R AR配体( 1 3 - c i s - R A和a t - R A) 的作用均强于R X R配体( 9 - c i s - R A) , 这从另一个侧面提示R AR的激活可能在维A 酸诱导凋亡的过程中起着重要的作用
9、,但是1 3 - c i s - R A和a t - R A的诱导凋亡作用弱于R AR激动剂 T T NP B的作用, 我们推测其原因可能为这两种维A 酸在细胞内性质不稳定,部分发生了互变异构,从而 消弱了其激活R AR的作用。同样的原因可解释尽管 9 - c i s - R A为R X R配体, 但仍具有较弱的诱导A3 7 5 细胞凋亡的作用。 参考文献 1J e ma l A,Mu r r a yT ,S a mu e l s A,e t a l .C a n c e r s t a t i s t i c s ,2 0 0 3 . C AC a n c e r JC l i n , 2
10、0 0 3 ; 5 3 ( 1 ) : 5 - 2 6 . 2Or l a n d i A,B i a n c h i L ,C o s t a n z oA,e t a l .E v i d e n c eo f i n c r e a s e d a p o p t o s i sa n d r e d u c e d p r o l i f e r a t i o n i n b a s a lc e l lc a r c i n o ma s t r e a t e dwi t ht a z a r o t e n e .JI n v e s t D e r ma t o l , 2
11、0 0 4 ; 1 2 2 ( 4 ) : 1 0 3 7 - 1 0 4 1 . 3E mi o n i t e L , G a l mo z z iF , R a f f o P , e ta l . R e t i n o i d s a n d ma l i g n a n tme l a n o ma :ap a t h wa yo fp r o l i f e r a t i o ni n h i b i t i o no n S KME L 2 8c e l l l i n e .An t i c a n c e r R e s , 2 0 0 3 ; 2 3 ( 1 A) :
12、1 3 - 1 9 . 4C i n c i n e l l i R ,D a l l a v a l l eS ,Me r l i n i L ,e ta l .A n o v e la t y p i c a l r e t i n o i de n d o we dwi t hp r o a p o p t o t i ca n da n t i t u mo ra c t i v i t y .J Me dC h e m,2 0 0 3 ;4 6 ( 6 ) : 9 0 9 - 9 1 2 . 5R o s e n t h a l MA,Or a t zR .P h a s eI Ic
13、 l i n i c a l t r i a l o fr e c o mb i n a n t a l p h a2 bi n t e r f e r o na n d1 3c i sr e t i n o i ca c i di np a t i e n t swi t h me t a s t a t i cme l a n o ma .Am JC l i nOn c o l , 1 9 9 8 ; 2 1 ( 4 ) : 3 5 2 - 3 5 4 . 6Z h a oX ,D e ma r yK,Wo n gL ,e ta l .R e t i n o i ca c i dr e c
14、 e p t o r - i n d e p e n d e n tme c h a n i s m o fa p o p t o s i so fme l a n o mac e l l sb yt h e r e t i n o i dC D 4 3 7( AHP N) .C e l l D e a t hD i f f e r , 2 0 0 1 ; 8 ( 9 ) : 8 7 8 - 8 8 6 . 7S i mo n i D ,T o l o me oM.R e t i n o i d s ,a p o p t o s i sa n dc a n c e r .C u r r P h
15、 a r m D e s , 2 0 0 1 ; 7 ( 1 7 ) : 1 8 2 3 - 1 8 3 7 . 8Wa l i s z e ws k iP ,Wa l i s z e ws k aM,G o r d o nN,e ta l .R e t i n o i d s i g n a l i n g i n i mmo r t a l i z e d a n d c a r c i n o ma - d e r i v e d h u ma n u r o e p i t h e l i a l c e l l s .Mo l C e l l E n d o c r i n o l
16、, 1 9 9 9 ; 1 4 8 ( 1 - 2 ) : 5 5 - 6 5 . 9S c h i me r l i kMI ,P e t e r s o nVJ ,Ho b b sP D ,e ta l .Ki n e t i ca n d t h e r mo d y n a mi ca n a l y s i so f 9 - c i s - r e t i n o i ca c i db i n d i n gt or e t i n o i d Xr e c e p t o r a l p h a .B i o c h e mi s t r y , 1 9 9 9 ; 3 8 ( 2 1 ) : 6 7 3 2 - 6 7 4 0 . ( 2 0 0 51 01 3收稿, 2 0 0 60 30 6修回) 编辑汤洁 145JS i c h u a nUn i v( Me dS c i E d i )Vo l . 3 7No = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = . 42 0 0 6