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1、基金项目： 国家 !“# 重点基础研究发展规划资助项目 （$%$. 41-，,-? 09A B148-9/43C DE00. 06 41-， B D F （黄传书） 通信作者： 刘秉慈， )%(% 北京， 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所 论著 维生素 ） 芘致细胞周期改变 的 7$G 通路 高艾H 刘秉慈H 沈福海H 杜宏举H 黄传书H 贾效伟H 尤宝荣H 叶萌 H H 【摘要】 H 目的H 探讨转录因子 7$G) 和 7$G+ 在维生素 ） 芘引起人胚肺成纤维细 胞 （I7JG） 细胞周期改变中的作用， 及其与细胞周期蛋白 K) （C.41 K)） 、 细胞周期蛋白依赖激酶 + （
2、） 芘刺激细胞 $+ E， 运用流式细胞术测定细胞周期时相分布， 用免疫印迹法检测蛋白 含量， 用 P-.QR90 #S % 软件对条带光强度进行分析， 脂质体转染法建立稳定转染反义 C.41 K) 或反义 ） 芘诱导 I7JG 中 C.41 K)、 ） 芘诱导的 I7JG D 期细胞百分率至 （#S $ T %S *） M， 并抑制苯并 （;） 芘诱导的 I7JG 上述蛋白的表达。反义 C.41 K) 和反义 ） 芘诱导的 I7JG 上述蛋白的表达， 反义 C.41 K) 可使苯并 （;） 芘诱导的 I7JG D 期细胞百分率降低至 （#)S $ T )S #） M。维生素 ） 芘诱导的 I
3、7JG 上述蛋白的表达， 且能够抑制苯并 （;） 芘诱导的 I7JG 的 D 期细胞百分率， 使其从 （+)S ) T %S $） M下降为 （#+S % T%S #） M。维生素 ） 芘诱导的 I7JG 的 D 期细胞 百分率， 使其从 （+)S ) T%S $） M下降为 （#S “ T)S (） M， 而且与单独反义 ） 芘诱导的 I7JG 的 D 期细胞百分率。结论H 维生素 ） 芘引起的细胞周期改变。 【关键词】 H 苯并芘； H 抗坏血酸； H 细胞周期蛋白 K) !“#$%“$0# (46+?6)*，/ =)*A ! 04B$6)4C 3E?;C 41 843;:41 ） WC9
4、-1- （;） R Q41=5-= E;1X-/ 06 - C.- 41 E5:;1 -:Y9C0 .51X 64Y90Y.;/3/（I7JG）;1= 3E- 9-.;3401/E4W Y-3?-1 7$G) ;1= C.41 K)U Y.- 39;1/6-3;13/，I7JG 39;1/6-3-= ?43E ;134/-1/- C.41 K) ;1= ;134/-1/- Y.4/E-= 30 =-3-3 3E- 9-.;3401/E4W 06 /4X1;.41X W;3E?;CS 1= W9-39-;3-= ?43E 843;:41 3401 ?43E （;） R 609 $+ E059/S
5、 VE- -W9-/401 .-8-./ 06 C.41 K)，1= 7$G+ ?-9- =-3-9:41-= YC -/3-91 Y.03 ;1= 3E- Y;1= 413-1/43C ?;/ ;1;.C/-= ;/ 3E- 9-.;348- 8;.5- 30 01390. YC 5/41X 3E- P-.QR90 #S % /063?;9-S G.0? .C/4/ ?;/ -:W.0C-= 30 =-3-3 3E- =4/394Y53401/ 06 - C.-S A)+35#+H （;） R /4X1464;13.C -.-8;3-= 3E- -W9-/401 .-8-./ 06 C.41
6、 K)，1= 7$G+ 41 I7JG -/S 43;:41 /-= 3E- -W9-/401 .-8-./ 06 ;Y08- W903-41/ 41 （;） RQ/34:5.;3-= I7JG -/S VE- -W9-/401 .-8-./ 06 3E-/- W903-41/ 41 （;） RQ39-;3-= ;Y08- 39;1/6-3;13/ ?-9- .0?-9 3E;1 3E0/- 41 （;） RQ39-;3-= I7JG -/S VE- -W9-/401 .-8-./ 06 ;Y08- W903-41/ ?43E 843;:41 ?-（4 A ; 4 =） ，! B ?-（:14
7、 1 ; ，! B ?-（:14 1 ;，! B 胎牛血 清的 X6YZ1D: C=、 Q 孵箱中 培养。取对数生长期的细胞加入适量的苯并 （,） 芘 后孵育 =: +。 =W 主要试剂： X6YZ 1D: _ R， 用无血 清 X6YZ 1D:的 909I聚丙烯酰胺凝胶电泳 （909I 6OTL） 并转至硝酸纤维膜， 对膜依次进行封闭， 一 抗、 二抗孵育和显色处理。条带光强度用 T/I62“ 4 胰酶消化细胞、 计数， 保证细胞数不小于 1 a 1 乙醇， 充分混匀， 不得有细胞团。: 过夜。12 ! !“?+* 3 A， 结果表明， 2 ! !“?+* 4 维生素 8 抑制苯并 （） 芘
8、诱导的 :; !“?+* 3 A。结果表明， 苯并 （） 芘诱导 :;=( 和 ;=3 的蛋白表达升高； 与苯并 （） 芘处理的正常 :;=(*3 的上游激酶； 维生素 8 可抑制苯并 （） 芘诱导的 :;） 。 数据为相对于对照光强度的比值， 免疫印迹图为 - 次独立 实验的典型代表； 7CD： 二甲基亚砜， 565+#$ 7(： 细胞周期蛋 白 7(， 8793： 细胞周期蛋白依赖激酶 3， :; !“?+* 3 A 前先用 ( !“?+* !“?+* =转录因子， 游离的;=可直接活化进入期所 (G中华预防医学杂志 H 年 - 月第 3. 卷第 期B 8A#$ I %1JK CJL， C
9、15A H，M?+ 3.，N?2 表 ! 维生素 “ 对苯并 （#） 芘诱导的 $% *85 / $% */5 - )5 / *85 4?AB 1- 0 ! 12.3 4)5 7 *-5 9)/5 6 *-5 7)5 4 *85 : $%5 ; */5 8 )-5 / *-5 )?AB 1- 0 苯并 ! （#） 芘 0 维生素 “ 4:5 - *)5 4 ):5 8 *85 )?AB 1-： 细胞 周期蛋白 1-， “1C:： 细胞周期蛋白依赖激酶 :， $%认为小牛血清也可轻微的诱导 %/: 表达。本研究结果表明， 反义 ?AB 1- 和反义 “1C: 分别能抑制苯并 （#） 芘诱导的 ?
10、AB 1- 和 “1C: 蛋白的表达， 而且在转染了反义 ?AB 1- 的 $%, 癌细胞迟滞在 . 期 -8。本研究结果表明， 维 生素 “ 能显著抑制苯并 （#） 芘诱导的细胞周期进 程， 使其迟滞在 ,-期， 与文献报道不一致 -8， 这可 能与细胞类型不同有关。维生素 “ 作用于苯并 （#） 芘处理的转染了反义 “1C: 的 $%， )-： )88=)845 /GMO#R F，GRM#OA _2，G# ，TN #5 XTLaTP#NPK #YLTL bG=-S Q/-=OTRA#NTR , （-） =QM#LT #PPTLN K T ?T #BR ABRYNAKB K #QKQNKLA
11、L AB MYO#B TQARTPOKAR #PABKO# G:)- TL5 “AB “#BTP XTL， /88-， 9： -:44=-:9)5 )IP#L#R CF，CYO#P G，CKMYQA#A _，TN #5 $AM RKLTL K OYNAQT #BNAKAR#BN aAN#OABL： TLLTBNA# ABPTRATBNL AB AOQPKaAB NMT TA#? K LN#BR#PR #BTP NMTP#Q?5 c GO “K FYNP， -666， -;： -)=/75 :cT? H1，“MTB %c，,YR#L c2，TN #51ALPYQNAKB K T ?T WABTN
12、AL ? TBVK # Q?PTBT：ABaTPLT TQPTLLAKB Q#NNTPBL K HX“G=- #BR Q7) AB 2“=9 TL #PPTLNTR AB . #BR ,/5 FTKQ#LA#， /888， /： :48=:985 7GN cX， “TaT#BR c中华预防医学杂志 /884 年 ) 月第 :8 卷第 / 期! “MAB c IPTa 2TR， 2#PM /884，_K :8，FK5 / !“#$%;， 2?42=;7 AB“(-*!# 份 （用毛刷扫取床板 灰尘） 、 枕尘 AP 份、 桌面尘 2=; 份、 地板尘 2=; 份和门楣窗 尘 2=; 份。取回的样
13、本依次置平皿内， 连续变倍显微镜下， 用 ; 号毛笔将样本从平皿一侧拨至另一侧， 当发现螨时用另 一支 ; 号毛笔 （蘸水并撇尖） 将螨检出。根据张智强和梁来 荣 M记述的分类意见， 将所采获的螨制成玻片标本， 按其 科、 属和种的特征进行分类鉴定。 27 结果： 尘螨检出率为 ?Y A;Z， 其中床尘、 枕尘、 桌面 尘、 地板尘和门楣窗楣尘的检出率依次为=2Y Z、 =?Y =Z、 MAY ?;Z、 2?Y A;Z和 M?Y A;Z， 以枕尘和床尘的检出率较高。 从一楼至六楼的学生宿舍采集的尘样中， 螨的检出率依次为 =MY2MZ （2=N?2Z受检者皮肤挑刺试验阳性， 提示青 少年变态反
14、应性疾病的发生与生活环境孳生的尘螨有一定 关系。因此， 应重视减少和清除居室环境孳生的螨类， 保护 学生身体健康。 室内不同地点的尘样具有不同的微生态环境， 枕尘和床 尘样本尘螨的检出率高于其他样本， 可能是因为床和枕头等 与人体接触时间多， 温湿度相对较高， 且具有螨喜食的人体 头皮屑， 因此螨类孳生率高。从不同楼层学生宿舍采集的尘 样， 一楼检出率较高， 一般认为与楼下湿度高于楼上有关。 当然， 楼层越高， 通风越好， 螨孳生密度越低。 热带无爪螨为热带和亚热带地区居室内优势螨种， 国内 以往文献记述甚少， 仅 D-; 级本科班、 2;? 级检验专科班 同学协助标本采集 参考文献 M张智强， 梁来荣， 编著Y 农业螨类图示检索Y 上海： 同济大学出版 社， MA， MM=： M?4M?Y （收稿日期： 2;=4;A4;） （本文编辑： 刘群） A中华预防医学杂志 2;P 年 月第 ?; 卷第 2 期X :*!“ 8 Q%$S R$5， R;P，V(, ?;，F(7 2