缺氧中和缺氧后亚低温时炎症基因表达谱的变化.pdf

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1、基础研究 缺氧中和缺氧后亚低温时炎症基因表达谱的变化 崔红1 ， 2 张万东2 ! “ # $ %& ( ) * $ + , - 3 . “ - $ ) “/ ( “ - $ # $ 0 , 1 $ ) 2 （1 .首都医科大学附属北京友谊医院儿科； 2 .加拿大国家研究院生物研究所；3 .加拿大东安大略省儿童医院） 【摘要】 目的了解缺氧中和缺氧后亚低温时炎症相关基因的变化。方法将体外培养的人脑血管内皮细胞 （H C E C） 分为对照 组和实验组。对照组细胞常规培养， 实验组细胞去掉细胞培养液， 更换为无血清、 低糖M 1 9 9， 置于缺氧箱房中， 再分为2组：组 为常温缺氧后低温恢复；

2、组为低温缺氧后常温恢复。取细胞并分离总R N A后， 用D N A微列阵技术观察缺氧以及缺氧中和缺 氧后亚低温时H C E C炎症相关基因表达谱的变化。结果 1） 白介素- 1受体1型 （I L - 1 R 1） 、 类1型白介素- 1受体 （I L - 1 R L 1） 、 白介 素- 1 （I L - 1 ） 、 白介素- 1 1（I L - 1 1） 、 -干扰素调节因子2 （I R F 2） 和集落刺激因子1（C S F 1） 分别在某些时间点上调； 白介素- 1受体拮 抗剂 （I L - 1 R N） 、 白介素- 6（I L - 6） 、 -干扰素受体2 （I F N G R 2）

3、 、 集落刺激因子3受体 （C S F 3 R） 、 淋巴细胞黏附因子1（S E L L） 、 细胞间 黏附因子3（I C AM 3） 、 血小板 内皮细胞黏附因子 （P E C AM 1） 和内皮细胞黏附因子1（S E L E） 则在不同的时间点下调； -干扰素诱 导蛋白3 0（I F I 3 0） 在某一些时间点上调， 但在低温缺氧后常温恢复时下调； 肿瘤坏死因子家庭成员7（T N F R S F 7） 则仅在低温时下 调。2） 缺氧4h、 3 2低温使下调基因增多。结论 缺氧可以使I L - 1 、 I L - 1 R L 1、I L - 1 R 1等部分损伤性炎症基因表达上调，I L

4、- 1 1 的上调可能为保护性反应； T N F基因表达的上调可能起双重作用。 【关键词】c D N A微列阵技术；缺氧；亚低温；血管内皮细胞 【中图分类号】Q7 8 6 M i c r o a r r a yP r o f i l i n go f I n f l a LL a t o r yG e n eE x p r e s s i o n i nH y p o x i a - H y p o t h e r L i a - T r e a t e dH u L a nC e r e b r a lE n d o t h e l i a lC e l l s C u iH o n g 1

5、，2， Z h a n gW a n d o n g 2， J a m i eH u t c h i s o n 3， D a n i c aS t a n i m i r o v i c 2 （1 .D e p a r t m e n t o fP e d i a t r i c s，B e i j i n gF r i e n d s h i pH o s p i t a l，C a p i t a lU n i v e r s i t y o fM e d i c a l S c i e n c e s；2 .I n s t i t u t eF o rB i o l o g i c S

6、 c i e n c e s，N a t i o n a lR e s e a r c hC o u n c i l o fC a n a d a；3 .T h eC h i l d r e nsH o s p i t a l o fE a s t e r nO n t a r i o，P I C U，C a n a d a） 【A B S T R A C T】 O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ei n f l a m m a t o r yg e n ee x p r e s s i o ni nh y p o x i a - h y

7、 p o t h e r m i a - t r e a t e dh u m a nc e r e b r a l e n d o t h e l i a l c e l l s （H C E C）.M e t h o d s T w og r o u p sw e r eu s e d：p o s th y p o x i ch y p o t h e r m i aa n di n t r ah y p o x i ch y p o t h e r m i a .F o rt h e e x p e r i m e n t s，t h ec u l t u r em e d i u mf

8、 o rH C E Cw a sc h a n g e dt oM 1 9 9 （s e r u m - f r e e，l o wg l u c o s e）b e f o r et h ec e l l ss u b j e c tt oh y p o x i a h y p o t h e r m i a . T o t a lR N Aw e r e t h e n i s o l a t e da n d r e v e r s e - t r a n s c r i b e d t o c D N Af o rm i c r o a r r a y e x p e r i m e

9、n t s . R e s u l t s T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t：1）I L - 1 R 1、I L - 1 R L 1，I L - 1，I L - 1 1，I R F 2，I G F B P 2，I G F B P 3 a n dC S F 1w e r e u p - r e g u l a t e d，I L - 1 R N，I L - 6，I F N G R 2，C S F 3 R， S E L L，I C AM 3，P E C AM1 a n dS E L Ew e r e d o w n - r e g u l a t e

10、d a t c e r t a i n t i m e - p o i n t s . I F I 3 0w a s u p - r e g u l a t e d d u r i n gh y p o x i c h y p o t h e r m i a， b u t d o w n - r e g u l a t e d a f t e r h y p o x i c h y p o t h e r m i a t r e a t m e n t . T N F R S F 7w a s d o w n - r e g u l a t e d d u r i n gh y p o t h

11、 e r m i a o n l y . 2）M o r e g e n e sw e r e d o w n - r e g u l a t e d b yh y p o x i a f o r 4h a t 3 2t h a n t h a t a t 3 7 .C o n c l u s i o n S o m e i n f l a m m a t o r y g e n e s a r e u p - r e g u l a t e d d u r i n gh y p o x i a， s u c ha s I L - 1，I L - 1 R L 1a n dI L - 1 R 1

12、 .T h eu p - r e g u l a t e di n f l a m m a t o r yg e n e ss u c ha sI L - 1 1m a yb er e l a t e dt op r o t e c t i v er e s p o n s et o h y p o x i a . 【K e yw o r d s】c D N Am i c r o a r r a y；h y p o x i a；m i l dh y p o t h e r m i a；h u m a nc e r e b r a l e n d o t h e l i a l c e l l

13、s 脑缺氧 （h y p o x i a） 是许多急重症疾病， 如新生儿缺 氧缺血性脑病 （H I E） 、 颅脑外伤、 心脏骤停等的主要损 伤机制。亚低温术 （m i l dh y p o t h e r m i a）（治疗温度不低 于3 1） 是近年来临床用于降低脑缺氧致残率的有 效方法之一。有关低温术对缺氧后脑细胞保护作用 的机制虽有个别报道， 但确切机制仍不十分清楚。为 了系统了解缺氧中 后亚低温过程中多个炎症相关基 因的变化， 本研究应用D N A微列阵技术 1对氧糖剥 夺以及氧糖剥夺时和剥夺后亚低温环境人类脑血管 内皮细胞 （H C E C） 炎症相关基因表达谱的变化进行了 研究，

14、 并阐述其机制， 为临床防治缺氧缺血提供实验 依据。 1 材料和方法 1 . 1 材料 细胞培养液和T r i z o l（G I B C O公司） ； 胎牛血清 2 0 0 6年2月 第2 7卷第1期 首 都 医 科 大 学 学 报 J o u r n a l o fC a p i t a lU n i v e r s i t yo fM e d i c a l S c i e n c e s F e b . 2 0 0 6 V o l . 2 7 N o . 1 （H y c l o n e公司） ； 内皮细胞生长增强剂、 胰岛素-转铁 蛋白 补 充 物 （I T S） （C o l l

15、a b o r a t i v eB i o m e d i c a lP r o d - u c t s） ； 人血清和明胶购自 （S i g m a） ； 人类1 . 7KD N A芯 片 （加拿大U n i v e r s i t yH e a l t hN e t w o r k， O C I） 。 1 . 2 细胞培养与分组 原代H C E C分离自癫痫病人手术中取出的大脑 皮质组织 （由加拿大蒙特利尔神经科学研究所提供） 。 分离方法如S t a n i m i r o v i c 2所述， 将 H C E C持续培养 于含6 5 % D e l b e c o修饰的E a g l

16、 e液 （DM E） ， 2 0 %黑色 素瘤细胞培养液 （M C M） ， 1 0 %胎牛血清，5 %人血清， 25 0 0Um L肝素， 内皮细胞生长增强剂 （0 . 3g L） ， 10 0 0 * I T S （1m LL） 的培养液及3 7、 5 % C O2和 9 5 %空气的培养箱中。细胞形态、 表型、 生化和功能 特征鉴定亦如S t a n i m i r o v i c 2所述。将培养细胞分为 对照组和实验组， 对照组细胞常规培养， 实验组细胞 去培养液换无血清低糖M 1 9 9后再分为缺氧后低温 组 （组） 和缺氧时低温组 （组） 。 1 . 3 氧糖剥夺和低温术 待H C

17、 E C长满9 0 %， 实验组去掉细胞培养液， 用 H a n k s平衡盐溶液 （H B S S） 清洗2遍， 更换为无血清、 低糖 （10 0 0m gL） 的M 1 9 9， 并置于缺氧箱房 （A n a e r - o b i cS y s t e mM o d e l 1 0 2 4，F o r m aS c i e n t i f i c） （氧体积分 数低于2 %、 温度和湿度可控） 。组缺氧箱房温度设 置为3 7， 组设置为3 2。4h后将2组细胞重 置于完全培养液和5 % C O 2、 9 5 %空气的培养箱中。 将I组5 0 %细胞的培养箱温度仍设为3 7 ， 另外 5

18、0 %细胞降至3 2， 并分别于缺氧4h后的0、4和 1 8h收集细胞， 分离总R N A；组培养箱温度恢复为 3 7， 于缺氧4h后的0、4h收集细胞， 分离总R N A。 1 . 4 分离总R N A 用T r i z o l试剂分离总R N A， 溶于经去R N A酶的 去离子水中， 测定2 6 0n m紫外吸收率， 检测总R N A。 1 . 5 探针的合成、 标记与纯化 每个样品取总R N A5 g， 加入5 *f i r s t s t a n d a r d 缓冲液8 . 0L， 1 0 0m m o l LA n c tm R N A引物1 . 5 L， 2 0m m o l

19、Ld N T P - d T T P3 . 0L， 2m m o l Ld T T P 3 . 0L，2m m o l LA A - d U T P3 . 0L， 0 . 1m o l LD T T 4 . 0L， 对照R N A1 . 0n g， 加入经去R N A酶的去离 子水至最终体积4 0L， 6 55m i n，4 25m i n， 再 加入反转录酶1 . 0L， 4 20 5m i n后9 55m i n， 使反转录酶失活。加入8L1m o lLN a O H6 55 1 m i n， 去除残留R N A， 加入等量1m o l L H C l中和 N a O H。用P C R滤过

20、柱 （M i c r o c o nP C Rp u r i f i c a t i o n c o l u m n s，M i l l i p o r e） 纯化探针。分别加入荧光素C y 3 和C y 5（A m e r s h a m B i o s c i e n c e sU K） 标记探针。用 P C R纯化试剂盒 （Q i a g e n） 进一步纯化标记后的探针。 1 . 6 杂交、 清洗与扫描 杂交： 将标记后探针加入盛有专门杂交液和 D N A芯片的杂交试管内 （A t l a s TMG l a s sH y b r i d i z a t i o n C h a m b

21、 e r，C l o n t e c h） ， 黑暗中5 0过夜。清洗： 室温 下1 *S S C清洗2次， 每次5m i n； 5 0，0 . 1 % S D S 1 *S S C清洗2次， 每次1 0m i n； 室温下0 . 1*S S C清 洗2次， 每次2m i n。清洗均在摇床上 （2 rm i n） 进行。 清洗后离心干燥。上机 （S c a n A r r a y5 0 0 0） 扫描。 1 . 7 图像分析及数据处理 用Q u a n t A r r a y软件处理扫描后得到的图像， 用 N o r m a l i s e r软件处理所得数据， 在E x c e l软件上对数

22、 据进行组间t检验， P 0 . 0 5为差异有统计学意义。 2 结果 2 . 1 炎症相关基因表达的改变 白介素- 1受体1型 （I L - 1 R 1） 、 类1型白介素- 1受 体 （I L - 1 R L 1） 、 白介素- 1 （I L - 1 ） 、 白介素- 1 1（I L - 1 1） 在一些时间点呈上调趋势； I L - 1受体拮抗剂 （I L - 1 R N） 、I L - 6则在一些时间点呈下调趋势； -干扰素诱 导蛋白3 0（I F I 3 0） 在一些时间点上调， 而在低温缺氧 后常温恢复4h时下调； -干扰素调节因子2 （I R F 2） 在常温缺氧时上调； -干扰

23、素受体2 （I F N G R 2） 在低温 缺氧时下调； 集落刺激因子1（C S F 1） 在常温缺氧和其 后常温恢复和低温恢复的4个时间点均呈上调趋势； 集落刺激因子3受体 （C S F 3 R） 在常温缺氧时下调； 淋 巴细 胞 黏 附 因 子1（S E L L） 、 细 胞 间 黏 附 因 子3 （I C AM 3） 、 血小板 内皮细胞黏附因子 （P E C AM 1） 和 内皮细胞黏附因子1（S E L E） 在常温缺氧和其后常温 恢复和低温恢复的不同时间点表现为下调趋势； 肿瘤 坏死因子家族成员7（I N F R S F 7） 则仅在低温时下调， 详见表1。 2 . 2 亚低温对

24、缺氧及缺氧后恢复时H C E C基因表达 谱的影响 如图1所示， 3 7缺氧4h时上调基因占总基因 百分率最高， 为7 . 6 4 %； 3 2缺氧4h时下调基因占 总基因百分率最高， 为1 2 . 2 2 %。提示同为缺氧4h， 3 2低温使下调基因增多。 17 第1期崔红等： 缺氧中和缺氧后亚低温时炎症基因表达谱的变化 表1炎症相关基因表达的变化 T a b1 C h a n g e s o f e x p r e s s i o no f i n f l a L L a t o r y g e n e s i nd i f f e r e n t t i L e - p o i n t

25、s I t e m3 7H 4h 3 7H 4h 3 7R 4h 3 7H 4h 3 7R 1 8h 3 7H 4h 3 2R 4h 3 7H 4h 3 2R 1 8h 3 24 h3 2H 4h 3 2H 4h 3 7R 4h I L - 1 R 1 I L - 1 R L 1 I L - 1 I L - 1 R N I L - 6 I L - 1 1 I F I 3 0 I R F 2 I F N G R 2 C S F 1 C S F 3 R S E L L I C AM 3 P E C AM 1 S E L E T N F R S F 7 P 0 . 0 5g e n e u p -

26、r e g u l a t e d，s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t，P 0 . 0 5g e n e d o w n - r e g u l a t e d，s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t；3 7H 4h：3 7， h y p o x i a4h；3 7H 4h3 2R 1 8h：3 7h y p o x i a 4h3 2r e c o v e r y 1 8h；3 7H 4h3 7R 4h：3 7h y p o x i a 4h3 7r e c o v - e r

27、 y4h；3 24 h：3 24h；3 7H 4h3 7R 1 8h：3 7h y p o x i a 4h3 7r e c o v e r y1 8h；3 2H 4h：3 2h y p o x i a 4h；3 7 H 4h3 2R 4h：3 7h y p o x i a 4h3 2r e c o v e r y4h；3 2H 4h3 7R 4h：3 2h y p o x i a 4h3 7r e c o v e r y4h . 图1亚低温对缺氧及缺氧后恢复时H C E C 基因表达谱的影响 F i g 1 I n f l u e n c e s o fL i l dh y p o t h

28、e r L i a t oH C E C d u r i n gh y p o x i aa n dp o s t h y p o x i a 1：h y p o x i a 4h i n3 7；2：h y p o x i a 4h i n3 2；：r e c o v e r y 4 h i n3 7f o l l o w i n gh y p o x i a4h i n3 7；：r e c o v e r y4h i n 3 7f o l l o w i n gh y p o x i a 4h i n3 2. 3 讨论 继发性炎症反应和炎症介质在缺氧缺血后脑损 伤 （H I B D） 发生发

29、展过程中的作用引起广泛关注 3 。 H C E C是血-脑脊液屏障的重要组成部分， 其自身能分 泌多种细胞因子和化学因子， 直接参与缺氧时和其后 的炎症反应过程， 亦是脑缺氧时中性粒细胞化学趋化 剂的重要来源之一。 3 . 1 缺氧后脑损伤时炎症介质的作用 缺氧缺血 （H I） 后早期炎症过程是造成脑损伤机 制之一。但也有人认为炎症细胞因子可能与 “前条件 机制” 有关 4 ， H I后早期的炎症过程对随后的损伤起 保护性作用， 是去除坏死组织所必需的， 有益于脑细 胞的康复和脑组织的重建 5 。 白介素家族中许多成员参与了H I后的炎症反应 过程。如表1所示， I L - 1、I L - 1

30、 R 1和I L - 1 R L 1在缺氧 时和缺氧后恢复期的几个时间点呈上升趋势， I L - 1 R N则呈下降趋势， 而且此变化主要发生在缺氧后的 早期 （缺氧4h） 。以往研究证明 69 ， 在缺氧脑细胞和 梗死周围组织I L - 1 和I L - 1 R 1的表达增加与H I B D 有关； 因此I L - 1被认为是一种在H I后早期的损伤性 炎症介质； I L - 1 R N则为一种保护性炎症介质。 有关I L - 6与缺氧关系的研究报道不多。本研究 结果显示： 在常温缺氧4h、 常温缺氧4h后常温恢复 1 8h和低温缺氧4h后常温恢复4h 3个时间点，I L - 6 表达呈下调

31、趋势。这点与P e a r l s t e i n 1 0 的研究结果相 反。这可能与细胞系和实验条件不同有关， 也可能是 检测误差所致， 有待进一步研究。K u e n z l e r等人 1 1 报 道， 静脉注射I L - 1 1预处理动物， 可以减轻肠道缺氧 再灌注时细胞的凋亡和坏死。本研究显示常温缺氧4 h，I L - 1 1基因表达上调。提示上述过程可能是一种保 护性反应。干扰素 （I F N） 可以诱导细胞产生多种细胞 内蛋白而介导其生物活性。本实验中I R F 2在常温缺 27 首 都 医 科 大 学 学 报第2 7卷 氧时上调； I F I 3 0在常温缺氧后常温恢复期上调，

32、 低温 缺氧后常温恢复期下调 （表1） 。这可能与缺氧激活转 录， 低温抑制转录有关。I F N G R 2在低温缺氧4h转 为下调趋势， 可能与低温抑制转录有关。T N F R S F 7 的主要功能是使激活的T细胞继续存活， 并发挥作 用。本研究观察到在低温时该基因表达下调， 这是否 为低温减轻缺氧后损伤的保护性反应， 还有待进一步 研究。 S c h a b i t z等 1 2 于动物H I后3 0m i n静脉注射粒 细胞集落刺激因子 （G - C S F） ， 可使脑梗死面积比对照 组缩小4 7 %， 并能在神经细胞和胶质细胞中检测到 G - C S F受体 （G - C S F

33、R s） 。在梗死灶周围， 经G - C S F处 理过的信号转导物质和转录激活物质3（S T A T 3） 表 达明显增强； 因此认为G - C S F有明显的神经保护作 用。本实验结果显示M - C S F（C S F 1） 在常温缺氧、 常 温缺氧后常温恢复期和低温恢复早期均为上调趋势； C S F 3 R在常温缺 氧 时 为 下 调 趋 势 （表1） 。提 示 C S F 3 R基因表达的下调是缺氧损伤的结果， 是对 H I B D恢复的不利因素。内皮细胞黏附分子和白细胞 黏附分子调节缺氧后白细胞向脑组织内的聚集反应。 白细胞黏附至血管内皮细胞上也可导致血-脑脊液屏 障的 破 坏 和

34、微 血 管 的 阻 塞 5 。本 研 究 观 察 到， I C AM 3、S E L L、P E C AM、S E L E在常温缺氧后及常温 和低温恢复期表现为下调趋势 （表1） 。此种现象与 C a s s i e 1 3 报道的缺氧刺激使上述基因表现为上调趋 势有所不同， 原因尚待进一步研究。 3 . 2 亚低温术对缺氧后脑损伤的保护作用 本研究结果显示， 同样为缺氧4h后， 低温条件较 常温有更多的基因表达下调。炎症相关基因， 如 T N F R S F 7仅出现在低温时， 提示低温使某些缺氧诱 导表达的损伤性基因下调， 因而起到一定保护作用。 综上所述， 缺氧可使部分损伤性炎症基因表达

35、上 调， 如I L - 1 、 I L - 1 R L 1、I L - 1 R 1； 部分炎症相关基因的 上调可能为保护性反应， 如I L - 1 1； 另一些基因如 T N F R S F 7表达上调， 可能起双重作用。 4 参考文献 1 W i d l a kP . D N Am i c r o a r r a y s，a n o v e l a p p r o a c h i n s t u d i e s o f c h r o m a t i n s t r u c t u r e J. A c t aB i o c h i mP o l，2 0 0 4， 5 1：1 8 . 2S

36、t a n i m i r o v iDB，M o r l e yP，B a l lR，e t a l . A n g i o t e n s i nI I - i n d u c e de n d o c y t o s i si n h u m a nc e r e b r o m i c r o v a s c u l a re n - d o t h e l i a l c e l l s i s r e g u l a t e d b y t h e i n o s i t o l - p h o s p h a t e s i g n a l i n g p a t h w a y

37、 J. JC e l l P h y s i o l，1 9 9 6， 1 6 9：4 5 5 4 6 7 . 3H u n gTH，C h a r n o c k - J o n e sDS，S k e p p e r JN，e t a l . S e - c r e t i o no f t u m o r n e c r o s i s f a c t o r - a l p h a f r o mh u m a np l a c e n t a l t i s s u e s i n d u c e db yh y p o x i a - r e o x y g e n a t i o

38、 nc a u s e s e n d o t h e l i a l c e l l a c t i v a t i o n i nv i t r o：ap o t e n t i a lm e d i a t o ro f t h e i n f l a m - m a t o r y r e s p o n s e i np r e e c l a m p s i a J.A mJP a t h o l，2 0 0 4， 1 6 4：1 0 4 9 1 0 6 1 . 4B a n d y o p a d h y a yD，C h a t t o p a d h y a yA，G h o

39、 s hG，e t a l . O x - i d a t i v e s t r e s s - i n d u c e d i s c h e m i ch e a r td i s e a s e：p r o t e c t i o nb y a n t i o x i d a n t s J. C u r rM e dC h e m，2 0 0 4， 1 1：3 6 9 3 8 7 . 5F e u e r s t e i nGZ，W a n gX，I n f l a m m a t i o na n d s t r o k e：b e n e - f i t sw i t h o u

40、 t h a r m？ J. A r c hN e u r o l，2 0 0 1，5 8：6 7 26 7 4 . 6Z h a n gW，S m i t hC，H o w l e t tC，e t a l . I n f l a m m a t o r ya c t i - v a t i o no f h u m a n b r a i n e n d o t h e l i a l c e l l s b y h y p o x i c a s t r o c y t e s i nv i t r o i sm e d i a t e db yI L - 1 b e t a J. JC

41、 e r e bB l o o dF l o w M e t a b，2 0 0 0，2 0：9 6 7 9 7 8 . 7D a v i e sCA，L o d d i c kSA，T o u l m o n dS，e ta l . T h ep r o - g r e s s i o na n dt o p o g r a p h i cd i s t r i b u t i o no fi n t e r l e u k i n - 1 b e t a e x p r e s s i o n a f t e rp e r m a n e n tm i d d l ec e r e b r

42、 a l a r t e r yo c c l u s i o n i n t h er a t J. JC e r e bB l o o dF l o w M e t a b，1 9 9 9， 1 9：8 7 9 9 . 8L o v eS，B a r b e rR，S r i n i v a s a nA，e t a l . A c t i v a t i o no f c a s - p a s e - 3i np e r m a n e n ta n dt r a n s i e n tb r a i ni s c h a e m i ai nm a n J. N e u r o r

43、e p o r t，2 0 0 0， 1 1：2 4 9 5 2 4 9 9 . 9R a b u f f e t t iM，S c i o r a t iC，T a r o z z oG，e t a l . I n h i b i t i o no f c a s p a s e - 1 l i k e a c t i v i t yb yA c - T y r - V a l - A l a - A s p - c h l o r o m e t h y l k e t o n e i n d u c e sl o n g - l a s t i n gn e u r o p r o t

44、e c t i o ni nc e r e b r a l i s - c h e m i a t h r o u g ha p o p t o s i sr e d u c t i o na n dd e c r e a s eo fp r o i n - f l a m m a t o r yc y t o k i n e s J. JN e u r o s c i，2 0 0 0， 2 0：4 3 9 8 4 4 0 4 . 1 0P e a r l s t e i nDP，A l iMH，M u n g a i PT，e t a l . R o l e o fm i t o - c h

45、 o n d r i a l o x i d a n tg e n e r a t i o n i ne n d o t h e l i a l c e l l r e s p o n s e s t o h y p o x i a J.A r t e r i o s c l e rT h r o m bV a s cB i o l，2 0 0 2， 2 2： 5 6 65 7 3 . 1 1K u e n z l e rKA，P e a r s o nPY，S c h w a r t zMZ . I L - 1 1p r e - t r e a t m e n t r e d u c e s

46、 c e l l d e a t ha f t e r i n t e s t i n a l i s c h e m i a - r e p e r - f u s i o n J. JS u r gR e s，2 0 0 2， 1 0 8：2 6 8 2 7 2 . 1 2S c h a b i t zWR，K o l l m a rR，S c h w a n i n g e rM，e t a l . N e u r o - p r o t e c t i v e e f f e c t o f g r a n u l o c y t e c o l o n y - s t i m u l

47、 a t i n g f a c t o r a f - t e r f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a J. S t r o k e，2 0 0 3， 3 4：7 4 57 5 1 . 1 3C a s s i eS，M a s t e r s o nMF，P o l u k o s h k oA，e t a l . I s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n d u c e st h er e c r u i t m e n to fl e u k o c y t e sf r o m w h o l eb l o o du n d e rf l o wc o n d i t i o n s J.F r e eR a d i cB i o l M e d，2 0 0 4，3 6：1 1 0 2 1 1 1 1 . （收稿日期： 2 0 0 4 1 0 0 9） 37 第1期崔红等： 缺氧中和缺氧后亚低温时炎症基因表达谱的变化