GB-11749-1989.pdf

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1、中华人 民共和 国国家标准 牙科复合树脂充填材料 GB 1 1 7 4 9 -8 9 Re s i n一b a s e d d e n t a l f i l l i n g ma t e r i a l s 本标准参照采用国际标准I S O 4 0 4 9 -1 9 7 8 牙科复合树脂充填材料和I S O / T R 7 4 0 5 -1 9 8 0齿 科材料生物评价。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了牙科复合树脂充填材料的性能及其试验方法。 本标准适用于化学固化和光固化的牙科复合树脂类充填材料。 2 引用标准 G B 1 9 1 包装储运图示标志 GB 2 8 2 8 逐批检查计数抽

2、样程序及抽样表 ( 适用于连续批的检查) GB 2 8 2 9 周期检查计数抽样程序及抽样表 ( 适用于生产过程稳定性的检查) GB 6 3 8 7 齿科材料名词术语 Z B C 3 3 0 1 8氧化锌 下香酚众门 汀 3 术语 3 . 】 固化时间 在规定的条件下，从调和开始至硬化所需的时间。 3 . 2 固化深度 在规定的外部能源作用下，材料硬化层的厚度。 3 . 3 比色板 制造厂提供的，用以检查固化后材料的颜色和色调。 3 . 4 化学固化 材料在引发剂和促进剂作用下而固化。 3 . 5 光固化 材料在光能作用下而固化。 3 . 6 恒定质量 2 4 h 内质量损失不超过 0 . 2

3、 mg 。 3 . 了 细胞毒性试验 在培养皿中进行细胞培养，使细胞生长成融合单层。将试验材料与细胞单层直接接触，观察对细 胞生长的影响，以便评价试验材料对细胞的毒性作用。 3 . 8 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验 ( A me s 试验) 又称鼠伤寒沙门氏菌/ 哺乳动物微粒体酶试验，一种检ik 9 化学物致突变性能的试验。美C加州大 学生化教授B NAme s 等人研究并建立起来的。所以又简称Ame s 试验。 3 . ， 致敏反应 是 一种对物质产生免疫学传递的反应。对人类来说，这种反应可能是骚痒、红斑 、 丘疹、小疤. 国家技术监督局1 9 8 9 一 1 0 一 2 0 批准1 9 9

4、 0一0 7 一01 实施 GB 1 1 7 4 9 -6 9 大疤或这些症状的综合反应，对动物种系来说，这种反应可能不同，仅能看到红斑和水肿。 4 分类 型化学固化 型光固化 5 技术要求 5 . 1 牙科复合树脂充填材料应符合本标准的要求，并按规定程序所批准的文件制造。 5 . 2 生物适应性 5 . 2 . 1 无牙髓刺激性。 5 . 2 . 2 无细胞毒性。 5 . 2 ， 3 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验无诱变性。 5 . 2 . 4 无致敏毒性。 5 . 3 物理机械性能 5 . 3 . 1 一般性能 按照比色板生产的材料，固化后应符合比色板的色调要求。 5 . 3 . 2 1 型

5、材料土作时间不小于9 0 s . 5 . 3 . 3 1型材料的固化时间不大于5 mi n o 5 . 3 . 4 11型材料对环境光线的敏感性 11型材料的3个试样在规定的试验光源下 照射 6 0 s ，任何一个试样不得出现初凝。 5 . 3 . 5 11型材料的固化深度不低于2 mm。 5 . 3 . 6 挠曲强度不低于5 0 M P a。 5 . 3 . 了 吸水值和溶解值 吸水值不大f 5 0 g g / m m ，溶解值不大于5 v g / mm, 。 5 . 4 色稳定性 三个观察者中不得有一人发觉在规定的条件一 F 照射后， 固化后材料的颜色和色调出现明显的变化。 6 试验方法

6、从同一批材料中抽取5 0 g 样品进行试验或必要的重复试脸。 按照制造厂使用说明书的规定和本标准规定的试验条件进行调和制备试样。I I 型材料应参照制造 厂使用说明书推荐的光源，以满足材料使用条件。 除制造 一 特别规定外，全部试样制备和试验应在环境温度2 3 士1 ，相对湿度大于 3 0 %环境中进 行。如果材料是贮存在冰箱中， 应在试验前取出放置在环境温度中以使材料的温度为2 3 1 1 0C o 6 . 1 目 坝 U 直观检验应符合5 . 3 . 1 条的规定。 6 . 2 生物适应性 检测方法见附录A( 补充件)。 6 . 3 工型材料丁作时间 6 . 3 . 1 器具 如图1 所示

7、，聚乙烯管 ( A )安装在中央有聚酞胺底座 ( B )上。内装热电偶 ( D)的不锈钢 ( 或 黄铜) 管 ( C )通过 ( B )的孔伸人到 ( ) 管内。其中管 ( A)长 8 . 0 士 0 . 2 mm，内 径4 . 0 士 0 . 2 m m, 壁厚1 . 0 士 0 . 2 mmo底座 ( B)对管 ( A)定位部分的直径为4 . 0 士 0 . 2 mm,高2 . 0 士 0 . 2 mm。组装后 可在管 ( A)内制备高6 mm，直径为4 mm的试样。 直径为0 . 2 0 1 0 . 0 5 mm,精度为0 . 1 的热电偶和精度适当的X一T记录仪。 GB 1 1 1 4

8、 9 一 助 图 1 工作时间、固化时间测定装置 A一聚乙烯管; B一聚酞胺 ( 或其他适立材米 们 底座， C一不锈钢 ( 或黄铜管;D-热电偶 6 . 3 . 2 试验步骤 按照制造厂说明书调和材料，并将模具移人2 3 1 1 的环境温度中。在调和开始3 0 s 后， 将调和的 材料装人模具的型腔内，并用记录仪记录材料的温度。环境温度维持在2 3 f 1 。继续记录材料的温 度，直至温度的峰佰过后。 说明:由图2 所示的温度一时间曲线可看出，调和后的材料在刚装入模具时， 温度稍有下降至T “ 并维持一段时间，然后温度开始上 升。温度开始上 升意味着固化反应开始，即工作时间的结束。 记录从调

9、和开始至温度开始上升的时间间隔为工作时间。 以上步骤重复五次。 GB 1 1 7 4 9 - 助 图 2 显示测定工作时间和固化时间的温度一时间曲线 6 . 3a试验结果 至少有四次工作时间不小于9 0 8 ，方可认为符合5 . 3 . 2 条的规定。 如果有三次或三次以上工作时间小于9 0 s ，则认为不符合5 . 3 . 2 条的规定。 如果只有三次工作时间不小于9 0 5 ,重复本试验。在第二次试验中，仍有一次或一次以上工作时间 小于9 0 s ，则认为不符合5 . 3 . 2 条的规定。 6 . 4 I型材料固化时间 6 . 4 . 1 器具 同6 . 3 . 1 0 6 . 4 .

10、2 试验步骤 在试验条件为3 7 1 1 下重复6 . 3 . 2 条中规定的试验步骤。 记录从调和开始至温度达到最大值的时 间间隔为固化时间。 6 . 4 . 3 试验结果 至少有四次固化时间不大于5 mi n ，方可认为符合5 . 3 . 3 条的规定。 如果有三次或三次以上固化时间大于5 mi n ，认为不符合 5 . 3 . 3 条的规定。 如果只有三次固化时间不大于5 mi n ，重复本试验。 在第二次试脸中， 仍有一 次或一次以上固化时 间大于5 mi n ，则认为不符合 5 . 3 . 3 条的规定。 6 . 5 1 1 型材料对环境光线的敏感性 6 . 5 . 1 器具 6 .

11、 5 . 1 . 1 氛灯或其他等效光源。推荐使用牙科椅或综合治疗台工作灯。 6 . 5 . 1 . 2 l mm厚的载玻片两块。 6 . 5 . 1 . 3 照度计。 二5 . 1 . 4 可调式试验台板。 6 . 5 . 2 试验步骤 在暗室内，将照度计放在光源下，调整试验台板使试验台板上的照度为1 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 x 。 将 3 0 mg 材料放在台板的载玻片上 ，照射6 0 士5 s ，用另一 块载玻片压挤材料形成薄层。 若材料七 有裂缝或孔隙 产生，则认为材料初凝。 上述试验再 重复两次，记录三次试验结果。 GB 1 1 7 4 9 - 的 6 . 5 . 3

12、 试验 结呆 三次试验均不出现初凝，则认为符合5 . 3 . 4 条的规定。 6 . 6 II型材料的固化深度 6 . 6 . 1 器具 6 . 6 . 1 . 1 模具 可制备长6 mm，直径4 mm试样的金属模具。 二 B . 二 6 . 6 . 已 6 . 6 . B . B . 6 . 6 . 1 . 2 1 . 3 万 . 4 1 . 5 1 . 6 2 厚l mm载玻片两块，其面积能覆盖模具的端口。 厚为 5 0 1 3 0 P a n 聚乙烯膜片。 光源，制造厂推荐。 百分表，精度不低于 。 . 1 mm。 塑料调棒 试验步骤 将模具放在下有载玻片的聚乙烯膜片上，按照制造厂说明书

13、将材料充满模具，排除气泡，并稍高 出模具，在模具顶端放置另一聚乙烯膜片，上面再盖上载玻片并压挤，去掉多余材料。移去模具顶端 的载玻片，光源窗口 对准试样，固化深度可达2 mm的照射 时间进行照射。 在照射后1 8 0 1 2 0 S 时，从模具中取出试样，用塑料调棒轻轻去掉未固化的材料，用百分表测量固 化部分试样的高度，再重复两次。 6 . 6 . 3 试验结果 记录三次固化深度的平均值，应符合5 . 3 . 5 条的规定。 B . 7 挠曲强度 6 . 7 . 1 器具 二7 . 1 . 1 模具如图3 所示，内涂少量脱膜剂，易于试样脱膜。 图 3 载玻片两块，其面积适于覆盖模具 模具夹。

14、3 7 1 1 的恒温水浴槽。 光源，制造厂推荐。 挠曲强度试样模具 6 . 7 . 1 . 2 二 了 . 1 . 3 6 . 7 . 1 . 4 S . 7 . 1 . 5 GB 1 1 7 4 9 - 肠 6 . 7 . 1 二游标卡尺，精度为0 . O l mm, 6 . 7 . 1 . 7 加荷装置 两个直径为2 mm的钢制圆柱中心距为 2 0 m m平行安装在下加荷台上，另一个同样的圆柱安装在 上加荷台上，并使其在下加荷台两圆柱中间且互相平行。以对试样构成三点加荷。 二7 . 2 试样制备 6 . 7 . 2 . 1 I型材料 按照制造厂使用说明书调和材料并立即装人下有载玻片的模具

15、内。将另一载玻片放在模具顶端， 并用夹子轻轻夹紧，使多余材料溢出。移人3 7 恒温水浴槽中，从调和开始计算时间，放置3 mi n o 在调和后1 5 M i n 时去掉夹子取出试样，贮存在3 7 . 士1 蒸馏水中。制备5个试样。 6 . 7 . 2 . Z n型材料 按照制造厂使用说明书如同6 . 7 . 2 . 1 方法将材料装人模具。光源窗口对准试样某段的中合 并抵着载 玻片。照射时间在达到制造厂推荐时间后，移动光源窗口对准试样另一段的中b ，且需使每次光照部 分与前次光照部分有所重叠。照射时间同上。这样依次进行，直到试样各部分均被照射了足够时间。 然后，对试样另一面进行同样的操作。将试

16、样连同模具一起放人3 7 1C恒温水浴槽内浸1 5 m i n ,然后从 模具中取出试样放在3 7 0C蒸馏水中。 二7 . 3 试验步骤 在调和结束后2 3 h 4 5 mi n 时测量试样的尺寸。然后把试样放在上述加荷装置上， 以 。 . 7 5 1 0 . 2 5 mm/ mi n 的速度进行加荷，直至试样断裂，记录下最大的加荷值。 6 . 7 . 4 试验结果 应用 ( 1 )式计算挠曲强度: 3 FL a= 。 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (1) 2 BH z 式中:0 挠曲强度， MP a ; F最大加荷值，N， L下加荷台两加荷点间

17、距离，mm B试样宽度，mm， H试样高度，mm。 如果4个或5个试样的抗压强度不低于5 0 M P a ，则认为符合5 . 3 . 6 条的规定。 如果3个或3个以上试样的抗压强度低于5 0 M P a ，则认为不符合5 . 3 . 6 条的规定。 如果只有3个试样的抗压强度不低于5 0 MP a ，则应重复上述试验。若在第二次试验中， 如果全部 试样的抗压强度不低于5 0 MP a ，则认为符合5 . 3 . 6 条的规定，否则不符合5 . 3 . 6 条的规定， 并不再重复试验。 6 . 8 吸水值和溶解值 6 . 8 . 1 器具 6 . 8 . 1 . 1 模具如图4 所示，可制备直

18、径为1 5 士l mm，厚0 . 5 士 O . l mm试样圆片。 GB 1 1 7 4 . 一 臼 直径为1 5 . 0 士 0 . 1 . .的不诱钢圆柱 定位组钉 内径为1 5 . 0 士 0 . 1 的不钧钢管 试样 图 4 吸水 ( 或溶解)试样模具 6 . 8 . 1 . 2 薄膜，能透过使材料聚合反应的光线，厚度为 5 0 士 3 0 1i m，如聚脂。 6 . 8 . 1 . 3 载玻片，厚度为2 mm。 6 . 8 . 1 . 4 内装有无水氯化钙或硅胶的保干器2个。 6 . 8 . 1 . 5 光源，制造厂推荐 ( 仅用于II类材料)。 6 . 8 . 1 . 6 分析天

19、平，精度为O . l mg o 6 . 6 . 1 . 7 百分表，精度为 O . 0 l m m。 6 . 8 . 1 二模具夹。 6 . 6 . 2 试样的制备 6 . 8 . 2 . 1工型材料 按照制造厂说明书调和材料，并装人模具。装人的材料略高出模具，然后在材料上 面放一聚脂薄 膜，再将载玻片盖在上面。用模具夹将载玻片和模具夹紧，去掉多余的材料。用此方法制备5个试样。 6 . 8 . 2 . 2 II型材料 按照制造厂说明书调和材料，并以6 . 8 . 2 . 1 的方法将材料装人模具。 光源窗口抵着载玻片，按照制 造厂 推荐的照射时间对试样进行照射，且 需使每 次光照 部分与前 次

20、光照部分局部重 叠，以 使试样的各 部分均按规定的时间被照射。用此方法制备5个试样。 6 . 8 .1 试验步骤 6 . 8 . 3 . 1 将试样从模具中取出放入3 7 士1 保千器中。2 4 h 后，再将试样移入2 3 士1 保干器中存放 1 h.然后，对试样称量精确到1 O . l mg 。重复上述操作直到质量恒定，记为m, 。 6 . 8 . 3 . 2 将试样浸人3 7 士1 的蒸馏水中，7 d 后用水冲洗，再用棉纸吸干试样表面的水，并在空气 中抖动1 5 S 。在试样从水中取出1 mi n 后称量，记录这一质量，记为mz u 6 . 8 . 3 . 3 按照6 . 8 . 3 .

21、1 叙述的方法，使试样质量恒定，记录这一恒定质量，记为m3 。 6 . 8 . 3 . 4 在试样的中心及边缘间隔9 0 “ 四处测定试样的直径和厚度，并计算其体积，单位为mm, 0 6 . 试验结果 6 . 8 . 4 . 1 吸水值 应用 ( 2 )式计算每个试样的吸水值w= , : GB 1 1 7 聪 一肠 W, p 用2一 舰 一.-叫 ，目. . . . . . -. V (2) 式中:W 吸水值，119/-m3; ，: 浸水7 d后的质量，11 9 ; ，3 浸水7 d 后的恒定质量，11 9 ; V试样的体积， mm, 。 如果4个或5个试样的吸水值不大于5 0 11 9 /

22、m m 3 ，则认为符合5 . 3 . 7 条的规定。 如果只有2个试样的吸水值不大于5099/mm,，则认为不符合5 . 3 . 7 条的规定。 如果只有3个试样的吸水值不大于5 0 9 9 / m m 3 ，则应重复上述试验。在第二次试验中， 如果全部 试样吸水值不大于5 0 11 9 / mm ，则认为符合5 . 3 . 7 条的规定 ， 否则不符合5 . 3 . 7 条的规定， 并不再重复 试验。 6 . 8 . 4 . 2 溶解值 应用 3 )式计算每个试样的溶解值W, i : 阴 1一 用 3 式中: W , i -溶解值， 11 9 / m m 3 ; ， ， 浸水前的恒定质量，

23、 W , 1 =. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (3) 犷 林 g ; 从3浸水7 d 后的恒定质最，林 9 ， V试样的体积， mm, 。 如果4个或5个试样的溶解值不大于5 119/mm，则认为符合5 . 3 . 7 条的要求。 如果只有2 个试样的溶解值不大于5 9 9 / mm ，则不认为符合5 . 3 . 7 条的要求。 如果只有3个试样的溶解值不大于5 119/mm，则应重复上述试验。在第二次试验中，如果全部 试样溶解值不大于5 N g / mm3

24、 ，则认为符合5 . 3 . 7 条的要求，否则不符合5 . 3 . 7 条的要求， 并不再重复 试验。 6 二色稳定性 6 二 。 1 6 . 9 . 1 . 1 6 . 9 . 1 . 2 6 . 9 . 1 . 3 6 . 9 . 2 6. 9 . 3 器具 3 7 士1 的恒温箱。 色温为5 0 0 0 一7 0 0 0 K的氮灯及3 7士5 的恒温系统。 厚度为 0 . 0 5 一 ，0 . 2 0 m m聚四氟乙烯薄膜。 以聚四氟乙烯薄膜替代聚 脂薄膜分别按 6 . 8 . 2 . 1 条和 6 . 8 . 2 . 2 条制备I 型和11型试样各两个。 试验步骤 将其中的一个试样在

25、3 7 士1 的黑暗环境中贮存7 d 。 另一个试样的一半用铝箔或锡箔覆盖， 移人 3 7 士5 的恒温箱内，调整光源使试样所在处的照度为1 5 0 0 0 0 士巧0 0 0 1 x，照射2 4 h 。 然后去掉铝箔 或锡箔，将试样放人 3 7 1 1 恒温暗室中贮存6 d 。将两个试样同制造厂提供的比色板进行比较。 了 检验规则 7 . 1 牙科复合充填材料应由制造厂技术检验部门进行检查，合格后方可提交验收。 7 . 2 牙科复合树脂充填材料必须成批提交检查。 检查分为逐批检查 ( 出厂检查)和周期检查 ( 型式试 验或例行试验) 1 . 3 逐批检查 7 . 3 . 1 逐批检查按GB

26、2 8 2 8 的规定进行。 7 . 3 . 2 抽样方案类型采用一次抽样。 抽样方案严格性从正常检查抽样方案开始，其缺陷分类、检查项 目、检杳水平和AQL ( 合格质量水平)按表1 的规定。 GB 1 1 7 妇 一 肠 表 l 缺陷分类 严重缺陷D 轻缺陷c 检查分类组 I II 检查项目 5 . 3 . 4 条 5 . 3 . 2 、5 . 3 . 3 条 5 . 3 . 1 条 检查水平 5 一 1 5 一 l 5一 4 AOL 1 S 2 。 5 4 . 0 73 . a 转移规则 T . 3 . 8 . 1 牙科复合树脂充填材料在进行正常检查时， 若在不多于连续五批中有二批经初次检

27、查 ( 不包 括再次提交检查批)不合格，则从下一批检查转移到加严检查。在修正缺陷时，若影响其他试验组， 再检查哪些项目，由质量部门和接收方决定。 7 . 3 . 3 . 2 从加严检查到正常检查、从正常检查到放宽检查、 从放宽检查到正常检查、从加严检查到哲 停检查应符合GB 2 8 2 8 的规定。 了4 周期检查 T . 4 . 1 在下列情况下亦应进行周期检查: a . 新产品投产前 ( 包括老产品和转产产品)， b . 连续生产中每年不少于一次， c间隔一年以上再投产时， d . 在设计、工艺或成分有重大改变时。 7 . 4 . 2 周期检查按G B 2 8 2 9 的规定进行。 T .

28、 4 . 3 周期检查前应先进行逐批检查，从逐批检查合格的批中抽取样本进行周期检查。 7 . 4 . 4 周期检查采取一次抽样、判定水平为8 1 ，其检查项目、 判定数组和RQL ( 不合格质量水平) 按表2的规定。 表 2 检查项目 。 。 周 ， 1 判定。组 RQL 535 条 一月一次 ，、 、一 入 尸 妞 一 539 条 三月一次 5 . 3 . 6、5 . 4 条 六月一次 5 。 2 条新产品投产前 ( 包括老 产品和转产产品)。 设计、 工艺或成分有重大改变时界 连续生产三年 8. 1 标志、包装、运输、贮存 牙科复合树脂充填材料必须包装在具有防光辐射、 互不污染且不影响材料

29、性能的容器中，包装容 器还应具有在正常搬运或贮存期间不损坏不破裂的性能。 8 . 2 小包装_ L 应有下列标志: a . 制造厂名称和商标， GB 1 1 7 扭 一 曲 b . 产品名称; c . 净重; d . 批号， e . 有效日期， 二3 外包装上应有 下列标志: 二制造厂名称、商标和地址; 卜 . 产品名称; c . 重量和数量， d . 毛重 ， e . 体积; f . 出厂日期， 4 . “ 小心轻放”、 “ 防潮”、 “ 防高温”、防强光辐射”等字样或标志。标志应符合G B 1 9 1 中的有关规定。 箱上字样和标志，应保证不因历时较久而模糊不清。 8 . 4 每2 0 个

30、最小包装件应附有比色板。 二5 每一包装应附有检验合格证，检验合格证上应有下列标志: 制造厂名称， b . 检验员代号; c . 色标。 8 . 6 每一包装必须附有使用说明书。使用说明书上至少应有下列内容: a 。 树脂基质中主要有机成分， b . 无机填料中粒度范围及其在复合树脂中所占体积的百分比; c . 临床使用简要说明， d . 工型材料的调和比例和调和方法; e . II型材料的光源及在推荐的照射时间下的固化深度; f . 1型材料的工作时间和固化时间; B . 推荐采用的垫底材料和洞衬材料及不宜采用的垫底材料和洞衬材料， 七 . 推荐的抛光器械; i . 贮存条件 ( 如:需在冰

31、箱内贮存)以及在贮存条件下材料的有效期。 GB 1 1 7 4 8 -臼 性 A应 录适 附物 生 ( 补充件) A1 牙.试验 A二1 目的 本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的牙髓反应。 A1 . 2 试验牙齿 临床上完整或无峨洞和无大面积磨损的非人体牙齿。 A1 . 忿 材料 A 1 . 3 二 试验材料 被测牙科复合树脂充填材料。 A 1 . 8 . 2 阴 性对照材料 符合Z B C 3 3 0 1 8 的氧化锌丁香酚水门汀。 A 1 . 8 . 8 阳性对照材料 牙科硅酸盐水门汀。 A 1 . 4 试验步骤 对试验动物进行全麻。备洞前去除牙齿表面所有的牙石和软垢，在水喷雾下用锋利的

32、钻针在牙齿 的颊面制备完整的V 类洞。洞型两边尽量接近牙齿近远中面，洞底到牙髓的距离不大于l mm，并用 无菌棉卷和气枪干燥窝洞各壁。试验牙齿和对照牙齿的解剖学位皿应尽量相似。 A 1 . 4 . 1 试验材料的充填 按照制造厂使用说明书将牙科复合树脂充填材料填入备好的洞内。 A 1 . 4 . 2 阴 性材料的充填 将调和后的氧化锌丁香酚水门汀直接填人已备好的洞内，用银汞合金修复窝洞表面。 如果该材料在该试验室已有阴性对照结果，则不需每次重复阴性试验。 A 1 . 4 . 8 阳性材料的充填 将调和后的牙科硅酸盐水门汀直接填人已备好的洞内。 如果该材料在该实验室已有阳性对照结果，则不需每一次

33、重复阳性试验。 A 1 . 4 . 4 试验周期 A 1 . 4 . 4 . 1 短期 周期为7 d 。 将2 0 颗牙分为以下三组: 试验材料组:1 0 颗。 阴性对照组:5颗。 阳性对照组:5颗。 A 1 . 4 . 4 . 2 中期 周期为3 0 d 。 将2 0 颗牙分为以下三组: 试验材料组: 1 0 颗。 阴性对照组:5颗。 阳性对照组:5 颗。 A 1 . 4 . 4 . 3 长期 GB 11 7 4 9 - 翻 周期为8 0 d , 将2 0 颗牙分为以下三组: 试验材料组: 1 0 颗 阴性对照组:5颗。 阳性对照组:5颗。 注:同试验周期在同一个动物身上进行。 A1 . 5

34、 临床观察 动物处死之前进行临床体征的观察。 A 1 . 6 组织预备 A 1 . 9 . 1 固定 处死动物后，用骨锯切下包括颊舌侧牙槽骨在内的牙齿，并避免损伤牙根，然后在1 0 %福尔马林 中浸泡4 8 h 。 在生理盐水冷却下用金钢砂片切除充填体边缘的牙齿近远中部分，从而保证固定剂和组织 学试剂的充分渗透，切割面是未来石蜡切片的指示面。切除后立即放人1 0 %福尔马林中。 Al . 9 . 2 脱钙 采用二次脱钙法。 A 1 . B . a 冲洗脱水 流动水冲洗试样2 4 h ，梯度酒精脱水。 A 1 . 6 . 4 包埋、切片 石蜡包埋，连续切片。要求切穿整个牙髓，片子厚度为5 1 i

35、 m，一张载玻片放35张切片。 颗牙齿切三十张。 A 1 . 6 . 5 染色、观察 用苏木精一伊红染色。光学显微镜观察。 A， . 了 结果评定 A 1 . 7 . 1 牙髓反应等级的划分 ( 见表A1) 以长期试验组结果作为材料对牙髓刺激的最终评价结果。 表 A1 等级 评价 0 1 2 与阴性对照组牙髓反应相同 有反应，但反应程度低于2 级 与阳性对照组牙髓反应相同 A 1 . 了 . 2 牙髓反应的评定 在试验动物中，有一只或一只以上牙髓反应为2 级，则认为该材料对牙髓有刺激性。不符合5 . 2 . 1 条的规定。 在试验动物中，有二只或二只以上牙髓反应等级为1 级，则认为该材料对牙髓

36、具有刺激性。不符 合5 . 2 . 1 条的规定。 除上述情况外，均认为该材料对牙髓无刺激性。符合5 . 2 . 1 条的规定。 A2 细胞毒性试验 ( 分子过滤法) A 2 . 1 目的 本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的细胞毒性。 AZ . 2 试验材料 GB 1 1 7 4 9 -翻 A 2 . 2 . 1 培养液 ( 基) A2 . 2 . 1 . 1 生长培养液 E a g l e s ME M培养液内含1 0 %小牛血清，1 x l O s i u / L 青霉素、1 0 0 m g / L 链霉素、 1 0 m mo l / L 碳酸氢钠和l 0 mmo l / L H E P

37、 E S缓冲成分。 注:H E P E S为N一2 一径基乙醋呱嗓乙烷硫酸。 AZ . 之 . 1 . 2 琼月 旨 培养基 E a g l e s ME M x 2 ( 表示所有成分为正常浓度的2 倍)，内含1 0 %小牛血清，1 x 1 0 i u / L青 霉素、1 0 0 m g / L 链霉素、1 . 5 %琼脂和l 0 mmo l / L 碳酸氢钠成分。 AZ . 之 . 2 细胞株 小鼠成纤维细胞 ( L一9 2 9 )，使用时为传代4 8 一7 2 h 的生长旺盛的细胞。 A 2 . 2 . 3 仪器 A 2 . 2 . 3 . 1 3 7 含5 %二氧化碳的恒温培养箱。 A

38、2 . 2 . 3 . 2 超净工作台。 A 2 . 2 . 3 . 3 水浴箱 ( 1 0 0 ,C) A 2 . 2 . 3 . 4 直径5 7 m m，孔径0 . 4 5 i t m的分子滤膜。 A2 . 2 . 3 . 5 直径6 0 m m的组织培养皿。 AZ . 2 . 4 试剂 A 2 . 2 . 4 . 1 蒸馏水。 AZ . 2 2 珑拍酸脱氢酶活性检测剂: 珑拍酸钠0 . O 6 m o l / L 4 . O mL 磷酸缓冲液0 . 2 m o l / L 4 . O mL 林格氏液2 . O m L Ni t r o B T 0 . 2 % l O mL A2 . 2

39、. 4 . 3 磷酸缓冲液 ( P H= 7 . 2 1 2): 磷酸二氢钠0 . 2 mo l / L 2 8 m L 磷酸氢二钠0 . 2 mo l / L 7 2 mL AZ . 盆 试验方法 用生长培养液配制3 x 1 0 / mL的细胞悬液，将滤膜置于组织培养皿中，移注6 mL细胞悬液， 在3 7 0C、含5%二氧化碳培养箱中培养2 4 h , 2 4 h 后，预热琼脂培养基，待溶解后，降温至4 0 左右，移注5 mL于空培养皿内。 室温下凝固 后，取经2 4 h培养的带有单层细胞的滤膜，覆盖在琼脂培养基表面，细胞面向下，将经消毒的直径为 7 . 0 士 0 . l mm，高 2 .

40、 0 士 0 . 5 m m固化后的牙科复合树脂充填材料试样放在滤膜上，每张滤膜可放3 5片试样，共需1 0 片。 阴性对照应采用含单层细胞但无试验材料的滤膜和不含细胞但接触试验材料的滤膜。 阳性对照用2 0 %苯酚溶液浸湿的直径为7 mm的滤膜或涂有邻苯二甲酸脂的涤纶薄膜。 将放有试验材料的阴性对照膜和阳性对照膜的培养皿放人3 7 “C、含5 %二氧化碳培养箱中培养2 h o 2 h后，去除试验材料，轻轻地将滤膜与琼脂分开，用珑拍酸脱氢酶活性检测剂接触滤膜，继续 在3 7 培养箱中作用3 h，然后用蒸馏水漂洗滤膜，空气干燥。 A 2 . 4 结果评定 肉眼检查滤膜， 含有单层细胞的阴性对照显

41、示浅蓝色的均一染色， 无细胞的阴 性对照滤膜显示无任 何压迹等异常现象。接触试验材料的滤膜按细胞毒性试验评定方法进行评定 ( 见表A2)。 GB 1 1 7 4 9 一朋 表 A2 级别现象 评价 0 1 2 3 与单层细胞的其他部位比较，染色密度无差异 染色密度减少或未染色区域宽度小于7 mm 未染色区域宽度为7一l l mm 未染色区域宽度等于或大于1 2 m m 无细胞 毒性 轻度细胞毒性 中度细胞毒性 明显细胞毒性 AZ . 5 细胞毒性评定 受试样品级别在。 一1 级范围内，则认为该材料是安全的。符合5 . 2 . 2 条的规定。 A3 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验 ( A m e

42、s 试验) A 3 . 1 目的 本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的诱变性。 A3 . 2 试验材料 A3 . 2 二菌株 组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏杆菌共四株一T A 9 7 , T A 9 8 , T A 1 0 0 , T A 1 0 2 . 菌株贮存在加有二甲 基亚矾的 ( 光谱纯)新鲜细菌培养液中，其体积比为 0 . 0 9 : 1 ，混合后分装 于小试管或菌种管内，经干冰丙酮液 ( 一 7 5 C)或液氮 ( 一 1 9 6 C)速冻，在一 8 0 冰箱或一 1 9 6 C 液 氮中长期贮存。 A 3 . 2 . 2 培养基制备 A 3 . 2 . 3 受试样品的制备 将试验材

43、料按制造厂提供的说明书制备成厚度大t 0 . 5 m m而小于1 . O mm的薄片为试样。以生理 盐水、二甲基亚矾、二甲 基甲酞胺、丙酮、乙醇、四 氢吠喃、醋酸乙醋等作为溶媒。 按照试样上下面 的 总 面 积 3 0 0 m m 制 取l m L浸 出 液 的 比 例 ， 共 制 取 浸 出 液 2 0 m L。 A3 . 2 . 4 代谢活化剂制备 A 3 . 2 . 4 . 1 大鼠肝脏诱导 选体重2 0 0 g 左右的雄性S 一 D大鼠。玉米油稀释多抓联苯 ( P C B ) 2 0 0 m g / mL， 腹腔一次注射 5 0 0 m g / k g ，第6 d 用颈动脉排空血液法处

44、死，处死前1 2 h 禁食不禁水。 A3 . 2 . 4 . 2 切除肝脏 处死的大鼠 经过 无菌 处理，打开腹腔，用 2 0 mL , 0 . 1 5 mo l / L 抓化钾溶液 ( 4 C)进行肝门静 脉灌 注后，小心分离并将肝脏完整取出，整个过程应在无菌室中进行。 A3 . 2 . 4 . 3 S ， 制备 肝脏称重后， 在 0 . 1 5 m 0 1 / L *化钾溶液中洗涤数遍， 加相当于肝重三倍1) 5 0 . 1 5 mo l / L 抓化钾溶液用 剪刀剪碎，放人组织匀浆机中，以 4 O O O r / m i n 匀浆2 mi n ，将匀浆液放人高速冷冻离心机，以 9 O O

45、 O g 离心 , 1 0 m i n ，其上层液即 S9 0离体以后的肝脏始终保持4 以下无菌 操作。 A3 . 2 . 4 . 4 S， 贮存 吸取2 mL上层液分装于小试管或安瓶中，在密封的条件下，用干冰丙酮液速冻后，贮存于一 8 0 IC 冰箱或液氮容器中。 A3 . 2 . 4 . 5 S， 鉴定 a . 无菌试验; b . 蛋白含量测定 ( L o wry法); c . 细胞色素P一4 5 0 测定. GB 1 1 T 4 9 一臼 d . 阳性对照剂 ( 4 - S , )的生物学测定。 8 . 2 . 4 . 6 S 9 剂量 首先使用浓度为 2 0 P L / 皿( 在S 9

46、 混合液中实际含郁 . 0 4 m Um L 的 S 9 )。如果是阴 性结果，还应使 用浓度为 5 0 N L / 皿( 在 S 9 混合液中实际含有。 . 1 mL / m L 的 S 9 )重新试验。 A S . 2 . 4 . 7 S 9 混合液 a . 标准浓度:8 mmo l / L氯化镁、 3 3 mmo l / L氯化钾、 5 m mo l / L 6 一 磷酸葡萄糖, 4 m mo l / L 辅酶II , l o o m mo l / L 磷酸钠缓 冲液 ( o ff = 7 . 4 ) 和 S 9 0 . 0 4 mL / mL混合 液。 b . 高浓度:除S ， 增加至

47、o . 1 mL / m L混合液外，其余成分同标准浓度。 A8 . 3 试验方法 A 3 . 3 . 1 菌株培养 从冷冻贮存菌株管中刮取细菌置营养肉汤培养基中，经3 7 振荡培养1 0 一 1 2 h，细菌活菌数可达 1 0 ， 个 / mL。细菌培养液从3 7 取出后，应立即放人冰浴中备用。试验需用当天解育好的新鲜细菌培 养液。 A 3 . 3 . 2 “菌株鉴定 A 3 . 3 . 2 . 1 组氨酸需要 ( h i s 一) 在底层培养基平皿表面加人 0 . 5 m m o f / L L 一 组氨酸 0 . 1 m L 和 。 . 5 m mo l / L D一 生物素 O . 1

48、 mL , 用L棒铺开。对照平皿只加生物素不加组氨酸，用白金耳浸细胞培养液，在对照平皿和含有组氨酸/ 生物素的平皿表面分别平行划线。四株细菌可划在同一个乎皿上，经3 7 V解育过夜后，检查生长情况， 对照平皿上不应长菌。 A 3 . 3 . 2 . 2 结晶紫敏感 W a ) 分别将每种细菌培养液。 . 1 mL加到4 5 C 2 ml , 顶层培养基试管内， 混均后倾倒于营养琼脂培养基 平皿表面，使其均匀分布。待固化后，取直径为6 mm无菌簿纸圆片浸1 mg / mL结晶紫溶液1 0 p L 放 到平皿中央，经 3 7 “C 孵育 1 2 h 后，围绕圆纸片出现抑菌圈 ( 直径大约1 4 m

49、 m ) ，表示对结晶紫敏感。 A 3 . 3 . 2 . 3 紫外线敏感 ( u v r B) 用白金耳浸细菌培养液，在营养琼脂培养基平皿表面乎行划线，四株细菌可划在同一平皿上。用 一张纸板盖上划线菌株的一半，在距离 3 3 c m处用1 5 W紫外线杀菌灯照射平皿8 s ， 经 3 7 0C 解育过夜后， 对紫外线敏感菌株只在未照射过的 一 半平皿上生长。 A 3 . 3 . 2 . 4 抗氨苇青霉素 ( P KM 1 0 1 ) 用白金耳浸细胞培养液， 在含氨羊青霉素平皿表面平行划线， 四株细菌可划在同一乎皿上。无抗性 因子的菌株也应选用一个，用来测定氨苇青霉素的效应。经3 7 C解育过夜后，无抗性因子的不应长菌。 A 3 . 3 . 2 . 5 抗四环素 ( P A QI ) 用白 金耳浸细胞培养液，在含氨苯青霉素/ 四环素平皿表面平 行划线，四株细菌可划在同一平皿 上。经3 7 0