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1、I CS 0 7 . 1 0 0 . 3 0 C 5 3 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 4 7 8 9 . 2 -2 0 0 3 代替 G B ; T 4 7 8 9 . 2 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n o f f o o d h y g i e n e - De t e c t i o n o f a e r o b i c b a c t e r i a l c o u n t 2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 发布2 0 0 4
2、 - 0 1 - 0 1实施 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布 中中 G B / T 4 7 8 9 . 2 -2 0 0 3 前 曰 西 本标准对 G B / T 4 7 8 9 . 2 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验菌落总数测定 进行修订。 本标准与 G B / T 4 7 8 9 . 2 -1 9 9 4 相比主要修改如下： 按照 G B / T 1 . 1 -2 0 0 。 对标准文本格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 将菌落总数的表示单位修改为： c f u / g ( m L ) , 本标准自
3、 实施之日 起， G B / T 4 7 8 9 . 2 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位 ： 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 。 本标准主要起草人： 刘宏道、 计融、 付萍、 杨宝兰、 姚景会。 本标准于 1 9 8 4 年首 次发布， 1 9 9 4 年第一次修订， 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 2 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 范 围 本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。 本标准适用于各类食品中菌落总数的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的
4、条款。凡是注 日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于 本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的 最新版本。 凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 术语 和定 义 下列术语和定义适用于本标准。 3 . 1 菌落总数a e r o b i c b a c t e r i a l c o u n t 食品检样经过处理， 在一定条件下培养后（ 如培基成分、 培养温度和时间、 p H, 需氧性质等） ， 所得
5、 1 m L C g ） 检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果， 只包括一群在营养琼脂上生长 发育的嗜中温性需氧的菌落总数 。 菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志 ， 也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动 态， 以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 设 备和材 料 4 . 1 冰箱： 0 0 C -4 0 C, 4 . 2 恒温培养箱： 3 6 士1 0 C。 4 . 3 恒温水浴锅： 4 6 士1 . 0 C , 4 . 4 均质器或灭菌乳钵。 4 . 5 架盘药物天平： 0 g -5 0 0 g ， 精确至。 5 g , 4 . 6 菌落计数器。 4 . 7
6、 放大镜 4 X。 4 . 8 灭菌吸管： 1 ml （ 具 0 . 0 1 mL刻度） , 1 0 mL （ 具 0 . 1 m L刻度） 。 4 . 9 灭菌锥形瓶： 5 0 0 mL , 4 . 1 0 灭菌玻璃珠： 直径约 5 m m, 4 . 1 1 灭菌培养皿 ： 直径 9 0 mm, 4 . 1 2 灭菌试管 ： 1 6 m mX1 6 0 m m, 4 . 1 3 灭菌刀、 剪子、 镊子等。 培养基和试剂 5 . 1 营养琼脂培养基： 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中 4 . 7 规定。 G B / T 4 7 8 9 . 2 -2 0 0 3
7、 5 . 2 磷酸盐缓冲液： 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 2 2 规定。 5 . 3 0 . 8 5 灭菌生理盐水。 5 . 4 7 5 乙醇。 检验程序 菌落总数的检验程序见图 检样 做成几个适当倍数的稀释液 选择2个 3 个适宜稀释度 各取 1 ML 分别加入灭菌培养皿内 每皿内加入适量营养凉脂 3 6 1 C士 t 一 4 8 h 士 2 菌落计数 报告 图 1 操作步骤 7 . 1 检样稀释及培养 7 . 1 . 1 以无菌操作将检样 2 5 g ( m L ) 剪碎放于含有2 2 5 m L灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内 （ 瓶内
8、预置适当数量的 玻璃珠） 或灭菌乳钵内， 经充分振摇或研磨做成 1， 1 0 的均匀稀释液。 固 体检样在加人稀释液后， 最好置均质器中以8 0 0 0 r 八 n i n -1 0 0 0 0 r / m i n 的速度处理 1 m i n ， 做成 1 ： 1 0 的均匀稀释液。 7 . 1 . 2 用 l m 工 灭菌吸管吸取 1 ： 1 0 稀释液 1 m 工 ， 沿管壁徐徐注人含有 9 m l - 灭菌生理盐水或其他稀 释液的试管内（ 注意吸管尖端不要触及管内稀释液） ， 振摇试管， 混合均匀， 做成 j ， 1 0 0 的稀释液。 7 . 1 . 3 另取 1 m L 灭菌吸管，
9、按上条操作方法， 做 1 0 倍递增稀释， 如此每递增稀释一次， 即换用 1 支 1 m l . 灭菌吸管。 7 . 1 . 4 根据食 品卫生标准要求或对标本污染情况 的估计 ， 选择 2 个 一3个适宜稀释度 ， 分别在做 1 0 倍 递增稀释 的同时， 即以吸取该稀 释度 的吸管移 1 ml 、 稀 释液于灭菌 培养皿内， 每个稀释度 做两个培 养皿 。 7 . 1 . 5 稀释液移人培养皿后， 应及时将凉至 4 6 C 营养琼脂培养基（ 可放置十4 6 士1 水浴保温） 注人 培养皿约 1 5 m 工 J ， 并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾人加有 1 m L稀释液灭菌培
10、养 皿内作空白对 照。 C n T连7 只0口 夕n n 7 . 1 . 6 待琼脂凝固后， 翻转平板， 置 3 6 土1 0C 温箱内培养4 8 h 士2 h o 7 . 2 菌落计数方法 做平板菌落计数时， 可用肉眼观查， 必要时用放大镜检查， 以防遗漏。在记下各平板的菌落数后， 习 出同稀释度的各平板平均菌落总数。 7 . 3 菌落计数的报告 7 . 3 . 1 平板菌落数的 选择 选取菌落数在3 0 - 3 0 0 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板， 应采用两 个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时， 则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平板作j 该稀释
11、度的菌落数， 若片状菌落不到平板的一半， 而其余一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平v 后乘 2 以 代表全皿菌落数。平板内如有链状菌落生长时（ 菌落之间无明显界线） ， 若仅有一条链， 可视y 一个菌落； 如果有不同来源的几条链， 则应将每条链作为一个菌落计。 7 . 3 . 2 稀释度的选择 7 . 3 . 2 . 1 应选择平均菌落数在3 0 -3 0 0 之间的稀释度， 乘以稀释倍数报告之（ 见表 1 中例 1 ) 0 7 . 3 . 2 . 2 若有两个稀释度， 其生长的菌落数均在 3 0 -3 0 0 之间， 则视两者之比如何来决定。若其比 崔 小于或等于 2 ， 应报告其平均
12、数； 若大于 2 则报告其中较小的数字（ 见表 1 中 例 2 及例3 ) 0 7 . 3 . 2 . 3 若所有稀释度的平均菌落数均大于3 0 0 ， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报健 之（ 见表 1中例 4 ) , 7 . 3 . 2 . 4 若所有稀释度的平均菌落数均小于 3 0 ， 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报节 之（ 见表 1中例 5 ) 0 7 . 3 . 2 . 5 若所有稀释度均无菌落生长， 则以 小于 1 乘以 最低稀释倍数报告之（ 见表 1 中例 6 ) , 7 . 3 . 2 . 6 若所有稀释度的平均菌落数均不在3 0 -3 0 0 之间， 其
13、中一部分大于 3 0 0 或小于3 0 时， 则以 最 接近 3 0 或 3 0 0的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（ 见表 1中例 7 ) 0 7 . 3 . 3 菌落数的报告 菌落数在 1 0 0 以内时， 按其实有数报告， 大于 1 0 0 时， 采用两位有效数字， 在两位有效数字后面的数 值， 以四舍五人方法计算。为了缩短数字后面的零数， 也可用 1 0 的指数来表示（ 见表 1 ) 0 宪1赚 释 膺 于 先杯 3薄 ft 拐 尝 女 才 稀 释 液 及 苗 薄 孰 例6 1 0一 ！ 多不可计 多不可计 多不可计 多不可计 夕7 两 稀访 少 件 菌落总数 。 f ， 。 （ m 丁
14、 、 绍些J 才 / G f, / ( - r、 1649Q;一 斗 2(1f 1 叹1 八 r Q 9 7 7r 271T, PI1n件60313S 9 下1八 户 7 1 q八 几 r !, 、 了1厂 多 不 可 计 q n：八 r 1 6 0 0 0 或 1 . 6 X1 0 3 3 0 0 0 或 3 . 8 X1 0 2 7 0 0 0 或 2 . 7 X1 0 3 1 0 0 0 0或 3 . 1 X1 0 2 7 0 或 2 . 7 X1 0 1 0 q1 nn()， 击 Z i v l o 4 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇
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