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1、中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 剂贝 通 试定 观 学酸 普 化。 核 C h e mi c a l r e a g e n t Ge n e r a l r u l e s f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f n u c l e o t i d e s 1 主题内容与适用范围 本标准规定了化学试剂核昔酸含量、 熔点、 比旋光度、 层析试验和干燥失重测定的通用方法。 本标准适用于化学试剂核昔酸及其衍生物的分析。 本标准不适用于药用核昔酸及其衍生物的分析。 2 弓 用标准 G B / T 6
2、0 1 化学试剂滴定分析( 容量分析) 用标准溶液的制备 G B / T 6 0 2 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 G B / T 6 0 3 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 G B / “I 6 1 3 化学试剂比 旋光度测定通用方法 G B / T 6 1 7 化学试剂熔点范围测定通用方法 G B / T 6 ” 化学试剂 采样及验收规则 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B / T 9 0 0 8 液相色谱法术语 柱液相色谱法和平面色谱法 G B / T 9 7 2 1 化学试剂分子吸收分光光度法通则( 紫外和可见部分) 3 一般规定 3 .
3、 1 本标准中所用的水、 在没有注明其他要求时， 应符合G B / T 6 6 8 2 中三级水的规格。 3 . 2 本标准中所用试剂的纯度应为分析纯。 3 . 3 本标准中凡层析测定时， 核普酸R ， 值均应以在完全相同条件下的对照样品的R ， 值为判断标准， 且每次测定都不得省去作为判断标准的对照样品。 3 . 4 本标准中凡层析测定需作杂质限量检测时， 应使用符合6 . 1 . 2 . 1 条之规定的对照样品。 熔点测定 按G B / T 6 1 7 规定测定。 核昔酸的熔点数值可参考附录A( 参考件) 。 比旋光度的测定 按G B / T 6 1 3 之规定测定。 核昔酸的比旋光度数值
4、可参考附录 A( 参考件) 。 国家技术监督局1 9 9 4 一 1 2 一 2 2 批准1 9 9 5 一 1 0 一 0 1 实施 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 6 层析试验 层析试验用于检测核昔酸的纯度及定性鉴别。所有核昔酸均应以下列方法中选择一种方法进行测 定。 6 . ， 纸层析 6 . 1 . 1 方法原理 纸层析法是以a纸为惰性支持物的一种层析法。 分离原理属分配层析的范畴， 它利用不同溶质在静 止的水相， 亦即纸上所吸附的水为固定相和沿纸流动的有机相( 即流动相) 两相溶剂的不断分配而达分 离的目 的。核昔酸经层析后， 常用比移值( 凡) 来表示各组分在层析谱
5、中的位置。( 凡) 值按式( 1 ) 计算: ，. .” . ” . “ ， ” 。 。 ”. . (1) 式中: R , 比移值; d . - 溶质迁移距离, c m; d m 流动相迁移距离， c m . 在一定的条件下， 同一核普酸的R 。 值是一定的。 但由 于影响R ， 值的因素较多， 一般都采用与对照 样品对比， 即根据样品与对照样品在层析谱中R ， 值来进行鉴别， 并可在2 5 4 n m的紫外灯下观察， 以显 示出杂质斑点的多少和色量来确定样品的纯度。 也可剪下斑点， 溶于特定溶剂， 用紫外分光光度计测定 吸光度， 并计算样品的含量和杂质的含量。 6 . 1 . 2 试剂及材料
6、 6 . 1 . 2 . 1 对照样品 纸层析和薄层层析所用的对照样品， 主体含量不少于9 8 . 0 %. 6 . 1 - 2 . 2 层析用纸 层析用纸是指具有一定强度、 质地均匀平整的纯棉浆制成的撼纸。 纸的裁切方向 应使流动相能 顺着 纹理方向移动。 .定性用的层析诊纸灰分须小于0 . 1 %， 一般可选用新华一号层析滤纸。 6 . ， . 2 . 3 展开剂 展开剂可参照附 录B ( 参考件) 之规定， 使用前制备. 必要时可选用其他展开剂。 6 . 1 . 2 . 4 展开室 可选用大小适宜的标本缸。 6 . ， . 3 操作步骤 取新华一号层析滤纸， 长3 0 c m ， 离底边
7、2 c m处用铅笔划一条直线， 在直线两端2 c m处开始点样， 点与点之间距离为2 c m， 点样扩散的直径不超过0 . 5 c m. 同一张层析纸上可点数个样品， 纸的宽度取决 于样品的数目， 井留 有点对照样品的位置。 称取。 . 0 0 5 g 核昔酸样品， 精确至0 . 0 0 0 1 g , 溶于0 . 5 m L 水或盐酸溶液C c ( H C l ) =0 . 0 1 m o l / L ) , 必要时稍微加热溶解。 用微量进样器或徽量吸管点样， 每次点样后须用冷风吹干， 点样量按检测要求不 少于5 u L ， 即相当于5 0 f a g 样品。 核昔酸纸层析一般采用上行。 将
8、已吹干后的层析纸两边卷成图筒状， 用二根塑料丝上下固定。 在一 高为3 6 c m的标本缸内平放一培养皿， 内盛高度为。 . 5 c m的展开剂， 将层析纸置于缸内以展开剂的饱 和蒸气平衡2 - 4 h 后， 将样品端朝下放入培养皿中， 盖紧玻璃盖。 展开1 2 1 6 h , 流动相前沿即可上升 2 6 2 8 c m, 此时将层析纸取出晾干或在5 0 干燥。 6 . 1 . 4 观察吸收斑点 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 将除去展开剂后的层析纸， 在2 5 4 r a n 的紫外灯下观察， 即观察出紫外吸收斑点。 6 . ， . 5 结果的确定 6 . 1 . 5 . 1
9、 以5 0 p g 点样量， 按规定展开并在紫外灯下观察， 只观察出一个紫外吸收斑点， 且与对照样品 的R ， 值一致， 即可确定其层析试验为合格。 6 . 1 . 5 . 2 以5 0 l a g 点样量， 按规定展开并在紫外灯下观察， 除显示出一个斑点外， 其他核昔酸的斑点小 于或等于按产品规格制备的杂质标准的斑点时， 即可确定含其他核昔酸小于或等于标准。 6 . 2 薄层层析 6 . 2 . ， 方法原理 薄层层析是一种将吸附剂均匀地铺在一块玻璃板上形成一薄层， 在此薄层上进行色层分离的一种 层 析 法， 按 分 离 机 理 可 以 分 为 吸 附 、 分 配 、 离 子 交 换 、 凝
10、 胶 过 瘾 等 法 。 本 标 准 主 要 使 用 吸 附 薄 层 层 析 法 。 6 . 2 . 2 试剂及材料 6 . 2 . 2 . 1 对照样品 应符合6 . 1 . 2 . 1 条之规定。 6 . 2 . 2 . 2 硅胶G F 本品系白色均匀细粉及萤光粉， 粒度平均在1 0 4 0 jA m之间， 含有约1 3 %的半水合硫酸钙。 本品应 附合下列分离要求: 各取 。 . 0 4 0 g二甲基黄、 苏丹. 、 靛酚蓝， 溶于1 0 0 m L苯中。取 2 W L ， 点样于按 6 . 2 . 3 . 1 条之规定制备的硅胶G F板上， 用苯展开 1 0 c m， 色谱图应显示三个
11、清晰的分离斑点， 靛酚蓝斑 点接近于起始点， 二甲 基黄在色谱图的中央， 苏丹， 介于二者之间。 6 . 2 - 2 . 3 展开剂 通常选用正丁醇+丙酮+冰乙酸+5 0 0 氨水+ 水=7 +5 +3 十3 +2 ( 体积比) 。必要时可选用其他展 开剂。可参照附录B ( 参考件) 或其他文献。 6 . 2 . 3 操作步骤 6 . 2 . 3 . 1 制板 制备薄层板所用的玻璃板必需表面光滑， 清洁， 其大小可根据需要选择。 小的可用载玻片， 大的可裁 成2 0 c mX 2 0 c m的玻璃片。 取一定量的吸附 剂( 硅胶G F 可按2 5 3 0 g 加6 0 6 5 m L 水) 在
12、研钵中加水调成 糊状， 按玻璃板的 尺寸取一定量的吸附剂糊均匀地铺成一厚度为。 . 2 -0 . 3 m m的薄层。 若使用涂铺器可按制造厂商推荐 的方法涂铺。 铺成的薄层须置于水平台上室温干燥过夜。 硅胶G F制板的时间从调成糊状到铺板不应超 过1 . 5 m i n , 市售的预制板经6 . 2 . 2 . 2 条试验， 符合分离要求的， 亦可使用。 6 . 2 - 3 . 2 点样和展层 取薄层板一块， 距底边1 . 5 c m处为基线点样， 点与点之间的距离为 1 . 5 c m， 点样扩散的直径不超 过。 . 2 c m， 点与点之间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。 称取0 .
13、 0 0 4 g 核昔酸样品， 精确至0 . 0 0 0 1 g , 溶于0 . 2 m L水或盐酸溶液 c ( H C I ) 二 0 . 0 1 m o l / L ) , 必要时稍微加热溶解， 用微量进样器或微量吸管点样， 如要多次点样时， 可用冷风将前一次点样吹干后， 再点下一次样， 点样量按检测要求不少于2 K L ， 即相当 于2 0 y g 样品， 点样时必须注意勿 损伤薄层表面。 薄层层析可选用大小适宜的标本缸， 将已点样的薄层板平衡后， 将样品端朝下放人培养皿中， 薄层 板浸人展开剂的深度不超过 0 . 5 c m， 上行至流动相前沿离顶端 。 . 5 -1 . 0 c m处
14、( 展开距离一般在1 5 - 2 0 c m) 取出晾干， 在5 0 干燥除去溶剂。 6 . 2 . 4 观察吸收斑点 应符合 6 . 1 . 4 条之规定。 6 . 2 . 5 结果的确定 应符合 6 . 1 . 5 . 1 及 6 . 1 . 5 . 2 条之规定。 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 7 含里的测定 按G B / T 9 7 2 1 之规定， 其中: 了 . 1 测定条件 波长: 用样品所需的最大吸收波长; 吸收池厚度: 1 c m; 参比 溶液: 水或盐酸溶液 c ( H C 1 ) =0 . 1 m o l / L 或盐酸溶液 c ( H C I ) =0
15、 . 0 1 m o l / L J . 72 测定方法 称 取1 0 m g 样品， 精确至。 . 0 0 0 0 1 g ， 用盐酸标准溶液 c ( H C I ) =0 . 1 m o l / L 或盐酸标准溶液 。 ( H C I ) 二。 . 0 1 m o l / L ) 溶解， 转移至1 。 。 。 m L 容量瓶中， 稀释至刻度， 摇匀。 按测定条件7 . 1 条之规定， 测定吸光度。 7 . 3 式中 结果的计算 核昔酸的含量按式( 2 ) 计算: Al e . M 1 0 0 0 bx C X 1 0 0 二 二，.” ， (2) x 核昔酸的质量百分含量， Y D ; A
16、 核普酸样品在最大吸收波长处的吸光度; 。 核普酸样品的 摩尔吸收系数， L / c m “ m o t , M 核昔酸样品的相对分子质量; b 吸收池厚度, c m; C -溶液浓度， m g / L ; 1 。 。 。 换算系数。 8 千操失重 称取。 . 1 g 样品， 精确至0 . 0 0 0 1 g p 置于已 在1 0 5 1 2 干燥至恒重的称量瓶中. 于1 0 5 士2 的电 烘 箱中干燥至恒重。 干燥失重按式( 3 ) 计算: x =m , - m 2 X 1 0 0 叨 1 ， ， “ . . . (3) 式中: x 干燥失重， %; I - 恒重前样品的质量， 9 ; M
17、 , 恒重后样品的质量， 9 。 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 附录A 部分核昔酸的比旋光度、 熔点和率尔吸收系数 ( 参考件) 表 A1 中 文 名 称 英文名称 ( 缩写) 相对 分子质量 熔点， C ( , 1 比旋光度 C a 7 o 摩尔吸收系数, L A . m o l p HA . -, n .p m . . X 1 0 腺嗦岭核普一 5 忆 碑酸( 5 - 腺普酸) a d e n o s i n e - 5 - m o n o p h o s p h a t e ( 5 - AMP ) 3 4 7 . 2 21 9 6 - 2 0 0 一 4 6 0 一4
18、8 0 C=5 , I N Na OH 22 5 71 5 . 1 鸟颐岭核昔- 5 - 磷酸( 5 - 鸟昔酸) g u a n o s i n e - 5 - mo n o p h o s p h a t e ( 5 - GMP ) 3 6 3 . 2 41 9 0 -2 0 0 d12 5 61 2 . 2 胞啥呢核昔- 5 一 磷酸( 5 - 胞昔酸) c y t i d i n e - 5 - mo n o p h o s p h a t e ( 5 - C MP ) 3 2 3 . 2 02 3 3 d +2 7 . 1 0 C=O . 5 , Hp O 22 8 01 3 . 2
19、 尿啥PA核昔一 5 一 碑酸( 5 ， - 尿昔酸) u r i d i n e - 5 - mo n o p h o s p h a t e ( 5 - UMP ) 3 2 4 . 1 91 9 8 . 522 6 21 0 . 0 腺嗦岭核普- 5 ， 一 二磷酸 ( 5 一 腺昔二磷酸) a d e n o s i n e - 5 - d i p h o s p h a t e ( 5 - ADP) 4 2 7 . 212 2 5 71 5 . 0 腺嗦 吟核昔一 5 一 三磷 酸 ( 5 一 腺昔三碑酸) a d e n o s i n e - 5 - t r i p h o s p
20、 h a t e ( 5 - ATP) 5 0 7 . 1 922 5 7 1 4 . 7 腺嗦吟脱氧核昔- 5 一 磷酸 ( 5 ， 一 腺嗦吟脱氧核昔酸) a d e n i n e d e o x y r i - b o s e - 5 - p h o s - p h a t e ( 5 - d A MP ) 3 3 1 . 2 2 -3 8 . 0 0 C =O . 2 , H , 0 22 5 81 4 . 8 鸟嗦吟脱氧核昔- 5 ， 一 礴酸 ( 5 ， 一 鸟颐岭脱氧核昔酸) g u a n i n e d e o x y r i - b o s e - 5 - p h o s
21、 - p h a t e ( 5 - d G MP ) 3 4 7 . 2 3 一 3 1 . 0 C =0 . 4 , H, O 12 5 5 1 1 . 8 胞啥9T脱氧核普一 5 一 磷酸 ( 5 ， 一 胞哈陡脱筑核昔酸) c y t o s i n e d e o x y r i - b o s e - 5 - p h o s - p h a t e ( 5 - d C MP ) 3 0 7 . 2 01 8 3 - 1 8 4 +3 8 . 6 0 C =1 . 2 , H, O 1 . 52 7 91 3 . 0 胸腺啥Q脱氧核昔一 一 碑 酸( 5 一 胸腺啥咤脱氧核普 酸)
22、t h y m i d i n e - 5 - p h o s p h a t e (5 - d TM P ) 3 2 2 . 2 11 7 5 一 4 . 4 0 C=4 . H, O 7 2 6 79 . 6 鸟嗦吟核昔一 5 ， 一 二磷酸 ( 5 一 鸟昔二磷酸) g u a n o s i n e - 5 - d i p h o s p h a t e( 5 - GD P) 4 4 3 . 2 1 1 2 5 61 2 . 3 2 R 0 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 续表 A1 摩尔吸收系数, L / c m m o l 中 文 名 称 英文名称 ( 缩写) 相对
23、 分子质量 熔点. ” 比旋光度 a 习 D P HI A . . . , n m I ft . . X1 0 1 2 . 4 1 2 . 8 256-280 鸟嗦吟核普- 5 - 三磷酸 ( 5 一 鸟普三确酸) 5 2 3 . 1 9 胞啥咤核昔一 5 ， 一 二碑 酸 ( 5 一 胞昔二磷酸) 4 0 3. 1 8 胞哈陡核昔一 5 ， 一 三碑酸 ( 5 一 胞普三磷酸) 4 8 3 . 1 62 8 01 2. 8 262.-、一256 尿心陡核昔- 5 ， 一 二磷酸 ( 5 一 尿昔二碑酸) 4 04 .1 71 0. 0 尿 啼吮核昔- 5 一 三磷酸 ( 5 ， 一 尿普三碑
24、酸) 4 8 4 . 1 51 0 .0 腺嗦吟核昔- 3 , 5 一 环式 一确酸 g u a n o s i n e - 5 - t r i p h o s p h a t e ( 5 - GTP) c y t i d i n e - 5 - d i p h o s p h a t e( 5 - CDP) c y t i d i n e - 5 - t r i p h o s p h a t e ( 5 - C TP ) u r i d i n e - 5 - d i p h o s p h a t e ( 5 - UDP ) u r i d i n e - 5 - t r i p h o
25、 s p h a t e ( 5 - UTP ) a d e n o s i n e - 3 , 5 - c y c l i c - m o n o p h o s p h a t e 32 9. 21 1 4 . 5 注: ( 1 ) d 代表达到熔点后分解。 附录B 常用核普酸展开荆的组成和配比表 ( 参考件) 表 B 1 展开剂 配比 ( 体积比) 说明 异丁酸+0 . 5 m o l / L氛水5 +3 纸层析常用展开剂 异丙醉+浓氮水+水7 + 1 +2 纸层析常用展开剂 9 5 %乙醉+1 m o l / L乙酸钠7 + 3 纸层析常用展开剂 用氮水将水调节p H至p H 1 0
26、纸层析常用展开剂 正丁醉+冰乙 酸+ 水5 + 2 +3 薄层层析常用展开剂 正丁醉+丙酮+冰乙酸十5 %氨水+水 7 +5 十3 +3 +2 薄层层析常用展开剂 2 81 G B / T 1 5 3 5 6 一 9 4 附加说明: 本标准由中华人民共和国化学工业部提出。 本标准由北京化学试剂总厂归口。 本标准由上海丽珠东风生物技术有限公司负责起草。 本标准主要起草人何光珍、 金承德。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准，全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址：豆丁下载网址： http:/