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1、G B / T 4 7 8 9 . 5 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 5 -1 9 9 4 ( 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 进行修订。 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 5 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 。 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自 实施之日 起， G B / T 4 7 8 9 . 5 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 江西省卫生防疫站、 中国疾病预防控制中心营养与食品
2、安全所. 本标准主要起草人: 何晓青、 冉陆、 付萍、 杨宝兰、 姚景会。 本标准于1 9 8 4 年首次发布， 1 9 9 4 年第一次修订， 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 5 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 范 围 本标准规定了食品中志贺氏菌的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本
3、。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱; O C-4 0C 3 . 2 恒温培养箱: 3 6 士1 C, 4 2 0C, 3 . 3 显微镜: l o x一l o o x。 3 . 4 均质器或灭菌乳钵。 3 . 5 架盘药物天平: 。 g -5 0 0 g , 精确至。 . 5 g , 3 . 6 灭菌广口瓶: 5 0 0 mL , 3 . 7 灭菌锥形瓶: 5 0 0 m L , 2 5 0 m L , 3 . 8 灭菌培养皿: 直径9
4、0 m m , 3 . 9 硝酸纤维素滤膜: 1 5 0 m m X5 0 m m, 句. 4 5 p m, Irih 用时切成两张， 每张7 0 m mX 5 0 m m， 用铅笔划 格， 每格6 m mX6 m m。每行 1 0 格， 分6 行。灭菌备用。 4 培养基和试荆 4 . 1 G N增菌液: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 1 7 规定。 4 . 2 HE琼脂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 2 1 规定。 4 . 3 S S琼脂: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0
5、3中4 . 2 2 规定。 4 . 4 麦康凯琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 4 规定。 4 . 5 伊红美蓝琼脂( E MB ) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 5 规定。 4 . 6 三糖铁琼脂( T S D: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 2 6 , 4 . 2 7 规定。 4 . 7 葡萄糖半固体管: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 3 1 规定。 4 . 8 半固体管: 按 G B / T 4
6、7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 3 0 规定。 4 . 9 葡萄糖按琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 8 规定。 4 . 1 0 尿素琼脂( p H 7 . 2 ) : 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 1 5 规定。 4 . 1 1 西蒙氏柠檬酸盐琼脂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 5 规定。 4 . 1 2 氰化钾( K C N) 培养基: 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 1 6 规定。 4 . 1
7、3 氨基酸脱V酶试验培养基: 赖氨酸、 鸟氨酸及对照培养基， 按 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 1 2 3 5 G B / T 4 7 8 9 . 5 -2 0 0 3 规定。 4 . 1 4 糖发醉管: 棉子糖、 甘露醉、 甘油、 七叶昔及水杨昔， 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 2 规定。 4 . 1 5 5 %乳搪发酵管: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 3 2 规定。 4 . 1 6 蛋白豚水、 靛基质试剂: 按G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0
8、 0 3 中3 . 1 3 规定。 4 . 1 7 志贺氏菌属诊断血清。 5 检验程序 志贺氏菌检验程序见图 1 , 检样 2 5 g + G N 2 2 5 m L 3 6 IC士1 IC. 6h 一 Sh H E琼脂或S S麦康凯或E M B 3 6 士1 . 1 8 h - 2 4 h 挑取可贬1落 T S I , 葡萄相半圃体 T S I 底 层 产酸. 斜面 产 孩. H . S - 不产气，无动力 非如左述的 各种反应结果 血演学分型进一步的生化试验 生化分群试验 葡萄精按试验、西蒙氏柠裸酸盐、 核氮酸、 尿素、 饭化钾 ( K C N) 、 水杨普和七叶普 志贺氏菌属 分群及分型
9、结果 翎萄糠按十 或任何其他阳性结果 非志贺氏菌 非志贺氏菌 报告 图 1 G B / T 4 7 8 9 . 5 -2 0 0 3 6 操作步获 6 . 1 增菌 以无菌操作取检样2 5 g ( m L ) ， 加人装有2 2 5 m L G N增菌液的广口瓶内， 固体食品用均质器以 8 0 0 0 r / m i n 1 0 0 0 0 r / m i n 打碎1 m i n ， 或用乳钵加灭菌砂磨碎， 粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其 乳化， 于3 6 0C 培养6 h - 8 h .培养时间视细菌生长情况而定， 当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 6 . 2 分离和初步生化试验 6
10、. 2 . 1 取增菌液1 环， 划线接种于H E琼脂平板或S S 琼脂平板一个; 另取1 环划线接种于麦康凯琼脂 平板或伊红美蓝琼脂平板一个， 于 3 6 0C 培养 1 8 h -2 4 h ， 志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落。 6 . 2 . 2 挑取平板上的可疑菌落， 接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般应多挑几个菌落， 以防 遗漏， 经3 6 培养1 8 h -2 4 h ， 分别观察结果。 6 . 2 . 3 下述培养物可以弃去: a ) 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物; b ) 在 1 8 h - - - 2 4 h内发酵乳糖、 蔗糖的培养物; c
11、 ) 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物; d ) 产气的培养物; e ) 有动力的培养物; f ) 产生硫化氢的培养物。 6 . 2 . 4 凡是乳糖、 蔗糖不发酵， 葡萄糖产酸不产气( 福氏志贺氏菌 6 型可产生少量气体) ， 无动力的菌 株， 可做血清学分型和进一步的生化试验。 6 . 3 血清学分型和进一步的生化试验 6 . 3 . 1 血清学分型 挑取三糖铁琼脂上的培养物， 做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查， 如果由于 K抗 原的 存在而不出现凝集， 应将菌液煮沸后再检查; 如果呈现凝集， 则用A 1 , A 2 , B 群多价和D群血清分 别试验。如系B群福氏志贺
12、氏菌， 则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群 抗原见表 1 。可先用群因子血清检查， 再根据群因子血清出现凝集的结果， 依次选用型因子血清检查。 4 种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株， 可用鲍氏多价 1 , 2 , 3 分别检查， 并进一步用 1 一1 5 各型因子 血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集， 可用痢疾志贺氏菌 3 1 2 型多价血清及各型因子血清检查。 表 1 福 氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原 型和亚型型抗原群抗原 在群因子血清中的凝集 3 , 4 6 7 , 8 l a 1 6 2 a 2 b 3 a 3 b 4 a 4 b 5 a 5 6 6 X变体
13、Y变体 I I II II 皿 皿 W 1 V V V U 1 . 2 , 4 , 5 , 9 “ 1 , 2 , 4 , 5 , 9 - 一 1 , 3 , 4 “ “ “ “ “ “ 1 , 7 , 8 , 9 一 1 , 6 , 7 , 8 , 9 “ “ “ “ “ “ 1 , 3 , 4 , 6 “ “ “ “ “ 1 , ( 3 , 4 ) - 一 1 , 3 , 4 , 6 1 , 3 , 4 - ” 一 1 , 5 , 7 , 9 “ “ “ “ “ “ 1 , 2 , ( 4 ) 1 , 7 , 8 , 9 1 , 3 , 4 “ “ 。 二 +一一 +一 +一一 一一+ 一
14、+ +一 ( + )一一 +一 +一一 一一+ ( +)一一 一一+ +一一 注: +凝集; 一不凝集抓 ) 有或无。 G B / T 4 7 8 9 . 5 -2 0 0 3 6 . 3 . 2 进一步的生化试骏 在做血清学分型的同时， 应做进一步的生化试验， 即: 葡萄糖钱， 西蒙氏柠檬酸盐， 赖氨酸和鸟氨酸 脱汝酶， p H 7 . 2 尿素， 氛化钾( K C N ) 生长， 以及水杨昔和七叶昔的分解。除宋内氏菌和鲍氏1 3 型为乌 氨酸阳性外， 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验， 应为氧 化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株， 即使能与
15、某种志贺氏菌分型血清发生凝集， 仍不 得判定为志贺氏菌属的培养物。 已判定为志贺氏菌属的培养物， 应进一步做 5 %乳搪发酵， 甘露醇、 棉子糖和甘油的发酵和靛基质 试验。志贺氏菌属四个生化群的培养物， 应符合该群的生化特性。但福氏6 型的生化特性与A群或C 群相似， 见表 2 , 表 2 志贺氏菌属四个群的生化特性 生化群5 %乳糖 甘露醉棉子糖甘油 靛基质 A群: 痢疾志贺氏菌 B 群: 福氏志贺氏菌 C群 鲍氏志贺氏菌 D群: 宋内氏志贺氏菌 +/ ( +) + + + + 十 ( + ) ( +) d 一/ + ( + ) 一/ + 注: +阳性; 一阴性; 一/ +多数阴性， 少二效
16、阳性以+) 迟缓阳性; d 有不同生化型. 6 . 4 结果报告 综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准，全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址：豆丁下载网址： http:/