《GB-T 4789.14-2003.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GB-T 4789.14-2003.pdf（6页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验) 进行修订。 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 。 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自 实施之日 起， G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 中国疾病预防控制中心营养与食品安
2、全所。 本标准主要起草人: 白竟玉、 付萍、 杨宝兰、 姚景会。 本标准于 1 9 8 4 年首次发布， 1 9 9 4 年第一次修订， 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 范 围 本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新
3、版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 食品卫生微生物学检验菌落总数测定 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0 C -4 0C, 3 . 2 恒温培养箱: 3 6 士1 0C。 3 . 3 恒温水浴锅: 4 6 士1 0C。 3 . 4 显微镜: l o x一l o o x。 3 . 5 均质器或灭菌乳钵。 3 . 6 架盘药物天平: 0 g -5 0 0 g , 精确至。 . 5 g , 3 . 7 灭菌锥形瓶: 5 0
4、0 m L , 3 . 8 灭菌试管: 1 6 mm X1 6 0 m m, 3 . 9 灭菌吸管: 1 m L ( 具0 . 0 1 m L刻度) , 1 0 m L ( 具0 . 1 m L刻度) 。 3 . 1 0 灭菌平培养皿: 直径 9 0 m m, 3 . 1 1 灭菌刀、 剪、 镊子等。 4 培养墓和试荆 4 . 1 肉浸液肉汤培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 1 . 4 . 2 酪蛋白琼脂培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 6 5 , 4 . 3 动力一 硝酸盐培养基: G B / T
5、 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 7 2 , 4 . 4 缓冲葡萄糖蛋白陈水: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 4 . 4 . 5 血琼脂培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 6 . 4 . 6 3 %过氧化氢溶液。 4 . 7 甲蔡胺一 乙酸溶液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中3 . 1 7 . 4 . 8 对氨基苯磺酸一 乙酸溶液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 7 , 4 . 9 革兰氏染色液: G B
6、/ T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中2 . 2 , 4 . 1 0 甘露醇卵黄多粘菌素( MY P ) 琼脂培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 6 4 . 4 . 1 1 0 . 5 写碱性复红染色液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中2 . 8 . G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -2 0 0 3 4 . 1 2 木糖一 明胶培养基 : G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中 4 . 6 6 . 5 检验程序 蜡样芽胞杆菌检验程序见图 1 , 图 1 6 操作步骤
7、 6 . 1 菌数测定 以无菌操作将检样 2 5 g ( m L ) ， 用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成 1 0 - 1 -1 0 - 1 的稀释液按 G B / T 4 7 8 9 . 2 测定。 取各稀释液。 . 1 m L ， 接种在两个选择性培养基一 甘露醇卵黄多 粘菌素( M Y P ) 琼脂 培养基上， 用L形棒涂布于整个表面， 置3 6 士1 培养1 2 h -2 0 h , 选取适当菌落数的平板进行计数， 蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色( 表示不发酵甘露醇) 周围有粉红色的晕( 表示产生卵磷脂 酶) 。计数后， 从中挑取五个此种菌落做证实试验， 根据证实的蜡样芽胞杆菌
8、的菌落数计算出该平板上 的菌落数， 然后乘其稀释倍数， 即得每克( 毫升) 样品中所含蜡样芽胞杆菌数。 例如: 将0 . 1 m L 1 0 - 0 样 品稀释液涂布于MY P平板上， 其可疑菌落为2 5 个， 取五个鉴定， 证实四个菌落为蜡样芽胞杆菌， 则1 g ( m L ) 检样中所含蜡样芽胞杆菌数为: 2 5 X4 / 5 X1 0 0 X1 0= 2X1 0 6 . 2 分离培养 取检样或稀释液划线分离于选择性培养基( MY P ) 上， 置 3 7 0C 培养 1 2 h -2 0 h ， 挑取可疑的蜡样芽 胞杆菌菌落( 见6 . 1 ) 接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养， 然后做证
9、实试验。 6 . 3 证实试验 6 . 3 . 1 形态观察 本菌为革兰氏阳性大杆菌， 宽度在1 u m或 1 t m以上， 芽胞呈卵圆形， 不突出菌体， 多位于菌体中 9 8 G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -2 0 0 3 央或稍偏于一端。 6 . 3 . 2 培养特性 本菌在肉汤中生长混浊， 常微有菌膜或壁环， 振摇易乳化; 在普通琼脂平板上其菌落不透明、 表面粗 糙、 似毛玻璃状或融蜡状， 边缘不整齐。 6 . 3 . 3 6 . 3 . 3 . 生化性状及生化分型 生化性状 本菌有动力; 能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶; 过氧氢酶试验阳性; 溶血; 不发酵甘露醇和木糖; 常能液
10、 化明胶和使硝酸盐还原; 在厌氧条件下能发酵葡萄糖。 6 . 3 . 3 . 2 生化分型 根据蜡样芽胞杆菌对柠檬酸盐利用、 硝酸盐还原、 淀粉水解、 V - P反应、 明胶液化性状的试验， 分成 不同型别， 见表 1 . 表 1 蜡样芽胞杆菌生化分型 型别 生化试验 柠橄酸盐利用 硝酸盐还原淀粉水解V- P反应明胶液化 1+ 2+ 3+ 十 4+ 5+ 6+ 7+十+ 8+十 9+ 1 0+ 1 1+十 1 2+ 1 3+ 1 4+ 1 5+ 6 . 3 . 4 与类似两鉴别 本菌与其他类似菌的鉴别见表 表 2蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别 项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌草状芽胞
11、杆菌炭疽芽胞杆菌 过氧化氢酶+ +十+ 动力 士士 + 硝酸盐还原 + + 酪蛋白分解 士+ + 干 卵黄反应 +十+ G B / T 4 7 8 9 . 1 4 -2 0 0 3 裹 2( 续) 项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌草状芽胞杆菌 炭疽芽胞杆菌 葡萄糖利用( 厌氧) + +十 甘耳醉 + 木糖 士 溶血 +十 干干 已知致病菌特性 产生肠毒京 对昆虫致病 的内毒索结晶 假根样生长对动物和人致病 注 +9 0 %- . 1 0 0 %的菌株阳 性; 一9 0 %- - l o o %的菌株阴性; 士大多数菌株阳弋 性; 干大多数菌株阴性。 本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极
12、为相似， 但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。 其检查方法如下: 取营养琼脂上纯培养物少许， 加少量蒸馏水涂于玻片上， 待自然干燥后用弱火焰固定， 加甲醇于玻片上， 半分钟后倾去甲醇， 置火焰上干燥， 然后滴加。 . 5 0/ a 碱性复红液， 并用酒精灯加热至微 见蒸气维持1 . 5 m i n ， 移去酒精灯， 将玻片放置半分钟， 倾去染液， 置洁净自来水充分漂洗、 晾干、 镜检。 在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体( 如未形成游离芽胞， 培养物应放室温再 保存 1 d -2 d 后检查) ， 如有即为苏云金芽胞杆菌， 蜡样芽胞杆菌检查为阴性。 *草庐一苇草庐一
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