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1、I Cs 6 5 B 4 6 1 2 0 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 4 7 0 2 -2 0 0 2 代替GB/ T 1 4 7 0 2 - 1 9 9 3 饲料中维生素B 6 的测定 高效液相色谱法 D e t e r mi n a t i o n o f v i t a mi n B 6 i n f e e d s - H i g h - p e r f o r ma n c e o f l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y 2 0 0 2 门 0 一 3 1发 布2 0 0 3 一 0 4 一 0 1实施 中
2、华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 GB/ r 1 4 7 0 2 -2 0 0 2 o U吕 本标准修订了G B / T 1 4 7 0 2 -1 9 9 3 饲料中维生素 B 。 的测定方法 ， 较修订前具有高效、 快捷、 准确 的特点。本标准参考“ 化学分析协会” 第六十七期发表的 复合预混料中抗坏血酸、 烟酞胺、 毗哆醇、 硫胺 素及核黄素的液相色谱分析方法 而制定。 本标准与G B / T 1 4 7 0 2 -1 9 9 3 的主要技术差异: 标准规定了高效液相色谱法测定饲料中的维生素 B s ， 确定了试样的提取条件、 色谱条件、 重复性要求;
3、确定了适用范围为维生素B 。 含量大于3 0 m g / k g 的 复合预混合饲料及维生素预混合饲料 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位: 国家饲料质量监督检验中心( 北京) 。 本标准主要起草人: 李兰、 陈必芳、 索德成、 杨文军。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: G B / T 1 4 7 0 2 -1 9 9 3 G B / T 1 4 7 0 2 -2 0 0 2 饲料中维生素B 6 的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中维生素B 。 含量的方法 本标准适用于维生 素B 。 含量大于3 0 m g / k g 的复
4、合预混合饲料、 维生素预混合饲料的测 定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的 修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B / T 1 4 6 9 9 . 1 饲料采样方法 3原理 试样中维生素B 。 经酸性提取液超声提取后， 注人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离， 用紫 外检测器( 或二极管矩阵检测器) 检
5、测， 外标法计算维生素 B 。 的含量。 4 试剂和溶液 除 特 殊 说明 外， 所用 试 剂 均为 分 析 纯， 水 为蒸 馏 水， 色 谱 用 水为 去 离子 水， 符 合G B / T 6 6 8 2 . 1 中 一 级用水规定。 4 . 1 乙二胺四乙酸二钠( E D T A ) 4 . 2 庚烷磺酸钠( P I C B) ， 优级纯。 4 . 3 冰乙酸， 优级纯。 44 三乙胺， 色谱纯。 45 甲醇， 色谱纯。 4 . 6 盐酸溶液， c ( HC D=0 . 1 mo l / L. 4 . 7 提取液: 在已 装人约7 0 0 m L / L去离子水的1 0 0 0 m 工 一
6、 容量瓶中， 加人5 0 m g E D T A ( 4 . 1 ) 待全部 溶解后， 加人2 5 m 工冰乙酸( 4 . 3 ) , 5 mI三乙胺( 4 - 4 ) ， 用去离子水定容至刻度摇匀。取 8 6 0 mL上述溶 液与 1 4 0 ml ， 甲醇混合， 即得。 4 . 8 流动相 : 在已装人约 7 0 0 mL去离子水的 1 0 0 0 m L容量瓶中， 称人 5 0 m g ( 精确至 0 . 0 0 1 g ) E D T A ( 4 . 1 ) , 1 . 1 g ( 精确至0 . 0 0 1 g ) 庚烷磺酸钠( 4 - 2 ) ， 待全部溶解后加入 2 5 mL冰乙酸
7、( 4 . 3 ) , 5 mL三乙胺 ( 4 - 4 ) ， 用去离子水定容至刻度摇匀。 用冰乙酸、 三乙胺调节该溶液p H至 3 . 4 0 士。0 2 ， 过 0 . 4 5 p m滤膜。 取该溶液 8 6 0 ml与 1 4 0 ml , 甲醇( 4 - 5 ) 混合， 超声脱气， 待用。 4 . 9 维生素 B 。 标准溶液: a ) 维生素 B 。 标准贮备液: 准确称取维生素 B s 0 . 0 5 0 0 g于 1 0 0 ml棕色容量瓶中， 加盐酸溶液 ( 4 - 6 ) 约三分之二体积， 超声 1 5 mi n ， 待全部溶解后， 用盐酸溶液( 4 . 6 ) 定容至刻度。
8、此溶液浓 度为 5 0 0 tp g / ml ， 冰箱 4 C避光保存， 可使用 3 个月。 G B / T 1 4 7 0 2 -2 0 0 2 维生素 B 。 标准工作液A: 准确吸取 2 . 0 0 mL维生素 B 。 标准贮备液 4 . 9 a ) 于5 0 m 工 _ 棕色容 量瓶中， 用流动相( 4 . 8 ) 定容至刻度。该 标准工作液浓度为2 0 p g / m L , 维生素B 。 标准工作液 B : 准确吸取 5 . 0 0 m l维生素 B 。 标准工作液 A巨. 9 b ) 于5 0 m L棕色 容量瓶中， 用流动相( 4 - 8 ) 定容至刻度。该标准工作液浓度为
9、2 . 0 p g / mL. 5仪器 、 设备 实验室常用玻璃器皿。 p H计( 带温控， 精确至。 . 0 1 ) . 超声波提取器。 针头过滤器， 备 。 . 4 5 p m( 或 。 . 2 p m) 滤膜。 高效液相色谱仪， 带紫外或二极管矩阵检测器。 月，L八j 月口 仗口口反 6试样的制备 按G B / T 1 4 6 9 9 . 1 采样， 选取有代表性的饲料样品至少5 0 0 g ， 四分法缩减至1 0 0 g ， 磨碎， 全部通过 0 . 2 8 m m孔筛， 混匀， 装人密闭容器中， 避光低温保存备用。 了分析步骤 以下操作避光进行。 7 . 1 试样溶液的制备 称取维生
10、素预混合饲料。 . 2 5 g -0 . 5 0 g ， 精确至。 . 0 0 0 1 g ; 复合预混合饲料2 g -3 g ， 精确至 0 . 0 0 1 g ， 于 1 0 0 ml棕色容量瓶中， 加人三分之二体积的提取液( 4 . 7 ) 在超声波提取器( 5 - 3 ) 中超声提取 2 0 mi n ( 中间旋摇一次以防样品附着瓶底) ， 待温度降至室温后用提取液定容至刻度， 过滤( 若滤液浑浊 则需离心) 。 取部分清 澈的溶液过。 . 4 5 p m ( 或0 . 2 p m ) 滤膜， 浓度约为2 . 0 p g / m 工 2 0 p g / m l 待上机。 7 . 2测定
11、 7 . 2 . 1 高效液相色谱条件 色谱柱: 长1 5 0 mm， 内径 3 . 9 mm， 不锈钢柱。 固 定相: N o V a - p a k C l “ 粒度4 p m ， 或相当的C , ， 柱 流动相流速: 。 . 8 0 mL / mi n 温度: 2 5 C 2 8 C。 进样体积: 1 0 p L . 检测器: 紫外或二极管矩阵检测器， 使用波长 2 8 0 n m 保留时间: 4 m i n -5 m i n . 7 . 2 . 2 定且测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。 根据所测样品维生素B 。 的含量向色谱仪注人工作液 A 4 . 9 b ) 或B 4
12、. 9 c ) 及试样溶液( 7 . 1 ) ， 得到色谱峰面积的 响应值， 用标准溶液峰面积平均值定量 计算 。 标准工作液应在分析始末分别进样， 在样品多时， 分析中间应插人标准工作液校正出峰时间。 8结果计算 8 门试样 中维生素 B 。的含量按式 ( 1 ) 计算 : P 义 V x ， 火 V P 、 X m 只 v . . . . . . . . . . . . . ( 1 ) GB / T 1 4 7 0 2 -2 0 0 2 式中 : N ; 试样中维生素B 。 的含量， 单位为毫克每千克( mg / k g ) ; m 试样质量， 单位为克( 9 ) ; V试样溶液进样体积，
13、 单位为微升恤L ) ; 尸 . 试样溶液峰面积值; c 标准溶液浓度， 单位为微克每毫升( p g / m L ) ; V, 标准溶液进样体积， 单位为微升( K L ) ; P , - 标准溶液峰面积平均值。 2 平行测定结果用算术平均值表示， 保留有效数字 3 位。 9重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差: 维生素 B 。 含量/ ( m g / k g )相对偏差/(%) )5 . O O X 1 0 簇士5 . 0 5 . 0 0 X 1 0 +1 0 . 0 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件，
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