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1、S 6 52 0 嘱8 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB I T 2 0 1 8 9 -2 0 0 6 饲料中莱克多巴胺的测定 高效液相色谱法 D e t e r m i n a t i o n o f r a c t o p a m i n e i n a n i ma l f e e d s - H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h i c m e t h o d 2 0 0 6 - 0 5 - 1 7 发布2 0 0 6 - 0 9 - 0 1 实 施 中华人民共和国国家质量
2、监督检验检疫总局 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布 GB / T 2 0 1 8 9 -2 0 0 6 前言 本标准是在参阅了国内外大量文献的基础上， 根据我国技术发展水平研究制定的， 采用了高效液相 色谱一 荧光检测法。 本标准由农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准负责起草单位: 中国农业大学动物医学院、 国家饲料质量监督检验中心( 北京) 。 本标准主要起草人: 沈建忠、 张素霞、 苏晓鸥、 徐百志、 丁双阳、 沈张奇、 李兰。 GB / T 2 0 1 8 9 -2 0 0 6 饲料 中莱克多巴胺 的测定 高效液相色谱法 范 围 本 标准规定了检
3、测动物饲料中 莱克多巴 胺含量的 高效液相色谱( H P L C ) 方法。 本标准适用于配合饲料、 浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。本方法检测限 为 0 . 5 le g / g , 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法 GB / T 1 4 6
4、 9 9 . 1 饲料采样 方法原理 用酸性甲醇一 水提取试样中莱克多巴胺， 二氯甲烷和正己烷萃取净化， 以 2 %冰乙酸一 乙睛一 水作为流 动相， 用高效液相色谱一 荧光检测法分离测定。 试剂和溶液 除非另 有说明， 本法所用试剂均为分析 纯， 水为去离子水， 符合G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 二级水的规定。 4 . 1 乙睛: 色谱纯。 4 . 2 甲醇 色谱纯。 4 . 3甲醇。 4 . 4 二氯甲烷。 4 . 5 正己烷。 4 . 6 乙酸溶液: 取 5 m L冰乙酸加水至 2 5 0 mL , 4 . 7 提取液: 取 9 0 0 m L甲醇( 4 . 3 )
5、加水到 1 0 0 0 m L， 再加 2 mL浓盐酸， 混匀。 4 . 8 流动相: 取 3 2 0 m L乙睛 ( 4 . 1 )加水到 1 0 0 0 m L， 再加 2 0 mL冰乙酸和 。 . 8 7 g戊烷磺酸钠 ( C, H O, S NaH2 O) ， 混匀 。 4 . 9 莱克多巴 胺标准贮备液: 准确称取莱克多巴 胺标准品( 纯度-9 9 %) 0 . 1 0 0 0 g ， 置于1 0 0 m L容量 瓶中， 用甲醇溶解， 定容， 其浓度为 1 0 0 0 l e g / mL的储备液， 置 4 冰箱中， 可保存 3 个月。 4 . 1 0 莱克多巴胺标准工作液: 分别准
6、确吸取一定量的标准贮备液( 4 . 9 ) , 置于 1 0 mL容量瓶中， 用2 % 冰乙 酸稀释、 定容， 配制成浓度为 0 . 0 1 le g / m L , 0 . 1 le g / m L , 0 . 2 le g / m L , 0 . 5 p g / m L , 1 . 0 l e g / m L , 2 . 0 l e g / mL 的标准溶液， 分别进行 HP L C检测 仪器 和设备 实验室常用仪器、 设备及以下设备。 GB / T 2 0 1 8 9 -2 0 0 6 5 . 1 高效液相色谱仪: 配荧光检测器。 5 . 2 离心机。 5 . 3 振荡器 5 . 4 玻
7、璃具塞三角瓶: 2 5 0 m L e 5 . 5 微孔滤膜: 0 . 4 5 p m, 5 . 6 漩涡混合器。 6 试样 制备 按G B / T 1 4 6 9 9 . 1 规定， 取有代表性的 样品， 四 分法缩减取约2 0 0 g ， 经粉碎， 全部过1 m m孔筛， 棍 匀装人磨口瓶中备用。 7测定步骤 7 . 1 试样提取 称取一定量的试样( 1 0 . 0 g配合饲料， 或 5 . 0 g浓缩饲料， 或 1 . 0 g添加剂预混合饲料) ， 置于 2 5 0 mL 玻璃具塞三角瓶中， 加人 1 0 0 m L提取液( 4 . 7 ) ， 振荡 3 0 mi n 。静止 2 0 m
8、i n ， 取上清液 1 mL于 离心管中， 于4 5 下氮气吹干， 加人 4 mL乙酸溶液( 4 . 6 ) 溶解， 涡动 3 0 s -6 0 s ， 加人 2 mL二氯甲烷 ( 4 . 4 ) 萃取， 涡动 3 0 s , 3 0 0 0 r / mi n离心 1 0 mi n ， 取上层乙酸相于另一离心管中， 加人 2 ML正己烷 ( 4 . 5 ) , 涡动3 0 s , 1 0 0 0 r / m i n 离心5 m i n ， 弃去上层， 用。 . 4 5 p m微孔有机滤 膜过滤作为 试样制备液， 供 高效液相色谱分析。 7 . 2 H P L C色谱条件 色谱柱: C , ，
9、 柱， 长 2 5 0 mm， 内径 4 . 6 mm, 粒径 5 p m， 或相当者。 柱温: 室温。 流动相: 见 4 . 8 , 流动相流速: 1 . 0 m L / m i n , 激发波长: 2 2 6 n m o 发射波长: 3 0 5 n m , 进 样量: 5 0 p L , 7 . 3 HP LC测定 取适量试样制备液( 7 . 1 ) 和相应浓度的标准工作液( 4 . 1 0 ) ， 作单点或多点校准， 以色谱峰面积积分 值定量。当分析物浓度不在线性范围内时， 应将分析物稀释或浓缩后再进行检测。 结果计算与表述 试样中莱克多巴胺的含量 x, 以质量分数( F s / S )
10、 表示， 按式(1) 计算: X二竺 X n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ( 1 ) 式中 : m , -H P L C试样色谱峰对应的莱克多巴胺的质量， 单位为微克( 11 g ) ; m 试样质量， 单位为克( 9 ) ; n -稀释倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示， 保留至小数点后 I 位。 精密度 重复性 实验室内平行测定间的变异系数不大于1 0 %. 1八2.1 ，: 匕匕八己0q G B/ T 2 01 8 9 -2 0 0 6 9 . 2 再现性 实验室间测定的变异系数不大于2
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