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1、中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 饲 料 中 色 氨 酸 测 定 方 法 分光光度法 G B / T 1 5 4 0 0 一 9 4 D e t e r mi n a t i o n o f t r y p t o p h a n i n f e e d s t u f f s -S p e c t r o p h o t o me t r y 1 主题内容与适用范围 本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。 本标准适用于配合饲料、 混合饲料、 浓缩饲料和单一饲料。 2 引用标准 G B 6 4 3 3 饲料粗脂肪测定方法 3 原理 饲料中 蛋白 质 经 碱水 解 后， 降 解 成多
2、 肤 和 游 离 的 氨 基 酸， 在 酸 性 介质 中， 氧 化 剂 存 在 下， 色 氦 酸 U 9 1 环与 对 二 甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物， 在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 4 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。 4 . 1 硫酸( G B 6 2 5 ) 溶液、 c ( 1 / 2 H2 S O 4 ) =2 1 . 2 m o t / L 垦取5 8 9 m l 硫酸徐徐加入约3 5 0 m L水中， 冷却后用水稀释至1 L . 4 . 2 1 %对二甲 氨基苯甲醛溶液: 1 . 0 g 对二甲氨基苯甲醛溶于2 1 . 2 m o t / L硫酸( 4 .
3、1 ) 中并定容1 0 0 m L , 4 . 3 0 . 2 %亚硝酸钠( G B 6 3 3 ) 溶液( m / V ) , 4 . 4 l o /氢氧化钾( G B 2 3 0 6 ) 溶液( m / V ) 4 . S l , 色氨酸， 色谱纯。 4 . 6 1 , 色氨酸标准溶液: 准确称取2 5 . 0 m g L 一 色氨酸于小烧杯中， 加少量0 . 1 M O l / I氢氧化钾溶液使之溶解， 定量地转移 到2 5 0 ml 棕色容量瓶中， 用水定容， 浓度为1 0 0 p g / m L 注: 本标准溶液4 冰箱中保存， 一个月内使用， 浓度不变. 5 仪器、 设备 分析天平
4、: 感量。 . 1 m g , 分光光度计。 离心机: 转速4 0 0 0 r / m i n , 实验室用粉碎机 51525354 国家技术监督局 1 9 9 4 一 1 2 一 3 0 批准 1 9 9 5 一 0 7 一 0 1 实施 G B / T 1 5 4 0 0 一 9 4 培养箱。 容觉瓶: 2 5 m l - , 5 0 mL , 2 5 0 m L , 1 0 in - 具塞试管。 刻度吸管: 。 . 5 mL , 2 m l -5 mL , 2 5 ml 。 试样的制备 八匕7口OU 乐乐55.6 6 . 1 选取有代表性的试样， 按四分法缩分至2 0 0 g ， 粉碎，
5、 全部通过。 . 2 5 m m孔径筛( 6 。 目) 6 . 2 按G B 6 4 3 3 脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后， 混匀， 装入密封容器内备用。 了 分析步骤 了 门皿 作曲线的绘制 7 . 1 . 1 吸取色氨酸浓度为1 0 0 p g / m L的标准溶液( 4 . 6 ) 5 . 0 0 , 7 . 5 0 , 1 0 . 0 0 , 1 2 . 5 0 , 1 5 . 0 0 , 1 7 . 5 0 m L分 别置于2 5 m l , 棕色容量瓶中 用水定容， 摇匀。 溶液浓度分别为2 0 , 3 0 , 4 0 , 5 0 , 6 0 , 7 0 p g / m 工
6、一 。 7 . 1 . 2 吸取各浓度溶液( 7 . 1 . 1 ) 1 m L ， 分置具塞试管( 5 . 7 ) 中， 空白 管加1 m L水。 向 每支试管内加入氢 氧化钾溶液( 4 . 4 ) 1 m l ， 混匀， 将试管放入冷水盆中， 加5 m L对二甲氨基苯甲醛溶液( 4 . 2 ) . 从冷水盆中 取出试管， 摇匀， 在室温( 2 0 -3 0 C， 下同) 放置3 0 m i n , 7 . 1 . 3 向上述每支试管内加。 . 2 m L亚硝酸钠溶液( 4 . 3 ) ， 摇匀， 室温放置2 5 m i n , 7 . 1 . 4 以空白管调零， 在5 9 0 n m波长下
7、， 以1 c m光径测定各溶液吸光度值。 7 . 1 . 5 以色氨酸浓度为横坐标， 吸光度值为纵坐标， 绘制工作曲线， 或列出回归方程式 7 . 2 样品测定 7 . 2 . 1 称样: 按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份， 精确至0 _ l m g , 7 . 2 . 2 水解: 将试样置于5 0 m L容量瓶( 5 . 6 ) 中， 在轻轻振摇中缓慢加入2 5 m l氢氧化钾溶液( 4 . 4 ) , 使试样湿润且不粘壁， 置于4 0 11 培养箱( 3 . 5 ) 中水解1 6 1 8 h , 7 . 2 . 3 离心: 取出水解液冷却至室温后， 用水定容， 播匀， 取部分水解液以4
8、 0 0 0 r / m i n转速离心 1 5 mi n, 7 . 2 . 4 显色: 取2 m L上清液置具塞试管( 5 . 7 ) 中， 并将试管放入冷水盆中， 加入5 m L对二甲氨基苯甲 醛溶液( 4 . 2 ) ， 摇匀。每个试样另取2 m L上清液于具塞试管( 5 . 7 ) 中， 加5 m 1硫酸溶液( 4 . 1 ) 作为样品 空白， 摇匀， 室温放置3 0 m i n 。然后向每支试管内加入 。 . 2 m L亚硝酸钠溶液( 4 . 3 ) ， 摇匀， 室温放置 2 5 mi n , 7 . 2 . 5 比色: 以样品空白 调零， 在5 9 0 n m波长处1 c m光径测
9、定样品溶液的吸光度值。 8 分析结果的表述 计算公式 色氨酸( 脱脂样)(%) A X 2 5 M X 1 0 X 1 0 0 一 色氨酸( 原样)(%) A X 2 5X ( 1 一 F) 一MX1 0 , X 1 0 0 。 脱脂试样质量, m g ; A 从工作曲线上查得色氨酸含量, K g ; F -月 旨 肪分率。 结果的表示 1中2 乐式8. G a / T 1 5 4 0 0 一 9 4 两个 平行样品的测定结果用算术平均值表示， 保留二位小数。 试样脂肪含量小于4 %时， 式(1) 和( 2 ) 所得结果在允许偏差之内 8 . 3 重复性 两个平行样品测定值的相对偏差， 当色氨
10、酸含量小于。 . 1 %时. 大于 3 %; 大于。5 0 %时， 不大于2 %0 不大于 4 %; 0 . 1 0 %一0 . 5 0 %时， 不 G B / T 1 5 4 0 0 一 9 4 At 录样 附称 ( 参考件) 根据样品蛋白质、 色氨酸含量确定称样量， 经试验研究建议不同饲料称样量如下: 蛋白质含量， %饲料种类称样量, m g 1 0以下高粱、 玉米 65 0- - 7 0 0 1 1 2 0 小麦、 大麦、 糠数、 糠饼、 配合料、 混合料、 各种叶粉等 45 0- 5 0 0 2 1 3 0 干面抽、 千粉渣、 豆腐渣、 杂豆、 糟渣类3 5 0 - 4 0 0 3 1
11、 - 4 0 棉仁饼、 菜籽饼、 蓖麻饼、 向日 葵 饼、 浓缩料 2 0 0 - 2 5 0 4 1 5 0 虾粉、 豆饼、 芝麻饼、 醉母、 豆粕、 花生饼、 国产鱼粉 1 8 0 2 0 0 5 0以上 鱼粉、 血粉、 肉骨粉、 蚕蛹、 羽毛粉 1 6 0 - 1 8 0 附加说明: 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国农业分析标准化技术委员会归口。 本标准由中国 农业科学院分析测试中心， 山 西省农科院作物遗传研究所、 黑龙江省 农业科学院实验 技术中心、 上海市农业科学院作物育种栽培研究所共同起草。 本标准主要起草人崔淑文、 王淑芬、 郑云兰、 马宗兰、 马东霞。 *草庐
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