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1、SN 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 S N 05 0 1 一 9 5 出口 禽肉中拉沙里菌素残留量检验方法 M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f l a s a l o c i d r e s id u e s i n p o u l t r y m e a t f o r e x p o r t 1 9 9 5 一 1 1 一 2 8 发布1 9 9 6 一 0 1 一 0 1 实施 中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口 禽肉中 拉 沙里 菌 素残留 量 检 验方法S
2、N0501 一 95 M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f l a s a l o c i d r e s i d u e s恤 p o u l t r y me a t f o r e x p o r t 主匆内容与适用范围 本标准规定了出口禽肉中拉沙里菌素残留量检验的抽样和制样及液相色谱测定方法。 本标准适用于出口鸡肉中拉沙里菌素残留量的检验。 抽样和制样 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同的特征， 如包装、 标记、 产地、 规格和等级等。 抽样数量 批量， 件最低抽样数， 件 1
3、- 2 5 2 6- 1 0 0 n巴J工了0 111止，上n 1 0 1 - 2 5 0 2 5 1 5 0 0 5 0 1 - 1 0 0 0 1 0 0 1 2 5 0 0 2 . 3 抽样方法 按 2 . 2 规定的抽样件数随机抽取， 逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品， 原始样品总量不少于 2 k g ， 放入清洁容器内， 加 封后， 标明标记， 及时送实验室。 2 . 4 试样制备 从每袋原始祥品中取部分有代表性样品， 将可食部分放人高速组织捣碎机中捣碎均匀， 充分混匀， 用四分法缩分出不少于5 o o g试样， 装入洁净容器中， 加封后， 标明标记。 2 . 5 试样保存 将试
4、样于一1 8 以下冷冻保存。 注: 在抽样和制样过程中， 必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 3 测定方法 3， 方法提要 样品中的拉沙里菌素经用乙睛提取， 提取液用正己烷洗涤后， 用配有荧光检测器的液相色谱仪测 中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 5 - 1 1 一 2 8 批准1 9 9 6 - 0 1 一 0 1 实施 S N 05 01一 9 5 定， 绘制标准曲线法定量。 3 . 2 试剂和材料 除另有规定外， 试剂均为分析纯， 水为重蒸馏水。 3 . 2 . 1 乙睛: 重蒸馏。 3 - 2 . 2 正己烷: 重蒸馏。 3 . 2 . 3 四氢吠喃: 重蒸馏。
5、3 . 2 - 4浓氨水 。 3 . 2 . 5 甲醇: 重蒸馏。 3 - 2 . 6 氮气。 3 . 2 . 7 流动相 A液: 取四氢吠喃 1 5 0 mL 、 甲醇 3 0 m L, 浓氨水l O m L、 正己烷8 1 0 m L， 在分液漏斗中充分混合， 静置 分层约 1 h ， 弃去下层。 B液: 取四氢吠喃 1 5 0 mL 、 甲醇3 0 mL 、 正己烷 8 2 0 mL ， 在量筒中充分混合。 取 3 份A液加1 份 B液， 在棕色瓶中充分混合， 作为流动相。 3 . 2 . 8 流动相饱和的水: 将 1 0 0 m L流动相与 5 0 mL水于 2 5 0 m L分液漏斗
6、中混合， 用力振摇 4 0 s ， 静置 分层， 移出下层待用。现用现配。 3 . 2 . 9 拉沙里菌素钠标准品: 纯度)9 9 %, 3 . 2 . 1 0 拉沙里菌素标准溶液: 准确称取 1 0 0 . O m g拉沙里菌素， 用少量四氢映喃溶解， 并用四氢吠喃稀 释， 配成浓度为 1 . O m g / m L的标准储备液。 用流动相分别稀释成2 0 n g / m L , 5 0 n g / m L , 1 0 0 n g / m L , 2 0 0 n g / m L的拉沙里 菌素标准工作液。 3 . 3 仪器和设备 3 . 3 . 1 液相色谱仪并配有荧光检测器。 3 . 3 -
7、 2 自动进样器或 5 0 ( . L微量进样器。 3 - 3 - 3 全玻璃蒸馏装置。 3 . 3 . 4 均质器: 5 0 0 m L均质杯。 3 . 3 . 5 离心机。 3 . 3 . 6 离心管: 3 0 m L , 5 O m L ， 具塞， 带刻度; 2 5 0 m L , 3 . 4 测定步骤 3 . 4 . ， 提取 称取约1 她试样( 精确至0 . 1 g ) , 置于 5 0 0 m L均质杯中， 加入 4 0 mL乙睛， 均质 2 min ， 然后全部移人 2 5 0 m L离心管中。 在离心机上以2 5 0 0 r / mi n 离心2 0 min 。 离心后， 取上
8、清液 2 3 mL于 5 0 mL离心管中， 加 入2 3 m L正己烷， 剧烈振摇2 0 s 。 再在离心机上以2 0 0 0 r / m i n离心2 0 m i n ， 记录下层乙睛的体积( B ) 。 吸出 上层正己烷弃去， 取下层乙睛 2 0 m L, 置于 3 0 mL离心管中， 于 6 0 水浴中， 在氮气流下吹至近干加 1 . O m L用流动相饱和的水， 旋摇 2 0 s 。再加入 2 . O m L流动相， 混合 2 0 s ， 在离心机上以 2 5 0 0 r / mi n离心 2 0 min ， 上清液供液相色谱测定。 3 . 4 . 2 测定 3 . 4 - 2 .
9、1 色谱条件 a . 色谱柱: 硅胶色谱柱( Hy p e r s il 7 9 9 1 6 S I ， 或相当者) ， 5 p m, 1 0 0 mm X 4 . 6 m m ( i d ) ; 两个柱串联; b . 流动相: A液一 B液( 3 . 2 . 7 ) ; c . 流速: 1 . 5 mL / mi n ; d 荧光检测器: 激发波长3 1 0 n m ， 发射波长4 3 0 n m ; e进样量: 5 0 p L o 3 . 4 . 2 . 2 色谱测定 S x 0 501 一 95 用流动相平衡至系统稳定， 分别取2 0 n g / m L , 5 0 n g / m L
10、, l 0 0 n g / m L , 2 0 0 n g / m L 浓度的标准工作液 5 0 g L ， 进行色谱测定。 以峰面积对应进样浓 度绘制标准曲 线。 取样液5 如L 进行色 谱测定。 在上述条件 下， 拉沙里菌素的保留时间约为1 . 7 min , I5 空白试验 除不加试样外， 按上述测定步骤进行。 I6 结果的计算和表述 用色谱数据处理机或按下式计算样品中拉沙里菌素的含量: X = 二 X 4 ( B 乙 2 3 ) 式中: X-试样中拉沙里菌素的含量, n g / g ; A 由 标准曲 线查得的样液中拉沙里菌素 浓度， n g / m L ; B加正己烷离心之后的乙睛体
11、积， m L; m 试样重量+ g = 注: 计算结果需扣除空白值。 测定低限、 回收率 测定低限 本方法测定 低限为2 0 n g / g , 回收率 回收率实验数据: 拉沙里菌素添加浓度在 2 0 - 5 0 n g / g范围内， 回收率为 9 1 . 7 % - 9 7 . 5 %, 附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。 本标准由中华人民共和国烟台进出口商品检验局负责起草。 本标准主要起草人刘桂荣、 沈志刚、 李立、 于俐俐、 王洪兵。 P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s
12、 R e p u b l i c o f C h i n a f o r I mp o r t a n d E x p o r t C o mmo d i t y I n s p e c t i o n M e t ho d f o r t h e de t e r m ;A t i o n o f l a s a l o c i d S N 05 01一 95 r e s i d u e s i n p o u l t r y me a t f o r e x p o r t 1 S c o p e a n d f i e l d o f a p p l i c a t i o n T h
13、i s s t a n d a r d s p e c i f i e s t h e m e t h o d s o f s a mp l i n g , s a mp l e p r e p a r a t i o n a n d d e t e r m i n a t i o n b y li q u id c h r o- m a t o g r a p h y o f l a s a l o c id r e s i d u e s i n p o u lt r y me a t f o r e x p o r t . T h i s s t a n d a r d i s a p
14、p l ic a b l e t o t h e d e t e r min a t io n o f l a s a lo c i d r e s i d u e s i n c h i c k e n me a t f o r e x p o rt. 2 S a m p l i n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n 2 . 1 I n s p e c t i o n l o t T h e q u a n t i t y o f a n i n s p e c t i o n l o t s h o u l d n o t b e m o r
15、 e t h a n 2 5 0 0 p a c k a g e s . T h e c h a r a c t e r i s t ic s o f t h e c a r g o w i t h in t h e s a m e i n s p e c t io n lo t , s u c h a s p a c k i n g , m a r k , o r i g i n , s p e c if ic a - t i o n , g r a d e e t c . , s h o u ld b e t h e s a me . 2 . 2 Qu a n t it y o f s a
16、 mp l e t a k e n N u m b e r o f p a c k a g e s Mi n i mu m n u mb e r o f i n e a c h in s p e c t i o n l o t p a c k a g e s t o b e t a k e n 1 - 2 5 1 2 6 - 1 0 0 5 1 0 1 - 2 5 0 1 0 2 5 1 - 5 0 0 1 5 5 0 1 - 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 - 2 5 0 0 2 0 2 . 3 S a m p li n g p r o c e d u r e A n u mb e
17、r o f p a c k a g e s s p e c i f i e d i n 2 . 2 a r e t a k e n a t r a n d o m a n d o p e n e d o n e b y o n e . F r o m e a c h p a c k - a g e s a t le a s t o n e b a g s h a l l b e t a k e n a s t h e p r ima r y s a mp l e . T h e t o t a l w e ig h t o f a l l p r i m a r y s a mp l e s
18、s h o u l d n o t b e l e s s t h a n 2 k g , wh i c h s h a ll b e p l a c e d i n a c le a n c o n t a in e r , s e a l e d , l a b e l e d a n d s e n t t o l a b o r a t o r y i n t i m e . 2 . 4 P r e p a r a t i o n o f t e s t s a m p l e P a r t o f r e p r e s e n t a t i v e s a mp le i s
19、t a k e n f r o m e a c h b a g o f t h e p r i m a r y s a mp l e a n d t h e e d i b l e p o r t i o n s a r e h o mo g e n i z e d b y g r in d in g i n a h ig h - s p e e d g r i n d e r . T h e g r o u n d s a m p le is t h o r o u g h ly mix e d a n d r e d u c e d t o a t l e a s t 5 0 0 g b
20、y q u a r t e r i n g a s t h e t e s t s a m p l e , wh i c h is p la c e d i n a c l e a n c o n t a i n e r , s e a le d a n d la b e l e d 2 . 5 S t o r a g e o f t e s t s a m p le Ap p r o v e d勿 t h e S t a t e A d mi n i s t r a t i o n o f I mp o r t a n d E x p o r t Co mmo d i t y I n s p
21、 e c t i o n o f t h e P e o p l e s R e p u b l ic o f C h i n a o n N o v . 2 8 , 1 9 9 5 I m p l e m e n t e d f r o m J a n . 0 1 , 1 9 9 6 S N 05 01 一 9 5 T h e t e s t s a mp l e s h o u l d b e s t o r e d b e l o w -1 8 0C. No te ; I n t h e c o u r s e o f s a mp li n g a n d s a mp le p r
22、e p a r a t i o n . P r e c a u t io n mu s t b e t a k e n t o a v o id c o n t a m i n a t io n o r a n y o t h e r f a c t o r s wh ic h ma y c a u s e t h e c h a n g e o f t h e r e s i d u e c o n t e n t . 3 Me t h o d o f d e t e r mi n a t io n 3 . 1 P r in c ip le， T h e l a s a lo c i d r
23、 e s id u e s i n t h e s a m p l e is e x t r a c t e d w i t h a c e t o n it r i l e , t h e e x t r a c t is w a s h e d wit h n - h e x - a n e . D e t e r mi n a t i o n is m a d e b y me a n s o f l iq u i d c h r o m a t o g r a p h e q u ip p e d w i t h f lu o r e s c e n c e d e t e c t o
24、 r , u s i n g s t a n d a r d w o r k i n g c u r v e m e t h o d . 3 . 2 R e a g e n t a n d m a t e r i a l s U n le s s o t h e r w is e s p e c i f i e d , a l l t h e r e a g e n t s s h a l l b e a n a l y t i c a ll y p u r e , “ w a t e r “ i s r e d i s t il l e d w a t e r . 3 . 2 . 1 Ac
25、e t o n i t r il e : R e d i s t ill e d 3 . 2 . 2 n - He x a n e 1 Re d i s t i ll e d 3 . 2 . 3 T e t r a h y d r o f u r a n : R e d i s t i l le d . 3 . 2 . 4 A mm o n i u m h y d r o x i d e : C o n c e n t r a t e d 3 . 2 . 5 Me t h a n o l : Re d is t i l le d . 12 . 6 N i t r o g e n . 3 . 2
26、 . 7 M o b i le p h a s e S o lu t i o n A: T e t r a h y d r o f u r a n l 5 0 mL , m e t h a n o I 3 0 m L, c o n c e n t r a t e d a m mo n iu m h y d r o x i d e l O mL , n - h e x a n e 8 1 0 mL, m i x t h o r o u g h l y i n a .s e p a r a t o r y f u n n e l , s e t a s i d e f o r a b o u t
27、l h . D is c a r d t h e lo w e r la y e r . S o lu t i o n B, T e t r a h y d r o f u r a n 1 5 0 mL , m e t h a n o l 3 0 m L, n - h e x a n e 8 2 0 m L, mi x t h o r o u g h l y i n a c y li n d e r . C o mb i n e t h r e e p a r t s o f s o l u t i o n A w i t h o n e p a r t o f s o lu t i o n
28、B . Mix t h o r o u g h l y i n a n a m b e r b o t t l e , t o b e u s e d a s m o b il e p h a s e . 3 . 2 . 8 Wa t e r s a t u r a t e d wit h m o b i le p h a s e : Mi x l O O mL o f m o b i l e p h a s e a n d 5 0 mL o f w a t e r i n a 2 5 O mL s e p a r a t o r y f u n n e l , s h a k e v i g
29、 o r o u s ly f o r 4 0 s . L e t la y e r s s e p a r a t e . R e t a in t h e l o w e r l a y e r f o r u s e . P r e p a r e f r e s h l y p r i o r t o u s e . 3 . 2 . 9 L a s a lo c i d s o d i u m s t a n d a r d s P u r it y 9 9 y o 12 . 1 0 L a s a l o c i d s t a n d a r d s o l u t i o n :
30、 Ac c u r a t e l y w e i g h 1 0 0 . O mg o f la s a l o c id a n d d i s s o l v e in a s ma ll a mo u n t o f t e t r a h y d r o f u r a n . D i l u t e w it h t e t r a h y d r o f u r a n t o p r e p a r e t h e s t a n d a r d s t o c k s o l u t io n . I t s c o n c e n - t r a t io n is 1 .
31、 O mg / m L . T h e n d il u t e t h e s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n w it h t h e m o b i le p h a s e t o t h e s t a n d a r d w o r k - in g s o l u t io n s , o f wh i c h la s a l o c id c o n c e n t r a t i o n s a r e 2 0 n g / mL , 5 0 n g / m L, l 0 0 n g / m L, 2 0 0 n g / mL
32、. 3 . 3 A p p a r a t u s a n d e q u i p m e n t 9 . 3 . 1 L i q u id c h r o m a t o g r a p h , e q u i p p e d w i t h fl u o r e s c e n c e d e t e c t o r . 3 . 3 . 2 A u t o s a m p l e r o r 5 0 1A L m i c r o s y r in g e . 3 . 3 . 3 G l a s s r e d i s t i ll a t i o n e q u i p me n t .
33、3 . 3 . 4 H o mo g e n i z e r , wit h 5 0 0 mL h o mo g e n i z in g c u p s . 3 . 3 . 5 C e n t r i f u g e . 3 . 3 . 6 C e n t r i f u g e t u b e s , 3 0 m L, 5 0 m L, g r a d u a t e d , w i t h s t o p p e r , 2 5 0 m L . 3 . 4 P r o c e d u r e 3 . 4 . 1 E x t r a c t i o n We i g h c a 1 O g
34、 ( a c c u r a t e t o 0 . l g ) o f t h e t e s t s a mp l e i n t o a 5 0 0 m L h o m o g e n iz i n g c u p , a d d 4 0 m L o f s e e - t o n i t r il e a n d h o m o g e n i z e f o r 2 m i n . T r a n s f e r i n t o a 2 5 0 m L c e n t r i f u g e t u b e , c e n t r i f u g a l i z e a t 2 5
35、0 0 r / min f o r 2 0 m i n . P i p e t 2 3 m L o f t h e u p p e r l a y e r in t o a 5 0 m L c e n t r i f u g e t u b e , a d d 2 3 mL o f n - h e x a n e , s h a k e v i g o r o u s - S N 05 01 一 9 5 l y f o r 2 0 s . C e n t r i f u g a li z e a t 2 0 0 0 r / m i n f o r 2 0 min . R e c o r d t
36、 h e v o l u m e o f a c e t o n i t r i le ( B ) . A s p i r a t e a l l o f t h e t o p la y e r a n d d i s c a r d . P i p e t 2 0 mL o f a c e t o n i t r i le la y e r t o a 3 0 m L c e n t r i f u g e t u b e . E v a p o r a t e n e a r l y t o d r y - n e s s i n a 6 0 0C w a t e r - b a t h
37、 u n d e r n i t r o g e n c u r r e n t . Ad d 1 . O mL o f w a t e r s a t u r a t e d w i t h m o b i le p h a s e , s h a k e f o r 2 0 s . A d d 2 . O mL o f m o b i l e p h a s e , mi x f o r 2 0 s . C e n t r if u g a l iz e a t 2 5 0 O r / min f o r 2 0 m i n . P i p e t t h e u p p e r l a
38、y e r f o r li q u id c h r o m a t o g r a p h i c d e t e r m in a t io n . 3 . 4 . 2 D e t e r mi n a t i o n 14 . 2 . 1 L C o p e r a t i o n c o n d i t i o n a . C h r o m a t o g r a p h ic c o l u m n : I 0 0 m mX4 . 6 mm( id ) , 5 p m, s il i c a g e l c h r o m a t o g r a p h i c c o l u
39、mn ( H y p e r - s i l 7 9 9 1 6 S I , o r t h e e q u i v a l e n t ) , t w o c o l u mn s i n s e r i e s ; b . Mo b i le p h a s e : S o l u t io n A- s o l u t io n B ( 3 . 2 . 7 ) ; c . F l o w r a t e : 1 . 5 mL/ mini d . F l u o r e s c e n c e d e t e c t o r : E x c it a t i o n w a v e le
40、n g t h : 3 1 O n to, e m i s s i o n w a v e l e n g t h : 4 3 0 n m; e . I n j e c t i o n v o lu me: 5 0 p L . 14 . 2 . 2 LC d e t e r mi n a t i o n Wh e n w o r k in g c o n d i t i o n i s m a d e s t a b l e w i t h t h e m o b i le p h a s e . f e e d i n 5 0 p L o f t h e s t a n d a r d w
41、o r k in g s o l u t io n s o f 2 0 n g / mL , 5 0 n g / m L, l O O n g / m L, 2 0 0 n g / m L in c o n c e n t r a t i o n , r e s p e c t i v e l y t o p r e p a r e a s t a n - d a r d w o r k i n g c u r v e o f la s a l o c id c o n t e n t a g a in s t t h e p e a k a r e a . F e e d in 5 0 y
42、L o f t h e s a m p le s o l u t io n f o r l iq u i d c h r o m a t o g r a p h ic a n a l y s i s . U n d e r t h e a b o v e c h r o m a t o g r a p h i c c o n d i t i o n , t h e r e t e n t i o n t i m e o f l a s a l o c i d i s a b o u t 1 . 7 mi n . 3 . 5 B l a n k t e s t T h e o p e r a t
43、 io n o f t h e b la n k t e s t i s i h e s a m e a s d e s c r i b e d i n t h e m e t h o d o f d e t e r mi n a t io n , b u t w it h o u t a d d it i o n o f t e s t s a mp l e . 3 . 6 C a l c u l a t i o n a n d e x p r e s s io n o f r e s u l t T h e c a l c u la t i o n o f t h e c o n t e
44、n t o f l a s a lo c i d i s c a r r ie d o u t b y L C d a t a p r o c e s s o r , o r a c c o r d i n g t o t h e f o l - lo w f o r mu la: X AX 4 ( B/ 2 3 ) ， 刀 wh e r e X -C o n t e n t o f l a s a lo c i d i n t h e t e s t s a mp l e , n g / g ; A C o n c e n t r a t i o n o f l a s a lo c i d
45、 in t h e s a mp l e s o lu t i o n o b t a i n e d f r o m t h e s t a n d a r d c u r v e , n g / m L; B -Vo l u me o f a c e t o n it r i l e a f t e r c e n t r i f u g e w i t h n - h e x a n e , m L; m-Ma s s o f t e s t s a mp l e , g . N o t e : T h e b la n k v a lu e s h o u l d b e s u b
46、t r a c t e d f r o m t h e a b o v e r e s u lt s o f c a lc u l a t io n . 4 L i m i t o f d e t e r m i n a t i o n a n d r e c o v e r y 4 . 1 L i mi t o f d e t e r mi n a t io n T h e l imit o f d e t e r min a t i o n o f t h i s m e t h o d i s 2 0 n g / g . 4 . 2 R e c o v e r y A c c o r d
47、 i n g t o t h e e x p e r i m e n t a l d a t a , w h e n t h e f o r t if ie d c o n c e n t r a t i o n o f l a s a lo c id is i n t h e r a n g e o f 2 0 -5 0 n g / g , t h e r e c o v e r y i s 9 1 . 7 %-9 7 . 5 %. s N 0 5 0 1 一 9 5 Ad d i t i o n a l e x p l a n a t i o n s ; T h is s t a n d
48、a r d w a s p r o p o s e d b y t h e S t a t e A d m i n is t r a t i o n o f I mp o r t a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o n o f t h e P e o p l e s R e p u b l ic o f C h i n a . Th is s t a n d a r d wa s d r a f t e d b y t h e Ya n t a i I mp o r t a n d Ex p o r t C o mmo d
49、i t y I n s p e c t i o n B u r e a u o f t h e P e o - p lc s R e p u b l ic o f C h i n a . T h i s s t a n d a r d w a s m a in l y d r a f t e d b y L iu G u i r o n g , S h e n Z h i g a n g , L i L i , Y u L i l i , Wa n g H o n g b i n g . N o t e : T h i s E n g l is h wr s i o n , a t r a n s la t io n f r o m t h e C h in e s e t e x t , i s s o le l y fo r g u id a n c e . *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺