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1、209株真菌感染分布及耐药分析 胥振国1，蔡玉华1，袁星1，张蓉2，胡开明2摘要目的:了解临床真菌的感染分布及耐药现状，为临床合理使用抗真菌药物提供依据。方法:对巢湖市第一人民医院2010年分离的209株真菌进行微生物学鉴定和药敏试验。结果:白色念株菌检出最高为148株(7082%);其次为热带念珠菌30株(1435%);痰液标本真菌检出率最高(6746%)，患者大部分为60岁以上老年人。真菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B敏感率较高，在98%以上，对伊曲康唑敏感性稍低(7932%)。结论:真菌感染以白色念珠菌和热带念珠菌较为常见，而且耐药菌株的检出率呈上升趋势，临床上应慎用抗菌药物，减少耐药菌株的
2、产生。 关键词真菌;抗真菌药;药敏试验 在人体中，真菌与细菌起着重要的微生态平衡作用。近年来，随着广谱抗生素、激素的大量使用及肿瘤化疗、侵入性诊疗、免疫抑制剂的广泛应用，导致菌群失调和机体的抵抗力降低，易引起真菌感染，其中器官移植受者和恶性肿瘤中真菌感染患病率高达20%40%，而且往往是致命的1。真菌引起的临床感染率日渐增多，已成为全球问题，且出现了一定程度的耐药性，给治疗带来一定困难。因此抗真菌药物体外药敏试验对真菌耐药性的研究及监测耐药菌株的出现具有重要的意义2。本文对巢湖市第一人民医院2010年分离的209株真菌进行了感染分布及耐药性分析，现作报道。 1材料与方法 11菌株来源巢湖市第一
3、人民医院门诊、住院患者的临床痰、尿液、血液、脑脊液、分泌物及粪便等标本中分离出酵母样真菌209株。同一患者相同标本多次分离出相同菌株，按一株菌计算;相同标本分离出2种或2种以上菌种，或自不同部位分离出相同或不同菌株，按2株以上计算。 12仪器和试剂沙保弱培养基为杭州天和微生物试剂有限公司;科玛嘉念珠菌显色培养基购自郑州博赛生物技术研究所。ATB Expression型全自动细菌鉴定仪，ID32 C真菌鉴定板，ATB FUNGUS 3真菌药敏试验条，均为法国生物梅里埃公司产品;无菌生理盐水，ATB电子移液器，ATB F2培养基，比浊计。 13质控菌株白色念珠菌ATCC 22019，热带念珠菌AT
4、CC 6528。 14真菌的分离及鉴定依不同标本首先接种在沙氏培养基(痰、中段尿、大便、分泌物等)或增菌(血液、脑脊液、腹水)再转种，37培养。将在沙氏培养基上生长的酵母菌，转种到科玛嘉显色培养基上，37培养2448 h后，根据在显色培养基上生长显示的颜色判断菌种。白色念珠菌:绿色、翠绿色;热带念珠菌:蓝灰色、铁蓝色;克柔念珠菌:粉红色(模糊，有微毛，菌落较大);光滑念珠菌:紫色。 在显色培养基显色不明显者，用ATB的ID32 C鉴定板条进行鉴定。 15药敏试验打开1个085%氯化钠培养基安瓿，将菌落制备成浊度相当于2 McFarland的悬浊液。使用一移液管转移20l此悬浊液到一ATBF2培
5、养基的安瓿中。用ATB电子移液管混匀ATBF2培养基，避免有气泡，使用ATB电子移液管在ATB FUNGUS 3真菌药敏试验条中加入135l的ATB F2培养基，盖好试条盖子。把试条放入一个密封容器，在有氧条件35(+2)的环境中，念珠菌属要培养24(+2)h，新生隐球菌要培养48(+6)h。 通过ATB仪器自动测定209株酵母样真菌对5-氟胞嘧啶(5-FC)、两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)及伏立康唑(VRC)5种抗真菌药物的敏感程度。 16药物敏感性判断标准CLSI/NCCLS推荐的念珠菌属分界点见表1. 2结果 21标本分布209株真菌标本中，痰141例，中段尿
6、29例，分泌物11例，大便10例，血液9例，脑脊液4例，腹水2例，胸水1例。男137例，女72例;年龄1087岁，其中50岁61例，5060岁20例，60岁128例。 22科室分布血液肿瘤科75例，呼吸内科61例，重症监护室24例，心血管科19例，肾病内科12例，神经外科6例，内分泌科3例，神经内科2例，感染科2例，普外一科2例，普外二科1例，骨一科1例，口腔科1例。 23真菌培养鉴定结果白色念珠菌148株，热带念珠菌30株，克柔念珠菌15株，光滑念珠菌13株，清酒假丝酵母菌2株，高里假丝酵母菌1株。 24真菌对5种抗真菌药物的敏感率真菌对AMB、5-FC、VRC、FCA、IRT的敏感率最高的
7、为AMB和5-FC(见表2)。 3讨论 真菌通常与人处于共生状态，为人体正常菌群的一部分，只有在机体免疫力低下时才致病。近年来，随着临床医学的发展，激素、广谱抗菌药物的广泛应用，机体正常的微生态平衡遭到破坏，真菌感染发生率不断上升34。209株真菌主要分布在血液肿瘤科、呼吸内科、重症监护室和心血管科病房。这些病房的患者抵抗力较弱，极易在各种诱因下发生真菌感染。在临床标本的分布中，痰和中段尿标本占了很大的比例，明显高于血液、粪便等标本，与邹正平等5报道相符。这可能与医院感染好发于这些部位有关。 患者多数为老年人，年龄60岁，显示年龄与真菌感染呈正相关，并且住院时间长、侵入性诊疗，有些患者存在一些
8、基础疾病，都易导致真菌感染;免疫抑制剂、抗肿瘤药物的广泛应用，临床上不重视病原学检测，仅凭经验用药，长时间使用抗生素，造成菌群失调，也使真菌感染逐渐增多68。因此，对老年患者应注意保护其免疫功能，尽量减少或避免导致真菌感染的医源性因素，重视病原学的检测，尤其应该在患者使用抗生素之前做病原学检测，按照细菌药物敏感试验结果采取有针对性的合理用药9。 本研究结果显示，209株真菌标本中检出白色念珠菌最多，其次是热带念珠菌，与Radentz10的研究结果基本一致。从209株真菌对5种抗真菌药物的耐药率分析，AMB和5-FC耐药率较低，这与袁正泉等11的报道一致。虽然AMB在临床上毒副作用较大，但它仍是治疗严重真菌感染，特别是全身感染患者的首选药物。其次是FCA和ITR，耐药率为747%和862%;ITR已出现了较多中介株(1206%)。克柔念珠菌对FCA天然耐药，对AMBMIC2 mg/L，建议判断为耐药。针对光滑念珠菌的检测，建议将其对FCA和(或)ITR敏感的结果改为中介(I)，因为该菌对这两个药存在固有的敏感性低的现象12。 由于不同种类的真菌具有不同的耐药特点，微生物实验室应重视真菌鉴定，并及时报告药敏结果，临床须根据药敏试验结果合理选择抗真菌药物。此外临床和医院感染管理部门应及时发现和监测真菌感染的易感因素，做到早预防、早治疗，有效地控制