棉田钾细菌促进棉花生长的机制 生物技术毕业论文.doc

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1、 2011 届毕业生毕业论文 棉田钾细菌促进棉花生长的机制棉田钾细菌促进棉花生长的机制 学生姓名 孙少清 学 号 1091207043 所属学院 生命科学学院 专 业 生物技术 班 级 2011 指导教师 龚明福 日 期 2011.5.28 塔里木大学教务处制 塔里木大学毕业论文 I 目目 录录 摘要1 关键词1 ABSTRACT:1 KEY WORDS1 引言2 1.材料与方法.2 1.1 材料2 1.1.1 样品2 1.1.2 主要仪器与设备2 1.1.3 试剂与溶液3 1.2 方法 .3 1.2.1 对钾细菌进行重筛.3 1.2.2 测定固氮酶活性.3 1.2.3 测定产 ACC 酶活性

2、：4 1.2.4 测定产植物激素 IAA 的能力：4 1.2.5.解钾的能力测定：.5 2 结果与分析5 2.1 对钾细菌进行重筛5 2.2 固氮酶活性6 2.3 测定产 ACC 酶活性：6 2.3.1 标准曲线：.6 2.3.2 ACC 脱氨酶活性7 2.4 测定产植物激素 IAA 的能力：.8 2.4.1 标准曲线：.8 2.4.2 测得的发酵液中 IAA 的浓度9 2.5 解钾能力测定：9 3结论与讨论：10 3.1.固氮酶活性：10 3.2.ACC 酶活性：.10 3.3.产 IAA 能力：.10 塔里木大学毕业论文 II 3.4.解甲能力：10 参考文献：10 致 谢12 塔里木大学

3、毕业论文 1 棉田钾细菌促进棉花生长的机制棉田钾细菌促进棉花生长的机制 孙少清 （塔里木大学 生命科学学院，塔里木盆地生物资源保护利用新疆生产建 设兵团重点实验室，新疆阿拉尔 843300） 摘要 对分离自不同连作棉田土中的 79 株硅酸盐细菌（Silicate bacteria）通过用硅酸盐分离 培养基重新筛选得到的 20 株钾细菌进行了 4 项生理指标的测定，包括固氮酶活性、1-氨基环丙烷 -1-羧酸(ACC)脱氨酶活性、产植物激素（IAA）的能力以及解钾能力等。结果表明：这 20 株菌中 （1）菌株 K19、K44、K27、K43、K22、席 10-6、J7、K35、席 K3 等 9 株

4、菌具有较强的固氮酶 活性；(2)菌株席 10-10 产生 ACC 脱氨酶的能力最强，为 3.157 molmin ；(3)菌株 红袋 K10、K35、J7、K37 产 IAA 能力较强；(4) K19、K27、K37、K43、K45 这 5 株菌的发酵 液中速效钾含量分别比对照多出 48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和 83.191%。 关键词 棉田钾细菌；促进；棉花；生长机制 The Silicate bacteria of cotton field promotion cotton grows mechanism Sun Shaoqing （Tarim Uni

5、versity, College of Life Science, Protection and utilization of biological resources in the Tarim Basin of Xinjiang Production and Construction Corps Laboratory, Alar, Xinjiang 843300） Abstract: To separated 79 bacillus mucilaginosus through uses 20 potassium bacteria from the different continuous c

6、ropping cotton field earth in which the silicate separation culture medium screened obtains to carry on 4 physiological target determination, including the nitrogen fixation enzyme activity, ACC deaminase activeness, produced IAA the ability as well as solution potassium ability.The result indicated

7、 that,In these 20 fungi (1) strain K19, K44, K27, K43, K22, X10-6, J7, K35, the XK3 altogether 9 fungi have the strong nitrogen fixation enzyme activity; (2) strain X10-10 has the ACC deaminase ability to be strongest, is 3.157 mol/min; (3) strain HDK10, K35, J7, K37 produce the IAA ability to be st

8、rong; (4) K19, K27, K37, K43, in the K45 these 5 fungus fermentation fluid the fast-acting potassium content compares separately are more than 48.489%, 168.152%, 38.942%, 38.942% and 83.191%. Key words： Silicate bacteria of cotton ；Promotion；Cotton；Grows mechanism 塔里木大学毕业论文 2 引言 农作物生产不仅要求高产、稳产，而且要求品

9、质优良。长期以来，为了确保农产品的高产丰 收，人们大量使用化学肥料和农药，使得生态环境每况愈下，十分不利于农业的可持续发展。微 生物肥料由于具有增加土壤生物多样性、改善农产品品质、能够自我更新增殖和永续利用的特性， 其发展始终为人们所关注。微生物肥料是指应用于植物或土壤环境中有生物活性，起肥料效应的、 或以肥料方法施用的，以微生物活性生物体或其代谢产物为主要作用因子的生物制剂或肥料制品1。 微生物肥料种类繁多，按照微生物的作用机理可分为根瘤菌肥料、自生固氮菌肥料、解磷细菌肥 料、解钾细菌肥料、抗生菌肥料和复合微生物肥料2。但是不论如何分类，钾细菌都是一种不可 或缺的成分。 早在 1912 年，

10、K. Passik 就发现了一种芽抱杆菌，用它可以分解正长石等硅酸盐矿物和磷灰石， 1930 年，原苏联学者亚历山大洛夫从土壤中分离出一种细菌，能分解正长石和磷灰石而释放出磷 钾，称之为硅酸欲细菌，在我国又被称为钾细菌。 硅酸欲细菌是化能异养细菌，能利用葡萄糖、淀粉等多种碳源，在无氮培养基上生长很好， 表明它能固氮，每利用 1g 糖仅固定 1. 3mg 氮，其利用有机氮能力差。硅酸盐细菌是兼性好氧菌， 生长适宜温度为 25 -28 ,最适 pH 值为 7. 0-7. 2，低于 5. 0 或高于 8. 0 则受抑制。3 解钾细菌多是硅酸盐细菌，它能分解硅酸盐类矿物并释放出钾等元素供植物利用，同时

11、它也 有固氮、解磷功能。硅酸盐细菌是土壤中一类能分解硅酸盐类矿物，破坏其晶格结构，使矿物钾 转化成有效钾释放出来供植物生长的细菌4。它不仅能溶磷解钾，亦有固氮的作用5。目前发现的 解钾细菌种类主要有， 环状芽孢杆菌( Bacillus circulans) 6,7、胶质芽孢杆菌( B.mucilaginosus)8 和土壤芽孢杆菌( B.edaphicus)9 三个种的菌株。由于硅酸盐细菌的独特作用，已广泛应用于采矿、 冶金、微生物肥料、饲料工业上10。我国在硅酸盐细菌的生物学功能方面已进行了大量的工作， 尤其是在硅酸盐细菌作为生物肥料方面，但是对我国新疆不同连作棉田硅酸盐细菌的生理生化研 究

12、较少，由于这里特殊的地理环境，使硅酸盐细菌的生理生化特性有别于全国其他区域。 土壤中的硅酸盐很多，但它不溶于水，无法被植物利用，解钾菌的活化作用，可将其中的钾 活化而溶于水，极易被植物吸收。解钾菌可通过自身生命活动产生草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果 酸等多种有机酸，分解土壤中的含钾矿物，释放出钾和其它矿质元素，供植物吸收利用。需要指 出的是，不管是解磷菌还是解钾菌，它们在生命活动过程中都会产生多种植物激素（如吲哚乙酸、 生长素、赤霉素和细胞分裂素） ，促进作物生长。 土壤中钾矿物主要以稳定的铝硅酸盐状态存在,不能被作物直接吸收利用。而硅酸盐细菌是土 壤中一类特殊的革兰氏阴性芽孢杆菌,能分解岩石矿物

13、,释放难溶性的钾、磷等,改善土壤的供肥能 力,满足作物生长发育的需要。11因此,研究如何将这些土壤矿物中的钾释放出来,成为作物能吸收 利用的可给态钾,具有理论和实践意义。 1.材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品 由新疆塔里木盆地生物资源保护利用新疆生产建设兵团重点实验室提供的分离自塔里木盆地 不同棉田的 79 株钾细菌 1.1.2 主要仪器与设备 (1) LXJ264201 型离心机(北京医疗仪器修理厂) (2) HYA 恒温摇床(中国科学院武汉仪器厂) (3) LDZX-50KB 立式电热压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂) (4) HG30323 K 电热恒温培养箱(杭州汇尔仪器设

14、备有限公司) 塔里木大学毕业论文 3 (5) YXQ. SG41. 280 电热高压蒸汽消毒器(上海华岩仪器设备有限公司) (6) SHIMADZU) 10AVP 高效液相色谱仪(日本岛津公司） (7) HITACHIZ28000 原子吸收分光光度计（河南博金仪器有限公司） （8) SHIMADZU GC - 14B 气相色谱仪(日本岛津公司） 1.1.3 试剂与溶液 1.1.3.1 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨（NA）培养基：牛肉膏 5 g，蛋白胨 5 g，NaCl 5 g，pH=7.2-7.4。 （2）硅酸盐细菌分离培养基配方11：蔗糖 5.0 g，1%FeCl3 6 滴，Na2HPO4 2

15、.0 g，MgSO47H2O 0.5 g，CaCO3 0.1 g，土壤矿石 1.0 g，去离子水 1000 mL，琼脂 20 g，pH=7.5。土壤矿石：取耕层土加 20%HCl（土：HCl=1：10）煮沸 30min，蒸馏水洗至无 Cl-， 磨碎过 100 目筛。 （3）Ashby 培养基：葡萄糖 10.0 g，K2HPO4 0.02 g，MgSO4 0.2 g，NaCl 0.2 g，CaCO3 1.0 g，CaSO4 0.1 g， H2O 1000 mL，pH=7.0-7.2。 (4)LB 液体培养基 :蛋白胨 10 g，酵母膏 5 g，NaCl 10 g H2O 1000 mL，pH=7

16、.4。 (5)PDA 培养基：马铃薯（去皮） 200 g，葡萄糖 20 g，水 1000 mL 。 将马铃薯去皮切成小 块，与加水 1000 mL，煮沸 30 min，用双层纱布过滤，取滤液加糖，并加水补充至 1000 mL，自 然 pH。 （6）Fa培养液：蔗糖10.0 g，ACC 1.0 g，无机盐溶液1000 mL（注：无机盐溶液：KH2PO4 10%,MgSO47H2O 0.05%,CaCl22H2O 0.013%，FeSO47H2O 0.0013%，pH7.0）。 （7）DFa培养液：不加ACC，其它同Fa培养液。 （8） 解钾发酵液12：蔗糖 10 g；MgSO47H2O 0.5

17、g；(NH4)2SO4 0.2 g； NaCl 0.1 g；CaCO3 0.1 g； 玻璃粉 5.0 g；pH 7.2 7.5；蒸馏水 1.0 L。 1.1.3.2 所用的主要溶液 (1) 0. 5% 溴麝香酚兰(BTB)溶液 (2) 0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH:8.5 及 7.6) (3) 0.1%2,4-二硝基苯胼溶液 (4) 100 mmol/L -丁酮酸溶液 （5）比色液 PC：PC：FeCl3 ：7.9 molL H2SO4=12 g： 1 L S2：FeCl3 ：10.8 molL H2SO4=4.5g：l L 1.2 方法 1.2.1 对钾细菌进行重筛 将

18、已有的 79 株钾细菌接种至硅酸盐分离培养基平板上，选取其中生长活力旺盛的菌株进行其 它各项指标测定。 1.2.1.1 菌株活化 制备液体 NA 培养基分装于试管中（每支试管 5 mL）灭菌后用移液器从保存菌种的甘油管中 分别加入试管中，于恒温摇床上 28、150 r/min 条件下培养 24 h。 将菌液在硅酸盐分离培养基上进行划线，观察其生长活力。选取其中生长活力旺盛的菌株进 行固氮酶活性、产 ACC 脱氨酶活性、产 IAA 的能力、解钾能力以及对棉花枯黄萎病原菌的抗病 性的测定。 1.2.2 测定固氮酶活性 乙炔还原法:各试验按设计要求培养 48 h 后，将透气的硅胶塞换成不透气的橡胶塞

19、，从瓶内抽 出 2 mL 气体，再注入 2 mL 乙炔，使瓶内乙炔浓度达 10%左右，继续培养 48 h 后,测定乙烯生成 量。 塔里木大学毕业论文 4 将分离出来的钾细菌分别接种于装有 2 ml 半固体 Ashby 培养基的血清小瓶中(每种培养基 2 个重复) ，在 28-30下培养 24-48 h 后，将血清小瓶盖在无菌条件下换成橡胶塞,用无菌注射器抽 出 10%的气体，然后给每瓶注入 2 mL C2H2，再置培养箱中培养 24-48 h。从各培养瓶中取气样 10 L ，注入气相色谱仪 (GC)中，测定 C2H2, C2H4的生成情况。从气相色谱仪显示屏的 C2H2，C2H4峰值判断有无

20、C2H4的产生 13。 色谱条件用日本岛津公司的 GC-14B 气相色谱仪测定乙烯生成量。色谱条件为玻璃柱长 2 m ，内径 0. 4 cm ，填充柱 GDX403，柱温 50，检测器温度 200，进样器温度 110；气体流 量为 H2 72 mL/min；N2 43 mL/min；空气 50 mL/min，检测器为火焰离子发生器 (FID )。外标法 计算测定结果，以 nmol C2H4/mL 菌液表示固氮酶活性。根据下列公式计算固氮酶活性的大小14。 ARA（mmol/h）=(样品 C2H4 峰面积CC2H4标准 C2H4 进量样品气体总体积)/(标准 C2H4 峰面 积培养时间样品进样量

21、) CC2H2 = n/V = P(/RT) = 90. 005 kPa/(8. 314 kPaL-1mol - 1(273. 15 + 27) k) = 0. 036 molL- 1 1.2.3 测定产 ACC 酶活性： 1.2.3.1.标准曲线的制定 用0.1 mol/L PH 8.5 Tris-HCI配制100 mmol/L -丁酮酸，4保存，用前母液稀释至10 mmol/L, 取出200 L -丁酮酸稀释(0.1-1.5 mol/L)，分别加入300 L 2% 2,4-二硝基苯肼，混匀后于30 温育30 min，加入2 mL 2 mol/L NaOH显色，在540 nm处测定光吸收值，

22、以-丁酮酸浓度为横坐标， 吸光度值为纵坐标制成标准曲线15. 1.2.3.2.细胞悬液制备 菌株在DFa培养基中培养48 h后，4，8 000 r/min离心10 min收集菌体，去上清，加入5 mL 0.1 mol/L Tris-HCl(pH 7.6)，4 ，8 000 r/min离心10 min，弃上清，洗涤两次。用1 mL 0.1 mol/L Tris-HCl(pH 7.6)悬浮。转移到1.5 mL的离心管中，16 000 r/min离心5 min，去上清，用600 L 0.1 mol/L Tris-HCl(pH 8.5)重悬浮，加入30 L的甲苯，最高速振荡30s15. 1.2.3.3

23、.酶活测定 取200 L细胞悬液于1.5 mL离心管中，加入20 L 0.5 mol/L ACC，振荡混匀。于30保温15 min后，加入l mL 0.56 mol/L HCl，振荡混匀，室温16 000 r/min离心5 min。取l mL上清液，加入 800 L 0.56 mol/L HCl，混匀后，加入300 L 2,4-二硝基苯肼，混匀后于30保温30 min。然后用 2.0 mL 2 mol/L NaOH显色，于540 nm处测定光吸收值。通过标准曲线计算出-丁酮酸的浓度15。 1.2.4 测定产植物激素 IAA 的能力： 采用 Salkowski 比色法16测定分离物产生植物生长激

24、素类物质 IAA 的能力。比色液的组成 S2：FeCl3 4.5 g，10.8 mol/L H2S04 l L，测定范围 5-200 g/mL，一般超过 100 g/mL 就应该稀 释 ；PC：FeC13 12 g，7.9 mol/L H2SO4 1 L，测定范围 0.3-20 g/mL。标准曲线采用纯的 IAA 制 作16。 菌悬液的制备，在盛有 10 mL LB 液体培养基的试管中，接种供试菌株。28下，置于轨道 摇床上培养 2-3 d。用分光光度计测定菌株悬浮液的 OD 值，并用无菌水调节 OD 值为 0.6(波长 600 nm)。 在液体发酵 48 h 分别取发酵液，在 10 000

25、r/min 离心 10 min，取上清液 3 mL 再加比色液 3 mL 进行显色，在黑暗中静止 30 min，取出立即用 TU-1810 型分光光度计测定，波长是 530 nm17。 1.2.4.1.标准曲线的制作 配制2组3-IAA 溶液，浓度依次为2. 5, 5. 0,7. 5, 10. 0, 12. 5,15.0,17.5 mg/L和25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 mg / L，分别取上述IAA溶液4 mL，在第1组中加入PC 比色液4 mL，第2 组中加入S2 比 色液4 mL 在黑暗中静置0.5 h，取出立即用分光光度计测定OD530值，以加了比色液的

26、蒸馏水调零， 重复3 次，获得数据制作标准曲线。 塔里木大学毕业论文 5 1.2.4.2.IAA定量测定 菌悬液的制备，在盛有10 mL LB 液体培养基的试管中，接种供试菌株，28 下，置于轨道 摇床上培养2- 3 d。用分光光度计测定菌株悬浮液的OD值，并用无菌水调节OD值为0.6(波长600 nm) 。取发酵液，在10 000 r/ min 离心10 min，取上清液1 mL 再加比色液1 mL 进行显色，并根 据PC 比色液和S2 比色液的测定范围对结果进行选择，在黑暗中静止30 min，取出立即用TU-1810 紫外可见分光光度计测定，波长是530 nm。 1.2.5.解钾的能力测定

27、： 挑取一环活化好的斜面菌种接入50 mL种子培养液中，150 r/min摇床,适宜温度下培养到对数 期，菌体含量不少于2108 cfu/mL。500 mL三角瓶加入解钾发酵液95 mL，高压灭菌备用。接入种 子液5 mL，同时做加入等量灭活种子液的发酵液为对照，在28、150 r/min条件下培养72 h11。 发酵液的处理，将全部发酵液转入蒸发皿中，在水浴锅中浓缩至10 mL左右，加2.0 mL H2O2 溶液，继续蒸发，并不断搅动，反复加20% H2O2溶液几次至粘性物质完全消化。3 500 r/min离心 10 min，将上清液收集在50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容,测定溶液中速效钾。

28、上清液中钾的测定 取上清液离心沉淀多糖、菌体蛋白和未被溶解的土壤矿石18。 用火焰光度法测定钾，解钾量为扣除不接种对照的值11。 2 结果与分析 2.1 对钾细菌进行重筛 经过重筛得到了 20 株生长良好的菌株作为进一步测定的对象。部分菌株的生长状况如图 1 图 1 硅酸盐培养基分离筛选到的钾细菌 图中 K39 为在硅酸盐分离培养基上生长活性最差的一种菌种， 可将其视为空白对照（右） 左边为筛选的到的生长活性较强的菌种 塔里木大学毕业论文 6 通过筛选得到了 K19、K20、K22、K25、K27、K35、K37、K43、K44、K45、席 K3、席 K4 、席 K5、席 10-6、席 10-

29、9、席 10-10、J7、红袋 K10、红袋 K16、红袋 11 等 20 株钾细菌。 2.2 固氮酶活性 将气相色谱仪所得数据换算为固氮酶活性，再用用 DPS 统计分析软件进行单因素 方差分析和 LSD 法多重比较检验得到表 1。 表 1： 固氮菌酶活性的测定 菌株编号均值标准误差 K191.9710.137aA K44 1.5810.024abAB K27 1.5390.475abABC K43 1.5190.292abABCD K22 1.4200.224abcABCDE 席 10-6 1.4090.190abcABCDE J7 1.3770.472abcABCDE K35 1.2620

30、.120abcdeABCDEF 席 K3 1.2500.160bcdeABCDEF CK 1.0620.144bcdefABCDEF 席 10-9 0.9600.372bcdefgBCDEF K25 0.9530.046bcdefgBCDEF K37 0.9470.027bcdefgBCDEF 席 10-10 0.8950.176bcdefgBCDEF K45 0.7130.518cdefgBCDEF K20 0.6080.113defgCDEF 红袋 K10 0.5560.277efgDEF 席 K4 0.5550.070efgDEF 红袋 11 0.5010.067fgEF 席 K5 0.

31、4630.159fgEF 红袋 K160.3070.016gF 注：小写字母完全不同表示在 5%水平显著；大写字母完全不同表示在 1%水平不同。 （1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其 P 值0.01，样本差异极显著这表 明供试菌株的固氮酶活性差异极显著。 （2）表中席 10-9、K25、K37、席 10-10、K45、K20、红袋 K10、席 K4、红袋 11、席 K5、 红袋 K16 等 11 株菌的 ARA 值小于对照说明其不具有固氮酶活性。 （3）菌株 K19、K44、K27、K43、K22、席 10-6、J7、K35、席 K3 等 9 株菌具有较强的固 氮酶活性。其中 K19

32、固氮酶活性最高，且与其他菌株差异极显著。 2.3 测定产 ACC 酶活性： 2.3.1 标准曲线： 测得 -丁酮酸吸光度标准曲线如图 2： 塔里木大学毕业论文 7 2.3.2 ACC 脱氨酶活性 将在 TU-1810 紫外可见分光光度计上策得数据换算为 ACC 脱氨酶活性，再用用 DPS 统计分析软件进行单因素方差分析和 LSD 法多重比较检验得到表 2。 表 2：ACC 脱氨酶活性 菌株编号平均值标准误差 席 10-103.1570.008aA J70.8440.035bB 席 K30.6400.018bcBC K440.5950.052bcdBCD 席 10-90.5350.036bcde

33、BCDE 席 K40.5170.020cdeBCDE 席 K50.4840.027cdefBCDE 席 10-60.4200.009cdefgBCDE K220.3800.004cdefgCDE K200.3780.021cdefgCDE 红袋 110.3450.142cdefgCDE 红袋 K160.3260.005cdefgCDE 红袋 K100.3040.095defgCDE K270.3030.036defgCDE K370.2840.091defgCDE K430.2780.277defgCDE K250.2210.332efgCDE K350.1970.029fgDE K190.1

34、810.002fgDE K450.1100.020gE 注：小写字母完全不同表示差异显著；大写字母完全不同表示差异极显著。 图2：-丁酮酸吸光度标准曲线 塔里木大学毕业论文 8 （1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其 P 值0.01，样本差异极显著这 表明供试菌株的产 ACC 脱氨酶活性差异极显著。 （2）菌株席 10-10 产生 ACC 脱氨酶的能力最强，且与其他供试菌株差异极显著。 2.4 测定产植物激素 IAA 的能力： 2.4.1 标准曲线： 测得 IAA 在不同显色液下的吸光度曲线如图（3、4）： 图 3： 显色液为 PC 时的 IAA 吸光度标准曲线 PC：PC：FeCl3

35、：7.9 molL H2SO4=12 g： 1 L 图4： 显色液为S2时的IAA吸光度标准曲线 S2：FeCl3 ：10.8 molL H2SO4=4.5g：l L 塔里木大学毕业论文 9 2.4.2 测得的发酵液中 IAA 的浓度 将在 TU-1810 紫外可见分光光度计上策得数据换算为浓度，再用用 DPS 统计分 析 软件进行单因素方差分析和 LSD 法多重比较检验得到表 3。 表 3： IAA 浓度 菌株编号均值标准误差 红袋 K10 7.8590.353aA K35 5.3590.326bB J7 3.8880.147cC K37 3.8000.059cC K19 2.6530.02

36、9dCD K22 2.5940.294dCD 红袋 K16 1.9180.206deDE K25 1.5941.206efDEF K27 1.5360.030efDEF 红袋 11 1.1240.030efgEFG K20 0.9480.326fghEFG 席 10-10 0.8300.206fghEFG 席 K3 0.6830.118fghEFG K43 0.4470.059ghFG 席 K4 0.1830.089ghG 席 K5 0.1830.089ghG K44 0.1830.030ghG K45 0.1530.000hG 席 10-9 0.0000.000hG 席 10-6 0.000

37、0.000hG 注：小写字母完全不同表示差异显著；大写字母完全不同表示差异极显著。 （1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其 P 值0.01，样本差异极显著这表 明供试菌株的产 IAA 能力差异极显著。 (2)菌株红袋 K10、K35 的菌液分别与其他供试菌株的菌液中 IAA 浓度差异极显著。 (3)菌株J7、K37的菌液与红袋K16、K25、K27、红袋11、K20、席10-10、席K3、K43、席 K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等14株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。 （4）菌株K19、K22的菌液与红袋11、K20、席10-10、席K3、K43、席K4、席 K5

38、、K44、K45、席10-9、席10-6等11株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。 (5)菌株红袋K16的菌液与K43、席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等7株菌的菌液中 IAA浓度差异极显著。 (6)菌株K25、K27的菌液与席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等6株菌的菌液中IAA浓 度差异极显著。 (7)菌株红袋11的菌液与K45、席10-9、席10-6等3株菌的菌液中IAA浓度差异显著。 塔里木大学毕业论文 10 2.5 解钾能力测定： 表4：钾细菌解甲能力的测定 菌株号 速效钾含量（g/ml） 速效钾含量增加百分比% K194.14748.489

39、K277.488168.152 K373.88038.942 K433.88038.942 K455.11683.191 CK2.793 由上表可以看出 K19、K27、K37、K43、K45 这 5 株菌的发酵液中速效钾含量分别比对照多 出 48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和 83.191%。 3结论与讨论： 3.1.固氮酶活性： （1）席 10-9、K25、K37、席 10-10、K45、K20、红袋 K10、席 K4、红袋 11、席 K5、红袋 K16 等 11 株菌的 ARA 值小于对照说明其不具有固氮酶活性。 （2）菌株 K19、K44、K27、K43

40、、K22、席 10-6、J7、K35、席 K3 等 9 株菌具有较强的固 氮酶活性。其中 K19 固氮酶活性最高，且与其他菌株差异极显著。 3.2.ACC 酶活性： 菌株席 10-10 产生 ACC 脱氨酶的能力最强，且与其他供试菌株差异极显著。 3.3.产 IAA 能力： （1）菌株K45的菌液与K20、席10-10、席K3、K43、席K4、席K5、K44、席10-9、席10-6等9 株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。 （2）红袋K10、K35、J7、K37等4株菌的菌液与K25、K27、红袋11、K20、席10-10、席 K3、K43、席K4、席K5、K44、席10-9、席10-6等12株

41、菌的菌液中IAA浓度差异显著。 3.4.解甲能力： K19、K27、K37、K43、K45 这 5 株菌的发酵液中速效钾含量分别比对照多出 48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和 83.191%。 参考文献： 1 葛城.微生物肥料的生产应用及发展.北京:中国农业科技出版社,1996. 2 陈华癸.土壤微生物学.上海科学技术出版社,1981. 3 蒋先军，黄昭贤，彭盛德，杨雪梅.硅酸盐细菌的研究现状及展望J.世界农业,1998.5:28-31 4 蒋宝贵，赵斌. 解磷解钾自生固氮菌的分离筛选及鉴定. 华中农业大学学报,2005.2（1）：43- 48. 5 李元芳.硅

42、酸盐细菌肥料的特性和作用J.土壤肥料,1994.2:48-49. 6 李凤汀，郝正然，杨则瑗，等.硅酸盐细菌 HM8841 菌株解钾作用的研究.微生物学报, 1997，1:79-81. 7 Zahra M K, Monib M, Abdel-A1 S I, et al.Significance of soil inoculation with silicate 塔里木大学毕业论文 11 bacteria.Zentralblatt for Mikrobiologie,1984,139(5):349-357. 8 Avankyan Z A,Pivovarova T A, Karavaiko G I

43、. Properties of a new species, Bacillus mucilaginosus. Mikrobioloigiya , 1986,55:477-482. 9 Shelobolina E S. Avakyan Z A, Bulygina E S, et al.Description of a new species of mucilaginosus bacteria,Bacillus edaphicus sp. nov. and confirmation the taxonomic status of Bacillus mucilaginosus.Mikrobiolog

44、iya,1997,66:813-8221997.15(1):60-66. 10 吴小琴.硅酸盐细菌的应用概况J.江西科学, 1997.15(1):60-66. 11 席琳乔,宋爱民,龚明福,张利莉. 棉花根际硅酸盐细菌解钾机理的初步研究J. 西北农业学报, 2009,18(3):309-314. 12 中华人民共和国农业行业标准, NY 882-2004 硅酸盐细菌菌种, 2005.01.04 发布,2005.02.01 实 施 13 王静芳，张莉莉.棉花根际促生固氮菌和分泌生长激素能力的测定J.干旱区研究,2008.9(5)： 690-694 . 14 杨海莲,孙晓璐,宋未,等.水稻内生联合

45、固氮细菌的筛选、鉴定及其分布特性J.植物学报,1999, 41 (9) : 927 - 931. 15 刘深,赵宇华，傅庆林.盐胁迫对茄苗的影响及利用 ACC 脱氨酶活性菌株 DW1 提高茄苗的耐 盐性E.浙江大学硕士论文, 2007.5. 16 吴瑛，席琳乔. 燕麦根际固氮菌分泌 IAA 的动态变化研究J.安徽农业科学,2007，35(15)： 4424-4425，4441. 17 ERIC GHCKMANN，YVES DESSAUXA critical exa mination of the specificity of the salkowski reagent for indolic

46、compounds produced by phytopathogenic bacteriaJApplied And Environmental Micmbiology，1995，2：793-796. 18 盛下放,黄为一,殷永娴.硅酸盐菌剂的应用效果及其解钾作用的初步研究J .南京农业大学学 报,2000, 23(1)： 43-46. 塔里木大学毕业论文 12 致 谢 此论文是在导师龚明福副教授的精心指导下完成的。导师博大的胸怀、渊博的学 识、敏锐开阔的思维、严谨的治学态度、孜孜不倦的工作热情，对科学问题的独到见 解，对事业不懈的追求，对科学的忘我投入，是学生的骄傲和永远学习的榜样，并将 使

47、我终生受益。在本人课题的开展过程中，导师一直投入很大的关注和帮助，不仅对 我授之以鱼，更注重授之以渔，帮助我寻求科学的研究方法，指导我在课题研究过程 中解决一个又一个的难题。在此，谨致以最衷心的感谢和崇高的敬意！ 试验过程中得到了关统伟老师、徐彪老师、孙红专老师等和韩松、张守村、冯姝、 黄晓燕等学长的无私帮助和支持；王东东、蔡光辉、张占利、牟雪英、沈玉婷、张成 容等同学协助完成部分工作。舍友铁鑫、谢飞、李怀志在生活上给了我很大的帮助和 鼓励。谨此向他们致以真诚的感谢! 除此之外，在实验过程中还得到了其它许多老师和同学的帮助，在此虽未一一列 出他们的名字，但对他们给予的一切帮助，我将永远铭记于心。向他们表示衷心的感 谢！ 感谢我的父母和家人长期以来对我的培养、关心、鼓励和支持，是他们无私的奉 献和爱才使我能够顺利完成学业！