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1、枯草芽孢杆菌微胶囊的制备及其稳定性的研究微胶囊技术是指以天然或合成的高分子材料作为囊壁，通过化学法、物理法或物理化学法将固体或液体材料包囊成直径为1-5000的微小囊状物的技术。微胶囊的优势在于形成微胶囊时，囊心被包覆而与外界环境隔离，它的性质几乎能毫无影响的被保留下来，微囊的囊膜具有透膜或半透膜的特性，因此其所包含的囊心物质可借压力、pH值、酶解、温度或提取等一系列方法完全释放出来。微胶囊技术的作用微胶囊之所以被广泛地应用于工业品，是由于通过对物质进行胶囊化可以实现许多目的。无论物质具有亲水性还是具有亲油性，大多数气体、液体、固体、甚至具有生命活性的细菌、酶等均可以被包囊。广义地说，微胶囊具
2、有改善和提高物质外观及其性质的能力。上述功能使得微胶囊化成为许多工业领域中的一种有效的商品化方法，具体可主要分为7个方面。1、改善物质的物理性质改变物质的状态:将液态物质或气态物质微胶囊化后，可得到微细的粉状物质，在外形及使用上具有固体特征，但其内部仍然是液体或气体，因而仍具有原来液体或气体的性质。改变物质的质量和体积：物质的表观密度经微胶囊化后可以变小，也可制成含有空气或空心的微胶囊而使体积增大。改变物质的性能：通过微胶囊化可以改变物质对所处介质的亲和性，常用的方法是将疏水性药物用亲水性壁材微胶囊化，使其变得亲水。2、控制释放在可以人为控制的条件下，微胶囊中活性组分的释放可以采用立即释放、延
3、时释放等各种释放方式。缓释：将一些药物或活性物质制成微胶囊后，不但方便口服或注射，更重要的是能使药物缓慢释放，使药效持久，从而可减少服用次数和服用量，减少生理副作用。3、隔离活性成分微胶囊化后囊壁可以将囊内外物质隔离，故能阻止活性物质之间发生化学反应。在医药中，可将药物与其他敏感物质隔离，如红霉素遇酸易变质，微胶囊化后可在一定时间内避免与胃液接触，从而使其保持活性。4、改善稳定性易挥发、易氧化、光敏性和热敏性的物质经微胶囊化后，可避免直接与光、热或空气接触，抑制其挥发，氧化，降低光(热)敏性。有些物质很容易受氧气、温度、水分、紫外等各种环境因素的影响，通过微囊化，使囊心物与外界环境相隔离。在食
4、品、化妆品和洗涤剂行业中，经常将香料、香精微胶囊化，以降低其挥发性，保持长久散发香气。5、降低对健康的危害、减少毒副作用硫酸亚铁、阿司匹林等药物包囊后可以通过控制向消化系统得释放速度来减轻肠胃副作用。长期服用氨节青霉素对人体有严重的副作用，微胶囊化可弥补这一缺陷；抗癌药物化疗剂一般用甲基乙二醛，但对人体毒性大，微胶囊化后可以迅速从体内排出，降低副作用。对于制药工业来说，就可以采用微胶囊技术来制造靶制剂，达到定向释放的效果。6、屏蔽味道和气味微胶囊化可以用于掩饰某些化合物的令人不愉快地味道。抗生素磺胺类药物苦味太大，微胶囊化可掩盖其苦味。氨基酸有维持机体生长发育的氨平衡功能，能治疗肝病及乙基砷、
5、苯中毒，但其奇特的臭味使人难以接受，微胶囊化后，就可掩盖其臭味将有色泽和气味的中草药液微胶囊化后，可以掩蔽服用时的不良味道。7、用于特殊目的的不相容物质的分离微胶囊化后可以隔离各种成分，阻止活性成分之间的反应。故可以将两者一起保存。但是当微胶囊破碎以后两者就能进行反应。可以达到某些特殊的目的。菌体微胶囊的特点对于制备菌体微胶囊，最主要的就是防止外界不良条件对菌体的破坏以提高菌体的稳定性，提高菌体的保存时间。一些菌体，在环境中受到不良环境的影响（紫外线、pH等）其存活率很低。而通过微胶囊技术可以将菌体与不良环境隔离，达到提高菌体稳定性的作用。例如胃中的pH只有1.8左右，对枯草芽孢杆菌活性具有比
6、较大的破坏。而制成微胶囊可以减少胃酸与菌体的接触，提高菌体的稳定性 。另外通过微胶囊技术将菌体包埋，使得菌体某些不良的气味难以释放到外界，而达到容易口服等的效果。我就是做枯草芽孢杆菌微胶囊的，做死我了！微胶囊的制备方法 介绍一下微胶囊制备方法通常根据其性质、囊壁形成的机制和成囊条件分为物理法、物理化学法、化学法等3大类。在每大类方法中依据不同的操作工艺又可进一步分成若干种制备方法。各种制备方法都具有各自的特点、适用范围和适用对象，现将各种微胶囊制备方法归纳如表1所示。物理化学法的共同特点是改变条件使溶解状态的成膜材料从溶液中聚沉出来，并将囊心包覆形成微胶囊。即通过改变温度、pH值、加入电解质等
7、，使溶解状态的成膜材料从溶液中聚沉，并将芯材包覆形成微胶囊。凝聚法又称相分离法，根据芯材的水溶性不同可分为水相分离法;依据凝聚机理的不同又分为单凝聚法和复凝聚法。化学方法和物理化学方法一般通过反应釜即可进行，因此应用较多。见表2。微胶囊芯材芯材是微胶囊中起主要功能的物质。它可以是单一的固体、液体或气体，也可以是固一液、液一液、固一固或气一液混合物。根据不同的行业，不同的用途，芯材有不同的选择。它可以是化工产品、医药用品，也可以是食品添加剂或是食品的天然组份。现己用作芯材的物质有：胶粘剂、催化剂、除垢剂、增塑剂、稳定剂、油墨、涂料、染料、颜料、溶剂、液晶、金属单体、油脂、香料等。微生物作为一类特
8、殊的活性物质，也开始广泛用于芯材，发挥其特有的功效。表3为常用的微胶囊的芯材。壁材（囊材）制作微胶囊可用的壁材很多，一般为天然高分子材料或有机合成材料，可以是亲水性的或疏水性的高分子材料，也可以是无机化合物。这些材料的最大特点是具有一定的成膜性，且在常温下比较稳定。表4为常用的壁材。天然高分子材料是最常用的囊材与载体材料，因其稳定、无毒、成膜性或成球性较好。目前在饲料行业应用较多的有明胶、海藻酸、氢化植物油等。(1)明胶：明胶是氨基酸与肤交联形成的直链聚合物，通常平均相对分子质量在1500-2500之间。可生物降解，几乎无抗原性，用作微囊的用量为20-100g/L，用作微球的量可达200g/L
9、以上。(2)海藻酸盐：系多糖化合物，常用稀碱从褐藻中提取而得。海藻酸钠可溶于不同温度的水中，不溶于乙醇、乙醚及其它有机溶剂；不同相对分子质量的粘度有差异。可与甲壳素或聚赖氨酸合用作复合材料。因海藻酸钙不溶于水，故海藻酸钠可用CaCl2固化成微胶囊。(3)蛋白类：常用作载体材料的有白蛋白(如人血清白蛋白、小牛血清白蛋白)、玉米蛋白(玉米肮)、鸡蛋白、小牛酪蛋白等，可生物降解，无明显的抗原性，常采用加热固化或化学交联剂(如甲醛、戊二醛或丁二烯)固化，通常用量在300g/L以上。(4)氢化植物油：以植物来源的油，也包括从鱼和其它动物来源的油经过精制、漂白、氢化脱色和除臭喷雾干燥得。在药剂中起润滑、缓
10、释作用。半合成高分子多系纤维素衍生物，如梭甲基纤维素、邻苯二甲酸纤维素等。其特点是毒性小、粘度大、成盐后溶解度增大；由于易水解，故不宜高温处理，需临用时现配。现在市面上用的较多的是乙基纤维素。合成高分子材料常用的有两类，可生物降解和不可生物降解的。近年来，可生物降解并可生物吸收的材料受到普遍的重视并得到广泛的应用。如聚氨基酸、聚乳酸、聚丙烯酸树脂等。在选择壁材时还要考虑壁材本身的性能，如渗透性、稳定性、机械强度、溶解性、可聚合性、电性能、吸湿性及成膜性等，对于生物活性物质的芯材，还要着重考虑壁材的毒性，与芯材的相容性。此外，微胶囊的制备，以天然高分子材料作壁材制备微胶囊的很多，这类壁材具有无毒
11、、成膜性或成球性较好、免疫原性低、生物相容性好、可降解且产物无毒副作用等优点，其资源丰富、制备简单、价格便宜，极具开发潜力，因此，它是目前最常用的微胶囊制备材料。微生物微胶囊 介绍微生物微胶囊 介绍从20世纪80年代开始就有研究者进行微生物细菌微胶囊的探索，研究较多的细菌有双歧杆菌、乳酸菌、苏云金杆菌、白僵菌等。目前，国内外已经有多种微胶囊化技术应用在微生物领域，主要包括:(1)锐孔一凝固浴法革兰氏阴性菌微胶囊制备技术的研究国外利用锐孔一凝固浴法制备，最早主要是海藻酸钙的单层包埋，逐渐发展成为多层包埋。(2)流化床包膜法将菌体浓缩液或经冷冻干燥后的干菌粉通过挤压制成球状干颗粒，在流化床上用肠溶
12、性材料(海藻酸钠等)喷雾涂膜，产品室温贮藏时涂膜的比未涂膜的存活率高40倍，在低pH下贮藏时涂膜的存活率也较高。(3)熔化分散冷凝法例如将双歧杆菌菌粉分散于融点高于体温的硬化油中，搅拌均匀后喷雾，能够得到一定粒径，且菌体较稳定的微胶囊。(4)乳化交联法例如将双歧杆菌冻干粉与壳聚糖溶液混匀，并悬浮于大豆色拉油中(以SPan85为乳化剂)，乳化后加入对苯二甲酞氯交联反应，制备了双歧杆菌微胶囊。(6)喷雾干燥法喷雾干燥是食品工业应用最为悠久、最为广泛，也是成本极为廉价的一种微胶囊方法。不少研究也尝试了应用于益生菌的微胶囊化。例如在魏华等喷雾干燥微胶囊化保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的研究中，喷雾干燥的同
13、时形成微胶囊有利于提高菌体在喷雾干燥过程中的性，从而提高活菌存活率，达到78%；而且喷雾干燥的微胶囊产品活菌数随保藏时降的速度缓慢，活菌保存期显著延长。(7)吸附法以淀粉和碳酸钙粉末吸附微囊化的双歧杆菌在干燥过程中死亡率明显下降，在室温条件下保存其存活率比未微囊化的有较大提高。(8)原位聚合法袁青梅等以蜜胺树脂作为囊壁材料，使用原位聚合法对生物农药阿维菌素进行制备微胶囊制剂.结果表明蜜胺树脂是较好的生物农药用微胶囊缓释剂型的囊壁其制备工艺简单，具有良好的的外观形貌、粒径大小分布、稳定性、悬浮性等，包封83.24%，与未经包囊的阿维菌素相比具有良好的缓释性能。(9)双层包埋法(复凝聚法)陈健凯等
14、采用双层包埋法，以牛奶蛋白为内层包埋剂，卡拉胶和刺槐豆胶为包埋剂对嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌进行双层包埋。乳酸菌在pH=2.1胃酸环境的存包埋嗜酸乳杆菌为87%，包埋干酪乳杆菌为90%，未包埋乳杆菌不耐强酸，几乎全部死亡。包埋乳酸菌加入到酸奶中，在储藏期的第9天，包埋嗜酸乳杆菌存活率为57%，包埋干酪乳杆菌存活率为50%，而是热链球菌存活率为3.2%，保加利亚乳杆菌存1.3%。显示出包埋后的乳酸菌稳定的生物活性。单凝聚法制备微胶囊?以明胶作为囊材称取一定量的明胶用去离子水泡胀，并于50水浴下溶解，将0.1g枯草芽孢杆菌固体粉末加入到明胶水溶液中，搅拌形成乳化分散体系。保持体系温度为50,用10%醋
15、酸溶液调节体系的pH为3.5-3.8，然后向体系缓缓加入20%浓度的硫酸钠溶液26。?以壳聚糖为囊材吸取1ml的乳化剂吐温80于含有100ml去离子水的烧杯中，温度保持在50。称取一定质量的壳聚糖加入上述的烧杯中，用10%的乙酸溶液溶解配置成溶液，加入0.1g枯草芽孢杆菌固体粉末混合均匀27。?以海藻酸钠为囊材吸取1ml的乳化剂吐温80于有100ml去离子水的烧杯中，温度保持在60。称取一定质量的海藻酸钠加入上述烧杯中配制成溶液，加入0.1g枯草芽孢杆菌固体粉末混合均匀 。以黄原胶为囊材吸取1ml乳化剂吐温80到烧杯中，加入100ml去离子水，温度保持在60。称取一定质量的黄原胶加入烧杯中配置
16、成溶液，加入0.1g枯草芽孢杆菌粉末混合均匀。以琼脂作为囊材配置不同浓度的琼脂溶液，待冷却到50后加入0.1g菌体粉末/芽孢混匀。分别用锐孔法、喷雾法制备微胶囊。锐孔法：将混合液用不同孔径大小的针头滴入到冰水中。喷雾法：吸取混合液，将其喷入冰水中。复凝聚法制备微胶囊?壳聚糖与黄原胶组合配置不同浓度的壳聚糖溶液和黄原胶溶液，等体积混合均匀后加入0.1g枯草芽孢杆菌固体粉末混合均匀，并分别以锐孔法和喷雾法制备微胶囊。以Na2SO4作为固定剂。?壳聚糖与海藻酸钠组合配置不同浓度的壳聚糖溶液和海藻酸钠溶液，等体积混合后加入0.1g枯草芽孢杆菌粉末，以CaCl2为固化剂，并分别以锐孔法和喷雾法来制备微胶
17、囊。 ?海藻酸钠与明胶组合配置不同浓度的海藻酸钠和明胶溶液，等体积混合均匀后加入0.1g枯草芽孢杆菌粉末。以CaCl2为固化剂，并分别以锐孔法和喷雾法来制备微胶囊。明胶与黄原胶、海藻酸钠组合配置不同浓度的黄原胶、明胶、海藻酸钠溶液，将黄原胶与明胶等体积混合后加入等体积的海藻酸钠。以CaCl2为固化剂，并分别以锐孔法和喷雾法来制备微胶囊。微胶囊品质检验方法（我的方法）包埋率=a-b/a100% 式中： a制备微胶囊前溶液中细菌的浓度b微胶囊制备后所测得固定剂中菌体的浓度。微胶囊直径测定方法：在光学显微镜下，取微胶囊用显微测微尺随机测定20颗微胶囊粒径，并取其平均值即为粒径( 单位为µ
18、m)。若微胶囊的粒径较大，则直接用精度为1mm的直尺测量，随机测取20颗微胶囊的直径，并取其平均值( 单位为mm)。活菌数测定方法：分别测定微胶囊化枯草芽孢杆菌活菌数和未经微胶囊化的活菌数。测定微胶囊化的活菌数：称取0.1g微胶囊粉碎，置于10ml生理盐水中。稀释一定的倍数后涂平板测定活菌数，并做3次平行试验。测定未微胶囊化的活菌数：在平板上取菌，并置于10ml生理盐水中。稀释一定的倍数后涂平板测定活菌数，并做3次平行试验取平均值。 研究了采用锐孔法和喷雾法制备微胶囊枯草芽孢杆菌微胶囊。分别利用明胶、壳聚糖、海藻酸钠、黄原胶、琼脂等制备单凝聚以及复凝聚微胶囊。并从微胶囊的制备方法、包埋率、机械
19、性能、微胶囊稳定性以及菌体稳定性等几个方面进行了研究分析。并优化促芽孢培养基，促进枯草芽孢杆菌产芽孢，利用抗逆性能更好的芽孢最为微胶囊的芯材，以提高微胶囊的菌体稳定性。通过实验分析得到以下结论：1、通过枯草芽孢杆菌在几种培养基中的生长情况，以及利用孔雀石绿对枯草芽孢杆菌进行芽孢染色观察得到培养基：牛肉膏12g；氯化钠5g；水 1000ml；MnSO4 0.5g；pH7.0-7.2，既能够使枯草芽孢杆菌迅速生长又能促进枯草芽孢杆菌产芽孢。在12小时就有75%的菌体产了芽孢。2、分别利用枯草芽孢杆菌菌体和芽孢作为微胶囊的芯材来制备微胶囊，实验得到选择枯草芽孢杆菌芽孢作为制备微胶囊的芯材有利于提高微
20、胶囊中菌体的稳定性，延长保存时间。3、实验分别利用了锐孔法和喷雾法制备枯草芽孢杆菌微胶囊，在现有的条件以及技术情况下，利用锐孔法制备得到的微胶囊粒径较大（1500-5000µm）而利用喷雾法制备得到的微胶囊的粒径在3.0-60µm之间。在包埋率上面锐孔法制备得到的微胶囊比喷雾法制备得到的微胶囊包埋率要高。4、通过实验分析微胶囊的机械性能、包埋率、稳定性以及菌体稳定性等性能，得到：?2.0%壳聚糖?2.5%壳聚糖?2.0%壳聚糖+0.5%黄原胶，这三组的综合性能最佳。5、实验分析经过微胶囊化的枯草芽孢杆菌（芽孢）和未经微胶囊化的枯草芽孢杆菌的稳定性，得到经过微胶囊化的菌体在保存20天后菌体平均存活率在75%以上，而未经微胶囊化的菌体在相同条件下保存20天后存活率只有9.36%