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1、目录摘要：2关键字：2前言：21.1来源：21.2性状：2简述：3实验部分：33.1药典规定：33.1.1、对照品溶液的制备：33.1.2、供试品溶液的制备：33.1.3、测定法：33.2牛蒡苷43.3检测的关键点43.4药材的前处理43.4.1.药材粉碎过筛后取样的对比43.4.2.超声功率及取样的对比43.4.3.对照品溶液比对53.4.4供试品溶液的制备53.5测定条件63.6检测结果63.7数据处理及分析83.7.1.数据处理83.7.2.结果分析8结论和讨论10致谢10参考文献：10牛蒡子含量检测技术攻关 摘要：牛蒡子始载于名医别录,名曰恶实,列为中品。本草图经始称牛蒡子,别名大力子
2、。现代历版中国药典均收载。目前,以东北三省产量最大,称作“关大力”。另有浙江桐乡产者质佳,称为“杜大力”。其性辛、苦,寒,归肺、胃经。2013年11月30日来样牛蒡子（亳州 永刚），样品批号1-120B-130504-10M，经质检科精密仪器组检验含牛蒡苷为5.9%。此样同时送湖南省药品检验所检验，含量测定项下检验结果为9.6%。两次检测结果偏差为33.7%，远远高于规定要求。由于牛蒡苷为中成药银翘解毒丸（浓缩蜜丸）要求检测项目，因此需对牛蒡子牛蒡苷含量检验方法进行分析。关键字：牛蒡子；牛蒡苷；银翘解毒丸；工艺投料。前言：牛蒡子始载于名医别录,名曰恶实,列为中品。本草图经始称牛蒡子,别名大力子
3、。现代历版中国药典均收载。目前,以东北三省产量最大,称作“关大力”。另有浙江桐乡产者质佳,称为“杜大力”。其性辛、苦,寒,归肺、胃经。1.1来源：本品为菊科植物牛蒡Arctium lappa的干燥成熟果实。1.2性状：秋季果实成熟时采收果序，晒干，打下果实，除去杂质，再晒干。本品呈长倒卵形，略扁，微弯曲，长57mm，宽23mm。表面灰褐色，带紫黑色斑点，有数条纵棱，通常中间12条较明显。顶端钝圆，稍宽，顶面有圆环，中间具点状花柱残迹；基部略窄，着生面色较淡。果皮较硬，子叶2，淡黄白色，富油性。气微，味苦后微辛而稍麻舌。简述：牛蒡子2013年11月30日送检样，进厂编号为1-120B-13050
4、4-10M，经检验，牛蒡苷含量为5.9%。符合法定标准（5.0%），但达不到内控标准6.7%。同时根据对方（亳州永刚）质检报告，牛蒡苷检测结果为7%以上，双方检测结果差异较大。为了查清原因，精密仪器组再次从药材的取样、粉碎到色谱图的分离等各个环节进行重新分析，结果未发现任何异常。取同一批次样品送湖南省药品检验所进行检验，其检验结果为9.6%，结果差异更大。为了彻底查清牛蒡子中牛蒡苷含量检测结果的差异，特进行相关实验进行全面分析。实验部分：3.1药典规定：2010版中国药典规定牛蒡子按照高效液相色谱法（附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以甲醇-水(1：1.1
5、)为流动相检测波长为280nm理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于15003.1.1、对照品溶液的制备： 取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。3.1.2、供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理(功率150W，频率20kHz)20分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.1.3、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。3.2牛蒡苷 英文名称:arctiin 分子式:C27H34O11 分子量:534.57 属木脂素类化合物。为无色结晶性粉末。
6、熔点110112。旋光度-51.5（c=2.0，乙醇）。 3.3检测的关键点对牛蒡子检测方法进行分析讨论后，认为造成检测结果差异较大的关键点包括：药材粉碎过筛后的样品处理方法超声处理的功率对照品溶液后续实验从这三个关键点展开。3.4药材的前处理3.4.1.药材粉碎过筛后取样的对比按四分法分别取两份样品，其中1份样品为样（在粉碎前进行称重30g），另一份为样（在粉碎前进行称重30g）。分别将两份样品粉碎后过三号筛，将不能粉碎的样品再进行粉碎，如此反复三至四次。样 在粉碎后获得通过三号筛网的样品（17.18g）和未能通过三号筛的样品（12.82g）。样则将通过三号筛的样品和未能通过三号筛的样品混合
7、均匀，进行取样测定。3.4.2.超声功率及取样的对比取样的两份平行样品，分别在不同的超声频率，下进行处理：供试品、KQ-500VDV超声仪；200W超声20min 供试品、KQ-500VDV超声仪；500W超声20min 供试品、取样的通过三号筛网的样品（17.18g）供试品、取样未能通过三号筛的样品（12.82g）3.4.3.对照品溶液比对考虑对照品溶液可能存在污染，存放时间过长等因素造成浓度变化，对实验结果可能造成影响。新领取1支未开封的牛蒡苷对照品，配成平行溶液与原对照品溶液进行比较检测。精密称定适量的牛蒡苷对照品（批号110819-201108,94.6%），11.95mg 9.20m
8、g，加甲醇制成浓度分别为0.4352mg/ml 0.5652mg/ml 的对照品溶液（配制日期2013年12月3日）。同时取浓度为0.3969mg/ml的牛蒡苷对照品溶液进行比对（配制日期2013年5月23日）。3.4.4供试品溶液的制备 按中国药典一部牛蒡子含量测定项下，取牛蒡子粉末（过三号筛）0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理（功率150W,频率20KHZ）20分钟，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。考虑两次结果相差偏大对样品处理从粉碎、超声频率和功率三方面进行了分别处理，处理方法如下：表1.样品前处理因素表处理方法来样日期粉碎粒度超声频率（KHZ）超声
9、功率（W）供试品2013.11.30三号筛混合全粉45200供试品2013.11.30三号筛混合全粉45500供试品2013.11.30三号筛过晒后上层样品45200供试品2013.11.30三号筛过晒后下层样品452003.5测定条件Waters高效液相色谱仪系统：色谱系统条件： ODS C18 ；色谱柱（4.6 250mm，5um）；柱温 35；流动相 甲醇-水（1:1.1） ； 流速0.8ml/min ； 检验波长280nm。自动进样器。3.6检测结果分别吸取对照品溶液及样品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，测定结果图谱如下：标准品牛蒡苷（1）样品三号筛过晒后上层样品（2）样品三号筛
10、过晒后下层样品（3）样品、三号筛混合全粉（4）四个差异较大图谱对比（5）以上五个个图谱，仅对有所差异的图谱进行截图。3.7数据处理及分析3.7.1.数据处理表2.实验结果表对照品浓度0.4352mg/ml0.5652mg/ml0.3969mg/mlRSD(%)供试品6.35.96.03.4供试品6.46.16.22.5供试品1.91.81.83.1供试品9.48.99.12.8注：牛蒡子含牛蒡苷不得少于5.0%。3.7.2.结果分析对单一供试品进行比较，对所配置对照品进行分析：表3.单一供试品结果表对照品浓度0.4352mg/ml0.5652mg/ml0.3969mg/mlRSD(%)供试品6
11、.46.16.22.5超声频率：500W分析：相同色谱条件下，对同一样品测定含量，外标法计算得到不同浓度下同一样品的含量RSD为2.5%，小于规定值3%，可以初步判定不存在由对照品配制引起的含量检测误差。对单一浓度进行比较，对不同处理方法的样品进行分析：表4.样品粒度不一样的结果表 实验条件样品粒度超声频率（W）对照品浓度含量（%）RSD(%)供试品三号筛全粉2000.4352mg/ml6.3/供试品三号筛过晒后上层1.8供试品三号筛过晒后下层9.4分析：由于牛蒡子为油脂性药材，经粉碎后不易过筛。、为一份样品总重30g经粉碎过筛后，不能通过三号筛的样品为样品，重量为12.82g，能通过三号筛的
12、为样品，重量为17.18g。样品测得含量为1.8%，样品测得含量9.4%，其中样品与湖南省药检所测得值（9.6%）RSD为1.5%。、样品对含量进行综合分析后，可以得到近似全粉含量为6.2%，与样品三号筛全粉测得含量为6.0%，两者RSD为2.3%，可知全粉测得含量与真实含量相符。超声处理（由于我公司超声波清洗仪最低频率为45KHZ，最小功率为200W，达不到药典要求，而采用与标准相近的方法进行测定）：表5.供试品超声功率的对比表实验条件超声功率（W）超声频率（KHZ）对照品浓度含量（%）RSD(%)20045KHZ0.4352mg/ml6.31.15006.4分析：取全部通过三号筛的全粉，分
13、别在超声频率45KHZ，超声功率200W和300W的条件下进行超声，测得的样品分别为样品和样品，含量分别为6.3%和6.4%，RSD为1.1%。说明在超声功率为200W时，牛蒡子的有效成分可以完全有效溶出。结论和讨论经实验分析可得，样品过筛时只取下层粉末时测得的含量远远高于样品全粉测得的含量，样品粒度的不一样，直接影响牛蒡子中牛蒡苷是否能有效的溶出。而我公司中成药品种银翘解毒丸（浓缩蜜丸）需对成品中牛蒡苷进行检测。按其工艺操作规程，所投料的牛蒡子为全粉投料，因此，换算成成品的含量时应按牛蒡子全粉测得含量进行换算，以减少投料偏差。牛蒡子含量测定方法前处理的修正：取牛蒡子粉末（过三号筛，未能过筛的
14、部分与下层粉末充分混匀）0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理（功率150W,频率20KHZ）20分钟，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。致谢感谢学校老师四年来对我的教育和培养，感谢九芝堂有限股份有限公司给我这次的实习机会，感谢论文指导老师桂老师对我论文的指导和建议。也让我体会到了许多不曾有的体会，在今后的生活和工作中必将积极向上，不拒小节。非常感谢。参考文献：1.中国药典 ，国家药典委员会，中华人民共和国2010版药典（一部），中国医药科技出版社，2010。2.王海燕，杨峻山，牛蒡子化学成分研究，药学学报，1993；28（12）；911-917。3.韩桂秋等，牛蒡子中血小板活化因子（PAP）受体拮抗剂的分离和结构鉴定，中草药，1992；23（11），563。4.阎凌霄，李亚明，牛蒡子提取物对小鼠免疫功能及血糖作用，西北药学杂志，1993；8（2），75-78。5.李会军等，高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A及B的含量，药物分析杂志，2000；20（2），82-84。6.赵灵芝等，高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定保元汤中黄芪甲苷的含量，时珍国医国药，2001；12 , 15。11