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1、ICS 13.100 C 52 中华人民共和国国家职业卫生标准 GBZ/T 300.1602017 代替 GBZ/T 160.81 2004 工作场所空气有毒物质测定 第 160 部分：洗衣粉酶 Determination of toxic substances in workplace air Part 160: Enzymes in washing powder 2017 -11 - 09发布 2018- 05 - 01 实施 GBZ/T 300.160 2017 I 前言 本部分为 GBZ/T 300的第 160部分。 本部分按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本部分代替
2、GBZ/T 160.81 2004工作场所空气有毒物质测定生物类化合物。 本部分与 GBZ/T 160.81 2004相比，主要修改如下： 修改了标准名称； 增加了待测物的基本信息； 改进了空气采样和标准系列浓度的表达； 补充了样品空白要求和方法性能指标。 本部分中的主要起草单位和主要起草人： 洗衣粉酶的溶剂洗脱- 抗体结合 - 比色法 主要起草单位：复旦大学医学院公共卫生学院。 主要起草人：梁友信。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GBZ/T 160.81 2004。 GBZ/T 300.160 2017 1 工作场所空气有毒物质测定 第 160 部分：洗衣粉酶 1 范围 GBZ/T
3、 300 的本部分规定了工作场所空气中洗衣粉酶的溶剂洗脱- 抗体结合 - 比色法。 本部分适用于工作场所空气中气溶胶态洗衣粉酶浓度的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GBZ 159 工作场所空气中有害物质监测的采样规范 GBZ/T 210.4 职业卫生标准制定指南第4部分：工作场所空气中化学物质的测定方法 3 洗衣粉酶的溶剂洗脱- 抗体结合 - 比色法 3.1 原理 空气中气溶胶态含酶洗衣粉用超细玻璃纤维滤纸采集，洗脱后，与包被在酶标板上的特
4、异性抗体 （Ab1）结合，然后加入特异性抗体（Ab2），最后与一连有标记物的抗体（Ab3）结合，再与显色剂反 应生成有色化合物，用酶标仪测量吸光度，测定酶的浓度。 3.2 仪器 3.2.1 超细玻璃纤维滤纸。 3.2.2 大采样夹，滤料直径为37mm 或 40mm 。 3.2.3 小采样夹，滤料直径为25mm 。 3.2.4 空气采样器，流量0L/min 2L/min 和 0L/min 10L/min 。 3.2.5 烧杯， 50mL 。 3.2.6 酶标板和酶标板盖。 3.2.7 多孔道微量加样器。 3.2.8 可调微量加样器。 3.2.9 恒温箱。 3.2.10 离心管， 25mL。 3.
5、2.11 具塞试管， 10mL 。 3.2.12 酶标仪。 3.3 试剂 3.3.1 实验用水为去离子水，试剂为分析纯，于4冰箱保存。 GBZ/T 300.160 2017 2 3.3.2 抗体包被缓冲液，pH9.60.2 ：0.151g 碳酸钠和0.293g 碳酸氢钠溶于100mL水中，可保存2 个月。 3.3.3 洗板液： 29.22g 氯化钠、 0.186gTris和 0.1g 牛血清白蛋白(BSA)溶于 100mL水中，用6mol/L 盐酸溶液调pH至 8.0 ，加入 0.05mL 吐温 20，混匀，可保存7d。 3.3.4 枸橼酸 - 磷酸缓冲液，pH5.00.2 ：0.730g 枸
6、橼酸和2.387g 磷酸氢二钠 (Na2HPO4?12H2O)溶于 100mL水中，可保存1 个月。 3.3.5 BSA封闭液： 2.0g BSA 溶于 100mL洗板液中。 3.3.6 洗脱液：2.922g 氯化钠、0.093g Tris 、 0.496g 硫代硫酸钠 (Na2S2O3?5H2O)和 0.0147g 氯化钙 (CaCl2 ?2H2O)溶于约 80mL水中，加入0.1g BSA ，溶解后，用6mol/L 盐酸溶液调pH至 8.0 ，转移到100mL容 量瓶中，定容后加入0.10mL 吐温 20，混匀，可保存7d。 3.3.7 邻苯二胺 （OPD ） 溶液， pH5.0：8.0m
7、g OPD置于 50mL棕色瓶中， 加入 15mL枸橼酸 - 磷酸缓冲液， 溶解后，加入5 L 过氧化氢 (30 ) ，混匀。临用前配制。若溶液变黄，应重新配制。 3.3.8 兔抗体包被溶液：用10mL抗体包被缓冲液稀释10 L 兔抗血清，混匀。 3.3.9 豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10 L 豚鼠抗体，混匀。 3.3.10 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10 L 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体， 混匀。 3.3.11 硫酸溶液， 1mol/L 。 3.3.12 标准酶，用国家认可的洗衣粉酶。 3.4 样品的采集、运输和保存 3.4.1 现场采样按照GBZ 159 执行。
8、 3.4.2 短时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的大采样夹，以5.0L/min流量采集15min 空气样品。 3.4.3 长时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的小采样夹，以1.0L/min流量采集2h8h 空气样品。 3.4.4 采样后，打开采样夹，取出 滤纸 ，接尘面朝里对折两次，放入清洁的塑料袋或纸袋中，置清洁 容器内运输和保存。样品宜尽快测定。 3.4.5 样品空白：在采样点，打开装好超细玻璃纤维滤纸的采样夹，立即取出 滤纸 ，放入 清洁的塑料 袋或纸袋 中， 然后同样品一起运输、保存和测定。每批次样品不少于2 个样品空白 。 3.5 分析步骤 3.5.1 样品处理：将
9、超细玻璃纤维滤纸放入烧杯内，加25.0mL 洗脱液，洗脱20min，不时振摇。样品 溶液用滤纸过滤或离心后供测定。 3.5.2 标准曲线的制备：在 8 支容量瓶中， 用标准酶配制成0.0ng/mL 6.0ng/mL 标准系列。 于酶标板 的每个孔中加100 L 兔抗体包被溶液，置4冰箱内放置过夜。加样时，加样头不可接触酶标板底部， 不容许冰冻。第二天，从冰箱内取出酶标板，翻转，弃去兔抗体包被溶液，在数层纸上拍打，甩尽孔中 的兔抗体包被溶液。每个孔用洗板液洗涤3 次，每次约250 L。然后加200 L BSA封闭液，加样头不能 接触酶标板。盖上酶标板盖，放置1h 以上。甩尽孔中液体。若不立即使用
10、，可用酶标板膜封好，可储 存 2 个月。向每个孔中加入50 L 标准酶溶液， 全部加平行样。 加入 50 L 豚鼠抗体。 将酶标板放入37 恒温箱内，反应90min。取出，每个孔用洗板液洗涤3 次，每次约250 L。各加入 100 L 标有过氧化物 酶的兔抗豚鼠抗体，再置 37恒温箱内， 反应 90min。 取出，每个孔用洗板液洗涤3 次，每次约 250 L。 用枸橼酸 - 磷酸缓冲液冲洗3 次。以保持同一时间间隔，向每个孔加入100 L OPD 溶液；放入37恒温 箱内， 反应至有合适的黄色生成；向每个孔以保持同一时间间隔，加入 150 L 硫酸溶液， 以终止显色反 GBZ/T 300.16
11、0 2017 3 应。擦净酶标板底部，用酶标仪测定每个孔的吸光度（双波长法的波长为492nm和 620nm）。以测得的 吸光度值对相应的酶浓度（ng/mL）绘制标准曲线或计算回归方程。 3.5.3 样品测定：用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和样品空白溶液，测得的吸光度值由标准 曲线或回归方程得样品溶液中酶浓度(ng/mL) 。若样品溶液中酶的浓度超过测定范围，用洗脱液稀释后 测定，计算时乘以稀释倍数。 3.6 计算 3.6.1 按 GBZ 159的方法和要求将采样体积换算成标准采样体积。 3.6.2 按式（ 1）计算空气中酶的浓度： 0 025 V C C. (1) 式中： C 空气中酶的
12、浓度，单位为微克每立方米（ g/m 3）； 25 样品溶液的体积，单位为毫升（mL) ； C0 测得的样品溶液中酶的浓度（减去样品空白），单位为纳克每毫升（ng/mL ）； V0 标准采样体积，单位为升（L）。 3.6.3 空气中的时间加权平均接触浓度（CTWA）按 GBZ 159 规定计算。 3.7 说明 3.7.1 本法按照GBZ/T 210.4 的方法和要求进行研制。本法的定量下限为0.05ng/mL ，定量测定范围 为 0.05 ng/mL6ng/mL ；以采集 75L 空气样品计， 最低定量浓度为0.017 g/m3；相对标准偏差为2 8，采样效率为95以上，洗脱回收率为90以上。 3.7.2 空气中共存物不干扰测定。 _